结核感染T细胞斑点试验在结核性脑膜炎诊断中的价值

张丽婷 张齐龙 叶琳 况卫丰 段允和

[摘要]目的 研究结核性脑膜炎患者采取结核感染T细胞斑点试验（T-SPOT.TB）诊断的临床价值。方法 选取2016年3月～2017年10月我院收治的30例可疑的结核性脑膜炎患者作为研究组，另选取35例无结核原发病灶的脑膜炎患者作为对照组，均进行T-SPOT.TB试验，观察两组的诊断结果。结果 所有患者经过T-SPOT.TB试验，诊断结果的阳性率为76.67%（23/30），明显高于对照组的14.29%（5/35）（P<0.05）。结论 T-SPOT.TB试验在结核性脑膜炎诊断中具有重要意义，能够明显提高诊断结果的准确性，快速诊断疾病。

[关键词]脑膜炎；结核感染T细胞斑点试验；结核病；诊断价值

[中图分类号] R181.3 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2018）11（c）-0074-03

[Abstract] Objective To study the clinical value of T-cell spot of tuberculosis （T-SPOT.TB） in the diagnosis of tubercular meningitis. Methods A total of 30 suspected patients with tubercular meningitis treated in our hospital from March 2016 to October 2017 were selected as the research group， and 35 non-TB primary meningitis patients were selected as the control group. The T-SPOT.TB test was applied to observe its diagnosis results. Results After the T-SPOT.TB test in the cerebrospinal fluid， the positive diagnosis rate in the research group was 76.67% （23/30）， which was significantly higher than that in the control group （14.29%[5/35]）（P<0.05）. Conclusion The T-SPOT.TB test is of great importance to improve the diagnosis accuracy and make an early diagnosis of tubercular meningitis.

[Key words] Meningitis； T-cell spot of tuberculosis； Tubercular； Diagnosis value

结核性脑膜炎是指结核分枝杆菌经过血液循环或者其他途径进入患者脑内，从而造成中枢神经系统结核病。加之疾病极易牵连脑膜受损，同时可对脑实质、脑动脉、脊髓以及脑神经产生侵犯，成为临床上威胁人们生命安全的主要疾病[1]。由于患者一般起病较为缓慢，大部分患者主要表现为间断性头痛，基本可以忍受，可能耽误就诊时间，甚至被误诊为其他原因所致的头痛。若临床上未及时采取有效治疗，随着病情不断加重，患者可能产生严重后遗症，甚至死亡，因此如何选择准确有效的诊断方式成为临床研究重点[2-3]。本研究选取我院收治的30例可疑的结核性脑膜炎患者与35例无结核原发病灶的脑膜炎患者作为研究对象，旨在探讨结核感染T细胞斑点试验（T-SPOT.TB试验）在结核性脑膜炎患者诊断中的价值，现报道如下。

1资料与方法

1.1一般资料

选取2016年3月～2017年10月我院收治的30例可疑的结核性脑膜炎患者作为研究组，另选取35例无结核原发病灶的脑膜炎患者作为对照组。研究组男19例，女11例；年龄16～72岁，平均（43.8±2.9）岁；均经过抗结核化疗后出现好转或者痊愈。对照组男21例，女14例；年龄18～72岁，平均（44.1±2.8）岁；病毒性脑膜炎16例，化脓性脑膜炎14例，隐球菌性脑膜炎5例。两组的一般资料比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。本研究已经我院医学伦理委员会批准同意。

纳入标准：①研究组患者主要的临床表现为头痛、发热等，仅MRI检查显示为脑积水，并伴有肉芽增生，怀疑为结核性脑膜炎[4]。②所有患者及家属同意并自愿加入本次研究中。③资料齐全者。

排除标准：①合并严重心脑血管疾病者。②合并精神类疾病者，无法配合研究。③妊娠或者哺乳期婦女[5]。

1.2方法

收集所有患者的血液（5 ml），将其置于含有肝素锂抗凝剂的试管中，严格按照T-SPOT.TB试验流程，在Ⅱ级别的安全柜中完成操作。另外收集患者含有肝素锂抗凝剂的外周静脉血（5 ml），置于淋巴细胞分离液中（6 ml），利用密度梯度离心方式收集单个核细胞层。最后由经验丰富的检验人员在无菌操作下，将外周血细胞标本浓度调整至2.5×106个/ml的工作液待检。

选取细胞悬液100 μl置于预包被IFN-γ的PVDF板，每个样本均设置测试孔A、B作为阴性对照，阳性对照4个孔。其中阴性对照中仅含有细胞悬液，阳性对照中放置植物血凝素（5 UL），选择抗原ESAT-6与CFP-10分别加入实验孔中，记为A、B，同时放置于5%的 CO2孵箱中，温度维持37℃，时间控制在16～24 h，最后放入显色剂，静置7 min，查看吸水纸的终止反应。

1.3观察指标

利用全自动读板仪器计算斑点，测试孔A、B的阳性判断标准：阴性对照孔斑点数在0～5，测试孔A与B的斑点数-阴性对照组孔斑点数≥6；阴性对照孔斑点数≥6时，测试孔A与B的斑点数≥2倍阴性对照组孔斑点数。

1.4统计学方法

采用SPSS 18.0统计学软件对数据进行分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用t检验，计数资料采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

两组外周血下T-SPOT.TB试验阳性率比较，研究组诊断阳性23例，阳性率为76.67%，对照组诊断阳性5例，阳性率为14.29%，研究组诊断结果的阳性率高于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）。

3讨论

近年来，我国结核性脑膜炎发生率日趋增长，临床主要通过患者的临床表现以及积液性质进行疾病诊断，虽然取得了一定的诊断价值，但极易出现漏诊误诊现象，耽误最佳治疗时间[7-8]。随着疾病不断进展，患者可能出现意识障碍、颅内压升高、癫痫以及截瘫等，直接降低生活质量，并严重威胁患者生命安全[9-10]。若临床上未及时发现，可能直接影响患者治疗及预后，因此如何迅速并准确判断疾病成为医疗界研究重点。

结核性脑膜炎属于常见的肺外结核类型，既往多采取免疫法、微生物法等进行诊断。随着检验技术不断发展与完善，常规诊断方式已经无法满足临床要求，经过多次研究后发现，采取T-SPOT.TB试验诊断效果较好，主要检测受结核菌特异性抗原刺激后，产生干扰素的外周血特异性T细胞情况，从而明确结合感染[11-12]。相关报道中显示，活动性肺结核分值杆菌感染患者采取T-SPOT.TB试验进行诊断，结果的敏感度较高[13]。但目前我国关于T-SPOT.TB试验在结核性脑膜炎诊断中的报道较少，本研究中将外周血应用于T-SPOT.TB试验中，结果显示研究组诊断结果的阳性率为76.67%，高于对照组的14.29%（P<0.05），提示研究组外周血下T-SPOT.TB试验结果的阳性率、灵敏度及特异度较高，能够准确区别结核性脑膜炎与无结核原发病灶的脑膜炎，为患者治疗方案的选择提供保障。T-SPOT.TB试验中将患者血液作为检验样本，获得方式较为简便。同时从单个细胞水平检验，能够快速获得细胞周边分泌的细胞因子，因此敏感性较高，耗时较少，临床可快速得到结果[14-15]。另外T-SPOT.TB试验经过观察效应T淋巴细胞来观察机体中是否含有病原体，为治疗效果的评估提供参考依据[16]。

综上所述，T-SPOT.TB试验在结核性脑膜炎诊断中具有重要意义，可进一步提高阳性率，保证诊断结果的准确，为患者治疗及预后提供保障。

[参考文献]

[1]白文静，胡型忠，施伎婵，等.外周血结核感染T细胞斑点试验在结核病中的应用价值研究[J].浙江医学，2015，37（14）：1209-1211，1218.

[2]Nagdev KJ，Bhagchandani SP，Bhullar SS，et al.Rapid diagnosis and simultaneous identification of tuberculous and bacterial meningitis by a newly developed duplex polymerase chain reaction[J].Indian J Microbiol，2015，55（2）：213-218.

[3]吴长静.脑脊液与外周血T-SPO T.TB检测在结核性脑膜炎诊断中的临床应用价值[J].国际检验医学杂志，2017， 38（22）：3122-3124.

[4]Mzinza DT，Sloan DJ，Jambo KC，et al.Kinetics of Mycobacterium tuberculosis-specific IFN-gamma responses and sputum bacillary clearance in HIV-infected adults during treatment of pulmonary tuberculosis[J].Tuberculosis（Edinb），2015，95（4）：463-469.

[5]吕翠环，郑立恒，王红，等.T-SPOT.TB与结核蛋白芯片检测在结核性脑膜炎辅助诊断中的对比分析[J].河北医科大学学报，2015，36（11）：1345-1347.

[6]李君莲，李东军，玛力亚木·古丽比克，等.T 细胞斑点试验对结核性脑膜炎的诊断价值[J].中国实用神经疾病杂志，2015，18（12）：100-101.

[7]程红燕，王东萍，包训迪，等.血T-SPOT检测在结核性脑膜炎诊断中的应用价值[J].中华临床医师杂志（电子版），2017，11（2）：357-360.

[8]Cox JA，Lukande RL，Kalungi S，et al.Accuracy of lipoarabinomannan and xpert MTB/RIF testing in cerebrospinal fluid to diagnose tuberculous meningitis in an autopsy cohort of HIV-infected adults[J].J Clin Microbiol，2015，53（8）：2667-2673.

[9]崔中鋒，刘春礼，李格，等.T-SPOT.TB在结核性脑膜炎早期诊断中的价值[J].中国实用神经疾病杂志，2016，19（16）：97-98.

[10]李明琴，杨红.T-SPOT-TB检测法在结核性脑膜炎早期诊断中的应用分析[J].医学综述，2016，22（23）：4753-4755.

[11]王智存，白广红，王新宏，等.结核性脑膜炎实验室检测新进展的临床评价[J].检验医学与临床，2016，13（Z1）：119-121.

[12]吴小慧，汪峰，孙自镛，等.T-SPOT.TB试验中TBAg/PHA比值在结核性脑膜炎早期诊断中的应用[J].神经损伤与功能重建，2018，13（1）：20-22，25.

[13]马燕粉，李英，武倩，等.影像学及实验室检查在结核性脑膜炎早期诊断中的应用研究[J].国际检验医学杂志，2017，38（4）：444-446.

[14]易思思，罗如平，孙开胜，等.几种结核菌感染检测方法在儿童结核性脑膜炎早期诊断中的应用[J].医学临床研究，2015，32（12）：2437-2439.

[15]甘路民，罗如平，廖亦男，等.T 细胞斑点试验在小儿结核性脑膜炎诊断中的临床应用[J].医学临床研究，2015， 32（11）：2241-2242.