苦参功劳颗粒治疗鸡大肠杆菌病的Ⅲ期临床试验

高艳艳　高富红　张晓会　刘兴金

摘要：为了考察苦参功劳颗粒治疗鸡大肠杆菌病的临床效果，按照入选标准挑选662只大肠杆菌病自然发病鸡只进行试验。将662只鸡随机分为3个组，3个组分别为苦参功劳颗粒试验组（300只）、四黄止痢颗粒对照组（300只）、感染对照组（62只）。试验各组按推荐的临床给药途径和剂量进行给药，试验期间统计各组鸡群日均采食量、死亡率和给药组的治愈率。结果显示：苦参功劳颗粒按1.0g/L剂量饮水，连用5天，能减少大肠杆菌病引起的鸡只死亡，同时对疾病引起的采食量降低、生长发育受阻具有改善作用。结论：本试验为苦参功劳颗粒的临床应用提供了数据支持，同时建立了鸡大肠杆菌病的病例入选标准、疗效判定标准，为新兽药的临床评价提供参考方法。

关键词：苦参功劳颗粒；鸡大肠杆菌病；治愈率；

鸡大肠杆菌病是普遍存在的一种传染病，据统计，其发病率为11%～69%，死亡率为3.8%-72.9%，致死率为40.2%～90.3%，对养殖业危害严重。大肠杆菌致病性血清型众多，致病机理及发病情况复杂，目前的防控主要靠抗生素或化学合成的抗菌药物。近年来，耐药性问题日趋加重，临床上出现了多重、超强耐药菌株，大肠杆菌病的控制难度因而加大。我国中药资源丰富，利用中药来防治该病具有明显的优势，苦参功劳颗粒是由十大功劳、苦参、木香3种成分经过合理配比组成的复方制剂，有清热解毒，燥湿止痢的功效，经实验室验证对鸡人工感染大肠杆菌病具有治疗作用，为了进一步考察其临床效果，在养殖场选择自然发病鸡群开展了此实验。

1试验材料

1.1供试药品

苦参功劳颗粒：批号20140401，规格：每1g相当于原生药3q，洛阳惠中兽药有限公司。四黄止痢颗粒，批号：20130901，规格：100g：100g原生药，普莱柯生物工程股份有限公司。

1.2培养基及主要试剂

营养琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基、伊红美蓝琼脂培养基、营养肉汤培养基、革兰氏染液，均购于青岛海博生物技术有限公司。葡萄糖生化管、乳糖生化管、麦芽糖生化管、蔗糖生化管、甘露醇生化管、硫化氢生化管、葡萄糖磷酸盐蛋白胨水、枸橼酸盐生化管，购于杭州微生物试剂有限公司。靛基质试剂、甲基红（MR）试验试剂、伏普VP试验用试剂甲/乙液，杭州微生物试剂有限公司生产。

1.3试验地点及实验动物

洛阳市孟津县某养殖专业合作社肉鸡养殖户，主要养殖AA肉鸡，鸡场于2015年9月初购入鸡苗15，000只，分别饲养在A、B两栋鸡舍，其中A栋10，000只，B栋5，000只。于18日龄时观察到发病症状，鸡群整体精神差，部分鸡只出现精神沉郁、两翅下垂，嗜睡，排黄色稀便等症状。

2试验方法

2.1临床诊断

2.1.1临床症状与解剖学观察

鸡群于18日龄时开始发病，鸡群整体精神差，部分雞只出现精神沉郁、两翅下垂，嗜睡，排黄色稀便等症状，零星死亡。取死亡鸡只，以及从鸡群中挑选出现嗜睡呆立、卧地不起等发病严重鸡只进行解剖，主要表现为纤维素性心包炎、肝周炎，心、肝表面有纤维素或胶冻样物包裹，气囊增厚、浑浊症状，个别鸡十二指肠粘膜发红，有卡他性炎，肠壁变薄。

2.1.2实验室诊断

取心脏、肝脏病料，无菌条件下接种营养琼脂、麦康凯琼脂、伊红美蓝琼脂培养基，用无菌接种环划线，37℃培养20h，在麦康凯琼脂平板上长出桃红色或中心桃红的菌落，在伊红美蓝琼脂平板上长出紫黑色具有金属光泽的菌落。营养琼脂上均长出中等大小、半透明的露珠样菌落，挑取典型菌落，固定于载玻片上，革兰染色后镜检，观察到革兰氏阴性的小杆菌。

取纯化培养的新鲜细菌依次接种于葡萄糖蛋白胨生化管、蛋白胨水生化管、枸橼酸盐生化管、葡萄糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖、甘露醇发酵管、硫化氢生化管，35℃培养24h，取出。参考大肠艾希菌检查法进行IMViC试验，观察并记录试验结果。结果显示，分离到的细菌可分解葡萄糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖、甘露醇，产酸产气，VP试验阴性，MR试验阳性，不利用枸橼酸盐。

根据发病鸡群的临床症状、剖检变化和试验室诊断结果，该鸡群为大肠杆菌病。

2.2发病鸡只的判定标准及发病鸡只挑选

发病鸡的挑选标准如下：

有明显拉稀症状鸡只：观察到拉稀或肛门周围有粪便污染。

精神沉郁，羽毛松乱，驱赶鸡群后可以走动。

上述2个发病标准符合其中一条即入选为病鸡。驱赶不动、卧地不起的重病鸡只不作为试验鸡只，进行淘汰。

根据上述标准，2栋鸡舍共挑出发病鸡只691只，其中A栋448只，B栋243只，发病鸡群用网与正常鸡群隔开。

2.3苦参功劳颗粒治疗鸡大肠杆菌病的临床试验

2.3.1受试动物分组及给药

691只发病鸡只，试验前死亡16只，淘汰13只卧地不起的严重鸡只，剩余662只用于试验，A栋鸡舍429只，B栋鸡舍233只。

将A栋鸡舍300只病鸡分为A组（苦参功劳颗粒试验组），62只为C组（感染对照组）；A栋剩余67只转入B栋鸡舍，与B栋鸡舍233只合为B组（四黄止痢颗粒对照组）。挑出的发病鸡用网隔开，单独饲养。给药组于20日龄时开始给药，连用药物5天，试验动物分组与处理详见表1。

2.3.2观察指标

试验期间，每天早上9：00观察鸡群的精神状态（有无羽毛松乱、翅膀下垂、闭眼缩颈）、行为活动（给料后抢食、饮水）、对刺激的反应性（鸡群驱赶后的表现）、粪便状态，记录试验鸡群的临床症状变化和死亡情况，对死亡鸡只及时进行病理剖检，观察内脏器官病理变化，并取肝脏、心脏等组织接种麦康凯琼脂，观察细菌生长情况，连续观察至给药结束14d。

2.3.3疗效判定指标

2.3.3.1死亡率

试验期间，出现死亡的鸡只，经剖检有大肠杆菌典型症状，无菌采集死亡鸡只肝脏、心脏，接种麦康凯培养基，分离到大肠杆菌者，判断为大肠杆菌致死。

死亡率（%）=该组发病死亡鸡只数/该组试验鸡只数×100%

2.3.3.2治愈率

有大肠杆菌发病症状的鸡只经饮水给药后，临床症状减轻，试验结束时存活且未见精神沉郁、两翅下垂、反应迟钝、离群呆立、排黄白色稀便等症状中2种或2种以上症状，判为治愈。

治愈率（%）=该组治愈鸡只数/该组试验鸡只数×100%

2.3.3.3日均采食量

试验期间，每天上午9：00按重量加入饲料，次日9：00称取余料重量，并加入新的饲料，根据给料重量和余料重量，计算各组鸡群的日均采食量。

2.3.3.4增重率

分别于试验开始时和试验结束时，称取各组鸡只总重，以试验开始时和试验结束时平均体重为指标，计算试验期间各组鸡群的增重率。

2.4数据处理

实验数据用百分数表示，用卡方检验进行显著性检验，各组之间显著性用P值表示，其中0.01

3试验结果

3.1苦参功劳颗粒对病鸡临床症状的影响

试验期间，苦参功劳颗粒试验组、四黄止痢颗粒对照组鸡群经给药治疗后，第3天鸡群精神明显好转，给药5d后除个别鸡只外大群精神恢复正常。C组感染对照鸡群在3d后症状明显加重，死亡鸡只明显增多，鸡群中部分鸡只精神极度沉郁、翅膀下垂、闭目缩颈、食欲废绝，卧地不起，最终死亡。

3.2苦参功劳颗粒对大肠杆菌病鸡死亡率的影响

苦参功劳颗粒按1.0g/L剂量混饮治疗后，从第3天开始死亡鸡只数逐日减少，给药5d后死亡停止。感染对照组从第3天起死亡率明显增高，第8天后死亡率下降，12d后不再死亡。试验期间的死亡鸡只，剖检可见肝脏肿大，表面覆盖一层白色纤维素伪膜，气囊增厚，浑浊，心脏有心包炎，心包内有大量纤维素性渗出物。各组死亡率、治愈率结果详见表2。

从表2可以看出，与感染对照组相比，苦参功劳颗粒试验组鸡群试验期间死亡率极显著降低（P≤0.01），四黄止痢颗粒对照组死亡率显著降低（0.01

3.3苦参功劳颗粒对鸡群采食量的影响

试验期间，苦参功劳颗粒和四黄止痢颗粒组鸡群给药第2天，采食量即出现小幅度增加，从第3天起开始鸡群采食量明显增加。试验期间，苦参功劳颗粒试验组和四黄止痢颗粒对照组鸡群从给药后第3天开始，采食量高于感染对照组。其中，苦参功劳颗粒试验组鸡群采食量在一定程度上略高于四黄止痢颗粒对照组，给药后14d，感染对照组与四黄止痢颗粒对照组日均采食量相当。

从给药当天开始，试验各组第1天、2天、3天、5天、7天、14天平均采食量见表3。

从表3可以看出，发病鸡群给予苦参功劳颗粒后，鸡群日均采食量高于感染对照组，说明苦参功劳颗粒可提高鸡群食欲，有增加采食量的作用。

3.4苦参功劳颗粒对鸡群增重率的影响

试验期间各组鸡群称重结果及增重情况见表4。

从表4可以看出，苦参功劳颗粒试验组、四黄止痢颗粒对照组在试验期间增重率分别为161.3%、146.7%，均高于感染对照组115.4%，说明苦参功劳颗粒在一定程度上对大肠杆菌病引起的鸡只生长发育受阻具有改善作用。

4讨论与分析

4.1发病鸡的判断标准

发生大肠杆菌病后，病鸡表现精神沉郁，羽毛松乱，两翅下垂，闭眼缩颈，拉稀，肛门周围有粪便污染。严重感染病鸡离群呆立，卧地不起，驱赶无反应，解剖后出现心包炎、肝周炎、气囊炎等症状，因这部分病鸡心脏、肝脏功能严重受损，鸡只濒临死亡，药物未发挥作用时鸡只可能已经死亡，治疗意义不大，故不把其纳入试验鸡只。因此仅把拉稀和精神沉郁作为挑选鸡只的标准，设定发病鸡的挑选标准如下：

有明显拉稀症状鸡只：观察到拉稀或肛门周围有粪便污染。

（2）精神沉有B，羽毛松乱，驱赶鸡群后可以走动。

4.2苦参功劳颗粒对鸡群采食量和增重率的影响

发病鸡群投喂苦参功劳颗粒后，鸡群日均采食量和试验期间的总增重高于感染对照组，说明苦参功勞颗粒对鸡群感染大肠杆菌后的采食量下降、增重受阻具有抵抗作用。可能的原因是鸡群应用中药治疗后，中药的整体调理作用使鸡群代谢功能得以恢复，苦参功劳颗粒中含有木香，木香具有行气止痛、健脾和胃，可用于治疗脾胃气滞等诸症。机体在感染湿热病邪后，气机不畅，运化功能失常，出现食欲下降，腹泻，消瘦等症状。木香行气健脾，提升机体采食量，提高饲料转化率，故给药组日均采食量和总增重高于感染对照组。

5结论

苦参功劳颗粒按1.0g/L剂量饮水，连用5d，能减少大肠杆菌病引起的鸡只死亡，同时对疾病引起的采食量降低、生长发育受阻具有改善作用。本试验为苦参功劳颗粒的临床应用提供了数据支持，同时建立了鸡大肠杆菌病的病例入选标准、疗效判定标准，为新兽药的临床评价的提供参考方法。