脑胶质瘤组织XIAP、Caveolin-1蛋白表达及意义

孙萍，周丽莉，张瑞丽，张乃方，许青霞

(郑州大学附属肿瘤医院检验科，河南 郑州450008)

脑胶质瘤的病情持续性进展，能够导致患者病死率的显著上升。流行病学研究显示，脑胶质瘤的发病率可达323～556/10万人左右[1]。脑胶质瘤的复发率较高，治疗后的病情缓解率较低，整体临床预后不佳[2]。不同的生物学因子的改变，能够通过促进癌细胞的浸润、增殖或者凋亡等病理过程的改变，进而参与到脑胶质瘤的发生发展过程中。X连锁凋亡抑制蛋白 （X linked apoptosis suppressor protein，XIAP）的高表达，不仅能够抑制癌细胞凋亡，提高癌细胞的持续性增殖的风险，同时还能够诱导癌细胞的分化障碍，增加低分化的风险[3，4]；窑蛋白 1（Caveolin－1）的异常表达，能够提高癌细胞的氧化应激损伤，促进肿瘤相关蛋白myc的上游转录因子的激活，参与到脑胶质瘤的扩散及病情复发过程中[5]。部分研究已经探讨了XIAP在脑胶质瘤患者中的高表达表现，认为XIAP的高表达是促进患者癌细胞的异型性、病理分级等进展的重要原因，但对于XIAP与脑胶质瘤临床预后的关系研究不足。为了进一步探讨XIAP、Caveolin－1蛋白与脑胶质瘤的关系，从而为临床上患者的病情评估提供参考，本研究选取2013年1月至2015年12月我院保存的脑胶质瘤标本59例，探讨了相关蛋白的差异性表达情况，报道如下。

1 资料与方法

1．1 一般资料 选取2013年1月至2015年12月我院保存的脑胶质瘤标本59例，其中男性32例，女性27例；年龄29～62岁，中位年龄49岁。纳入标准：⑴均为初治治疗患者；⑵在我院接受手术治疗，术后病理证实为脑胶质瘤；⑶临床随访资料完整。排除标准：⑴术前接受过放化疗等治疗；⑵合并有其他恶性肿瘤；⑶临床随访资料不完整。同时选取瘤旁组织（距肿瘤组织＞2cm）作为对照组。

1．2 检测方法 采用石蜡切片脱蜡至水，采用离子水进行反复洗涤，加入牛奶液体封闭抗体，封闭时间为5min，加入XIAP和Caveolin－1蛋白抗体（鼠来源，ABCUM公司），37℃孵育2h，采用磷酸盐缓冲液洗涤3次，滴加荧光染色标记的二抗抗体（购自abcum公司），37℃孵育30min，加入磷酸盐缓冲液进行洗涤，采用南京凯基生物制剂公司生产的显色剂进行显色，封片，镜下观察。

1．3 结果判断 XIAP蛋白阳性表达于细胞浆中，Caveolin－1蛋白阳性表达于细胞核；随机选取5个高倍镜视野，每个视野计数100个肿瘤细胞，对染色强度和阳性细胞比例进行评分，染色强度：无着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；阳性细胞比例≤10%为1分，11%～25%为2分，26%～50%为3分，＞50%为4分。最终得分为染色强度和阳性细胞比例得分之积，分数≤4分为阴性表达，＞4分为阳性表达。

1．4 统计学处理 统计分析采用SPSS 19．0软件，计数资料比较使用χ2检验，相关性采用Spearman相关分析。生存曲线采用Kaplan－Meier法描绘，比较采用Log－rank法。以P＜0．05表示差异有统计学意义。

2 结果

2．1 脑胶质瘤和瘤旁组织XIAP和Caveolin－1表达 脑胶质瘤组织XIAP和Caveolin－1蛋白阳性表达率分明显高于瘤旁组织，差异比较有统计学意义（P＜0．05）。见表 1。

表1 脑胶质瘤和瘤旁组织XIAP和Caveolin-1表达

2．2 XIAP表达与脑胶质瘤患者临床病理特征关系XIAP表达与脑胶质瘤患者年龄、性别、肿瘤类型和肿瘤直径无关 （P＞0．05）， 与病理分级有关 （P＜0．05）。见表 2。

表2 XIAP表达与脑胶质瘤患者临床病理特征关系

2．3 Caveolin－1表达与脑胶质瘤患者临床病理特征关系 Caveolin－1表达与脑胶质瘤患者年龄、性别、肿瘤类型、病理分级和肿瘤直径无关（P＞0．05），见表3。

2．4 XIAP和Caveolin－1表达相关性分析 脑胶质瘤XIAP蛋白表达与Caveolin－1蛋白表达无相关性（P＞0．05），见表 4。

2．5 XIAP和 Caveolin－1表达与患者预后的关系截止2018年1月，XIAP蛋白阳性表达患者中位总生存时间为21个月，明显短于阴性表达患者的33个月（χ2=8．916，P＜0．05），Caveolin－1 蛋白阳性表达患者中位总生存时间为20个月，明显短于阴性表达患者的 34 个月（χ2=31．972，P＜0．05）。 见图 1。

表3 Caveolin-1表达与脑胶质瘤患者临床病理特征关系

表4 XIAP和Caveolin-1表达相关性分析

图1 生存曲线图

3 讨论

家族遗传性因素、表观遗传学的改变等，均可以促进脑胶质瘤的发生。脑胶质瘤治疗后的病情复发率较高，治疗后的五年生存率或者中位生存时间等生存指标的改善效果较为局限[6]。包括多中心随机或者临床对照研究显示，脑胶质瘤治疗后的无瘤生存期不足24个月，治疗后的病死率持续性维持在15%～25%左右[7，8]。而通过对脑胶质瘤的基础领域方面的研究，能够为疾病的早期诊断及临床预后评估提供参考，特别是可以为肿瘤免疫靶向治疗或者生物学治疗提供新的作用靶点。

XIAP不仅是重要的凋亡抑制因子，其能够通过修饰染色体末端端粒结构，从而抑制癌细胞的程序性凋亡，同时近年来相关基础方面的研究也显示，XIAP表达浓度的改变对于细胞形变能力同样具有一定的影响，可以提高癌细胞早期发生过程中浸润临近正常脑组织的风险，导致癌细胞浸润周期组织深度的改变，XIAP还能够诱导癌细胞局部伪足的形成，提高癌细胞的浸润及转移能力[9]；Caveolin－1不仅能够参与到恶性肿瘤早期发生过程中免疫逃逸及免疫紊乱的发生，同时还能够影响癌细胞的转录上游因子如cyc或者启动子的激活，增加癌细胞的DNA扩增风险[10]。近年来基础方面的理论认为，XIAP在消化系统或者生殖系统等恶性肿瘤的病情进展过程中具有重要的促进作用，其能够诱导癌细胞异型性的改变，导致细胞分化成熟障碍[11，12]。 但对于Caveolin－1的分析研究不足，同时本次研究探讨了Caveolin－1等与脑胶质瘤患者的生存预后的关系。

本研究通过相关免疫组化分析研究发现，XIAP、Caveolin－1蛋白在脑胶质瘤患者病灶组织中存在显著的异常高表达趋势，提示XIAP、Caveolin－1蛋白均参与到了脑胶质瘤的病情进展过程中，XIAP、Caveolin－1蛋白的高表达能够通过加剧肿瘤细胞DNA的扩增、抑制肿瘤细胞的凋亡比例等，进而促进肿瘤的发生发展[13]：⑴XIAP蛋白的异常高表达能够提高肿瘤细胞的粘附能力，促进癌细胞内肿瘤相关基因的突变风险；⑵Caveolin－1蛋白的高表达能够导致脑胶质瘤细胞的基因错配修复作用的下降，提高肿瘤的复发风险。李世武等[14]研究者在探讨了XIAP等肿瘤相关蛋白在脑胶质瘤患者病灶组织中的异常表达时发现，XIAP蛋白的阳性表达率可平均上升25%以上，同时脑胶质瘤患者的病死率越高，放化疗治疗后的病情缓解率越低，XIAP蛋白的高表达趋势越为明显。但在探讨相关蛋白与脑胶质瘤患者临床病理特征关系的过程中发现，Caveolin－1蛋白与脑胶质瘤患者的临床病理特征并无显著的关联，提示Caveolin－1蛋白可能主要参与到了脑胶质瘤的早期发生过程中，而对于疾病的后续临床进展、临床分期、肿瘤细胞分化等可能并无明显的影响。XIAP蛋白与脑胶质瘤患者的肿瘤细胞分级密切相关，XIAP对于脑胶质瘤患者临床病理分级的影响主要考虑与XIAP影响到了脑胶质瘤患者的神经元细胞的核异型性、核质比及侵袭能力等有关[15]。最后，本研究发现XIAP和Caveolin-1表达与患者的生存预后具有一定相关性，XIAP和Caveolin-1高表达的患者，其中位生存时间明显缩短，这主要由于相关蛋白的表达影响到了脑胶质瘤的治疗敏感性有关，同时高表达的患者肿瘤恶性程度较高，生存时间较短。

综上所述，脑胶质瘤组织XIAP、Caveolin-1蛋白表达明显升高，同时XIAP和Caveolin-1蛋白的表达与脑胶质瘤患者的生存预后具有一定相关性。