标本状态对糖化血红蛋白检测结果的影响

李熙建，何凌波，严 羽，张立营，陈 朴

(四川省宜宾市第一人民医院检验科 644000)

糖化血红蛋白(HbA1c)是一项反映糖尿病病情进展和评估慢性并发症风险的一项重要指标[1]，对其相关标准及影响因素的了解、分析和掌握，以保证检验结果的准确性、精密性和可比性，为临床提供有质量保障的检验结果，是实验室检验人员的职责。HbA1c的检测较传统血糖检测有较明显的优势，包括分析前不稳定小，生物变异小，无需空腹或特定的时间抽血等，所以在临床上的应用更广泛。一些资料指出，严重的高三酰甘油血症、高胆红素血症和尿毒症均可引起HbA1c假性升高[2-4]。这几种情况的影响应当视不同的检测方法学而定，不同的检测方法检测原理不同，抗干扰性能也不同，所以受影响的程度也不一样。本文用具体的试验数据来分析、验证高三酰甘油、高胆红素和溶血对阳离子交换高效液相色谱法(IE-HPLC)检测HbA1c是否有影响及具体影响情况，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取本院门诊、住院及健康体检者标本80份，其HbA1c水平在2.9%～17.2%。收集多天、多例患者标本，混匀，进行检测，其三酰甘油(TG)水平为21.6 mmol/L、胆红素(BiL)水平为306 μmol/L。

1.2方法

1.2.1仪器与试剂 Arkray HA8180全自动糖化血红蛋白分析仪及配套试剂、校准品、质控品和配套耗材[爱科来国际贸易(上海)有限公司]，并按厂家要求更换防护片和分析柱，采用反相阳离子交换层析法。其校准品以国际临床化学与检验医学联合会标准物质作为溯源终点，确保溯源至美国国家糖化血红蛋白标准化计划值BW3626(低)、BW3625(高)，本次校准品低值为5.3%，高值为10.4%。室内质控品测定值均符合质控规则要求。

1.2.2精密度检测 选取低、中、高值水平(4.6%、7.2%、12.1%)进行精密度试验。不同水平每天不同时间测定5次，连续测定6 d，分别得出批内和批间变异系数(CV)。

1.2.3TG干扰试验 将收集多天、多例患者得到的高TG混合血浆(水平为21.6 mmoL/L)，保留一部分原水平标本(20 mL),然后将该水平用生理盐水按3∶4、2∶4、1∶4的比例进行稀释，形成21.6、16.2、10.8、5.4 mmoL/L 4种不同的水平。然后分别加入到预先挑选出来的HbA1c试验标本中(共80份)。将80份分为4组，每组20份，每组标本均包括低、中、高不同水平，其水平范围在2.9%～17.0%。在每一测定标本中，分别加入上述水平的TG混合血浆1 mL，混匀，上机进行检测，对数据进行比较分析。

1.2.4BiL干扰试验 将收集多天、多例患者得到的BiL混合血浆(水平为306.0 μmoL/L)，按不同比例与生理盐水进行稀释，使BiL形成306.0、229.0、153.0、76.5 μmoL/L 4种不同水平，然后采用与TG干扰试验相似的方法，分别加入到预先挑选出来的HbA1c试验标本中(共80份)。80份标本分为4组，每组20份，水平范围3.9%～17.2%，包括低、中、高不同水平。在每一测定标本中，分别加入上述水平的BiL混合血浆1 mL，混匀、检测、分析。

1.2.5对溶血的影响 选取不同水平标本20份，HbA1c水平范围4.1%～16.2%，然后对标本中的红细胞进行破坏，致使其溶血，再进行检测和数据统计，分析当有外在条件造成溶血时，其检验结果是否受到影响及具体影响。

2 结 果

2.1不同HbA1c水平时批内和批间精密度比较 见表1。通过对不同水平各30个精密度数据的分析发现，批内、批间CV均小于1%，说明该仪器的精密度性能优良。

表1 仪器精密度性能检测情况

2.2不同水平TG对HbA1c检测结果的影响 将4种不同水平(5.4～21.6 mmoL/L)的TG加入到不同水平(2.9%～17.0%)的HbA1c标本管中，采用IE-HPLC检测HbA1c结果无明显影响(P>0.05)，其数据的分布也是随机波动，并未受到因加入水平的不同而出现趋势性变化，见表2。

表2 不同水平TG对检测结果的影响(n=20)

2.3不同水平BiL对HbA1c检测结果的影响 将4种不同水平的BiL加入到不同水平(3.9%～17.2%)的HbA1c标本中进行测定，见表3。通过配对计量资料t检验示t值较低，均小于1，按t临界值表示t0.05/2.19=2.093,得P>0.05，说明其检测结果差异无统计学意义。从对数据的观察分析可知，HbA1c未受不同水平BiL的干扰而出现趋势变化。

2.4同一标本在溶血前后检测结果的变化情况 通过对20例HbA1c不同水平(4.1%～16.2%)标本进行溶血前后检测的数据显示，其结果波动范围为-0.2～0.2，差值均数0.02，差值、标本标准差0.083 4，提示IE-HPLC对HbA1c的检测不受是否溶血的影响(t=1.073 1,P>0.05)。

表3 不同水平BiL对HbA1c检测结果的影响(n=20)

3 讨 论

HbA1c作为糖尿病最新筛查、诊断、血糖控制和疗效考核的有效检测指标，发挥着较重要的作用。实验室工作人员致力于仪器的优化和了解各种因素对检测方法的影响，以减小临床误诊或漏诊，来提高检测结果的正确度是检验工作人员做好本职工作的重点之一。

通过试验分析高三酰甘油、高胆红素及溶血对IE-HPLC检测HbA1c时的影响情况，目的在于监测该检测方法的性能，了解检验过程中是否存在问题，以达到掌握、控制系统稳定性的目的。

本研究的初衷是验证文献[2-4]中报道的一些观点，文中提到的严重高三酰甘油血症、高胆红素血症对HbA1c的检测结果有影响。作者查阅了较长一段时间的资料，均未发现相关影响的具体数据。而本文作者认为，检测方法不同，其抗干扰的性能也会有所不同，于是才进行本研究的试验设计和得出了一系列具体试验数据，证明了就IE-HPLC检测HbA1c而言，BiL、TG、溶血这几项影响因素均不会对检测结果造成统计学意义上的影响，其检测值是可信的，符合临床要求。

HA8181分析仪检测HbA1c是通过反相阳离子交换层析法检测，通过溶血，洗涤液稀释的血液标本送到层析柱，层析柱根据HPLC将此标本分离为多种血红蛋白成分，通过双波长比色法检测从层析柱洗脱的各成分，用微型计算机处理所得结果，从而获得峰鉴别和水平。它的计算公式采用HbA1c峰面积/ΣHbA峰面积[5]，由于HbA1c的检测与传统空腹血糖和餐后2 h血糖比较，它有生物变异小，分析前不稳定小，无需空腹或特定时间抽血，受应激性(如应激、疾病相关)血糖波动的影响较小，能反映长期血糖和慢性并发症风险，可用于指导糖尿病的管理和治疗方案的调整，且已根据美国糖尿病控制和并发症试验或英国前瞻性糖尿病研究方法标准化和校准等优点[5]，越来越受到更多的欢迎与采用。所以，对其影响因素的探讨和具体影响情况的分析，乃至更为全面的了解，就显得尤为重要。

本研究显示，总CV为0.77%～0.82%，而BARGA等[6]根据生物学变异数据推荐的HbA1c测定分析质量目标为日间CV<2%。我国卫生行业标准规定的实验室内CV应不超过3%，且尽量控制在2%以内[7]。说明本仪器的精密度达到了比较优秀的水平，这是本研究进行其他试验与分析的前提与基础。检验质量的全面掌控涉及检验分析过程的前、中、后多个阶段。采血顺利与否，标本抗凝与保存，以及离心力与离心时间等原因，极易造成检测标本溶血；而患者的饮食及身体状况，以及一些临床治疗，也容易使标本出现脂血等情况；肝功能受损时引起糖代谢紊乱，出现糖耐量异常，甚至显性糖尿病，长期血糖波动会进一步促进肝纤维化形成，影响肝病预后，以及其他疾病或相关并发症的出现，均可造成BiL升高[8]。这也是本研究选取溶血、脂血、BiL作为监控和此次分析的重点和目标的原因，同时，这几种影响因素也是在检验分析中最常见的影响因素。

通过本研究的数据分析，明确了对IE-HPLC，尤其对Arkray HA8180分析仪而言检测HbA1c，当BiL<306 μmoL/L、TG<21.6 mmol/L，以及在采血、运输过程中造成细胞外溶血，这些影响因素对检测结果差异均无统计学意义(P>0.05)，其精密度、抗干扰性、准确性均较好，完全满足临床对HbA1c检测的需求。同时也说明不同检测方法的抗干扰能力有差别，有的抗干扰能力较强，几乎不受其干扰因素的影响。只有对检测方法作出正确的方法学评价，才能对检验结果的准确性和检验质量的提高做到心中有数，更好地为患者和临床提供服务。