白头翁汤及其拆方对cAMP—磷酸二酯酶活性影响的研究

姚星丞　李佳

摘要：通过检测白头翁汤水提物及其组方的各单味药对中性粒细胞cAMP-磷酸二酯酶（PDE）活性的影响，探讨其抗炎机理。结果表明白头翁汤较其组方的各单味药对中性粒细胞cAMP-PDE的抑制作用更强；白头翁汤组方中备单味药对中性粒细胞cAMP-PDE活性抑制作用是以黄连为主。该研究显示白头翁汤水提物可能是通过抑制cAMP-PDE活性，升高炎症细胞cAMP水平发挥抗炎作用。其抗炎成分及机理有待于进一步研究。

关键词：白头翁汤；拆分方；磷酸二酯酶

白头翁汤出自张仲景的《伤寒论》，组方严谨，仅由白头翁、黄连、黄柏、秦皮四味中药组成，功擅清阳明之湿热，泄厥阴之郁火，解血分之热毒，治湿热之痢。现代研究发现，白头翁汤具有高效的抗炎及修复溃疡的作用，而临床上常见炎症性疾病多与中性粒细胞的炎性反应密切相关。磷酸二酯酶（PDE）可以通过调节细胞内cAMP水平发挥抗炎作用，本试验通过检测白头翁汤水提物及其各味拆分方对中性粒细胞PDE活性的抑制作用，初探其抗炎的相关机理与效果，为白头翁汤的临床应用提供试验依据。

1材料与方法

1.1主要试剂

cAMP、Rolipram、PBS（pH值7.4）、钙镁PBS（pH值7.4）、中药白头翁、黄连、黄芩、黄柏饮片（购自北京同仁堂药店）。

1.2白头翁汤及其备组方单味药水提物的制备

白头翁汤及其各拆分方单味药物水提物的制备方法参照韩太云等人的方法，将购买的白头翁等饮片用蒸馏水淋1次，加蒸馏水煎煮2次，煎液减压浓缩至1g/mL生药。加无水乙醇使其浓度达到70%，边加边搅拌，4℃放置24h，取上清液用氢氧化钠调pH值为7.5～8.0，放置12h，取上清液挥发掉乙醇，将药液浓缩至1g/mL生药。放置12h，离心取上清液浓缩干燥，得白头翁汤及其四味拆分方单味药的水提物。

1.3中性粒细胞cAMP-PDE活性检测

中性粒细胞cAMP-PDE活性影响的检测方法参考张冰等的方法。cAMP浓度为100μmol/L，白头翁汤等水提物的反应浓度为10mg/mL，阳性对照为Rolipram，反应浓度为100μmol/L，均用PBS配制。空白組：cAMP 40μL；对照组：cAMP40μL、酶样品20μL；白芍水提物组：cAMP 40μL、白头翁汤等中药水提物10μL、酶样品20μL；Rolipram组：CAMP 40μL、Rolipram10.0μL、酶样品20μL，所有体系加PBS补足100μL。

1.4数据处理

PDE活性以底物水解百分率表示：PDE活性=（空白对照管底物浓度-对照管或中药管底物浓度）×10%/空白对照管底物浓度；中药对PDE的抑制率用以下公式表示：PDE活性抑制率%=（对照管PDE活性-中药管PDE活性）×10%/对照管PDE活性。

2结果与分析

2.1白头翁汤水提物对中性粒细胞cAMP-PDE活性的影响

白头翁汤水提物在10mg/mL的反应浓度下，能极显著的抑制cAMP-PDE4的活性（P<0.001），其抑制率显著高于Rolipram组。结果见表1。

2.2白头翁备拆分方水提物对中性粒细胞cAMP—PDE活性的影响

结果显示四味白头翁汤拆分方单药中，黄连抑制cAMP-磷酸二酯酶活性作用效果最强，其次为黄柏。结果见表2。且白头翁汤对cAMP-磷酸二酯酶活性的抑制作用效果优于其各味拆分方。表2白头翁汤拆分方水提物及Rolipram对

3讨论

考虑到传统中药均采用水煎煮的方法，水溶性成分可能更能真正代表其传统作用成分。因此，本试验通过水提醇沉法提取了白头翁汤及其拆分方的四味中药中的水溶性成分，检测其对cAMP-PDE活性的影响。cAMP具有抑制中性粒细胞活化及前列腺素E2过渡合成的作用。PDE是cAMP的唯一水解酶，对调节细胞PDE水平起着关键性作用。结果表明，白头翁汤水提物对中性粒细胞中cAMP-PDE活性具有极显著的抑制作用，其作用优于白头翁汤各拆分方。因此，白头翁汤水提物的作用可能是通过抑制PDE活性，升高cAMP水平，进而发挥良好的抗炎效果。本实验为进一步研究白头翁何种成分通过调节cAMP-PDE活性发挥抗炎作用影响奠定基础。