斑花黄堇藏药材总生物碱含量的测定

辛青霞 ，卢永昌 *，祁海红

（1.青海民族大学药学院，青海西宁810007；2.青海省青藏高原植物资源化学研究重点实验室，青海西宁810007；3.青海省药物分析重点实验室，青海西宁810007）

1 仪器与材料

1.1 仪器

AL204电子天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司）；T6新悦紫外分光光度计（北京普析通用仪器有限公司）；N-1100旋转蒸发仪（上海爱朗仪器有限公司）。

1.2 试剂

盐酸（分析纯，白银良友化学试剂有限公司）；氢氧化钠（分析纯，天津市大茂化学试剂厂）；95%乙醇（分析纯，天津市富宇精细化工有限公司）。小檗碱标准品（20 mg，Lot：130412，HPLC≥98%，北京北纳创联生物技术研究院）。

1.3 材料

斑花黄堇藏药材，经青海民族大学药学院林鹏程教授鉴定为罂粟科紫堇属，斑花黄堇干燥全草，自然阴干后粉碎。

2 总生物碱含量测定

2.1 总生物碱的提取

称取斑花黄堇粗粉15 g，用525 mL 0.4%盐酸在60℃下回流提取30 min，提取结束后将提取液合用NaOH溶液调pH值至10左右，再用氯仿萃取3次，每次50 mL，合并氯仿层，回收氯仿得总生物碱[5]。

2.2 溶液的制备

2.2.1 标准溶液的制备

称取2.16 mg小檗碱标准品，溶于10 mL 95%乙醇中，即得质量浓度为0.216 mg/mL的标准溶液。

2.2.2 总生物碱样品溶液的制备

将2.1项下所得总生物碱样品置于50 mL量瓶中，用95%乙醇溶解并稀释至刻度得供试品溶液[6]。

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2.3 最大吸收波长的确定

将制备的总生物碱溶于适量95%乙醇，转移至50 mL容量瓶中，95%乙醇定容。在200～600 nm波长范围内进行紫外扫描，取小檗碱标准品溶液方法同上进行测定；另取95%乙醇，同法操作，95%乙醇溶液为空白溶液。结果表明，小檗碱标准品溶液和总生物碱样品溶液的最大吸收峰均出现在410 nm处，本实验选取410 nm为最大吸收波长。

2.4 标准曲线的绘制

准确吸取标准溶液 0.3、0.6、0.9、1.2、1.5 mL于10 mL容量瓶中，用95%乙醇定容，摇匀，测定吸光度。用紫外分光光度计分别在410 nm处测定吸光度，纵坐标为吸光度(A)，横坐标为小檗碱标准品的质量浓度(μg/mL)，绘制标准曲线如图1。回归方程为：y=0.010 3x+0.004 4，R2=0.999 7。

图1 小檗碱测定的标准曲线

2.5 结果计算

按照2.4项所述方法测定吸光度，并通过回归方程计算出样品中生物碱的质量浓度，按下式计算总生物碱含量：

式中：C为样品最终测定液中总生物碱质量浓度(μg/mL)，D为稀释倍数，W为斑花黄堇样品质量（g）。

2.6 方法学验证

2.6.1 稳定性实验

分别吸取8份样品溶液2.5 mL于10 mL容量瓶中，按照2.3项下的方法依次测定样品放置0、15、30、60、90、120、150和180 min 时的吸光度，考察样品的稳定性[7]。

RSD=1.59%，表明样品溶液3 h内稳定性良好。

2.6.2 重复性实验

分别吸取9份样品溶液2.5 mL于10 mL容量瓶中，按照2.3项下的方法测量吸光度，考察方法的重复性[8]。9次测定的吸光度分别为0.287、0.277、0.278、0.289、0.279、0.279、0.283、0.280、0.280。RSD=1.48%，表明本方法重复性良好。

2.6.3 精密度实验

分别吸取9份标准品溶液1.0 mL于10 mL容量瓶中，按照2.3项下的方法测量吸光度，考察方法的精密度[9]。测定的吸光度分别为0.218、0.223、0.222、0.226、0.226、0.227、0.223、0.223、0.228。RSD=1.38%，表明本方法精密度良好。

2.6.4 加样回收率实验

量取稀释后的样品溶液4.5 mL，共9份，分为3组，分别精密加入对照品溶液0.5，1.0和1.5 mL，按照2.3项下的方法测定吸光度[10]，结果见表1。

表1 加样回收率实验

平均回收率为91.38%，RSD=1.36%，表明本方法回收率良好。

3 斑花黄堇藏药材总生物碱含量测定

经方法学验证，得知紫外分光光度法测定斑花黄堇藏药材总生物碱含量时稳定性、重复性、精密度、加样回收率良好，故称取斑花黄堇藏药材2份，各约2.0 g，按照2.2和2.3项下方法，得到总生物碱提取液，稀释一定倍数后，测得相应的吸光度，并计算出斑花黄堇藏药材的总生物碱含量[11]，分别为2.218和2.228 mg，平均2.223 mg，RSD=1.023%。

4 讨论

本实验通过紫外分光光度法测定斑花黄堇藏药材时，稳定性、重复性、精密度均较好。方法灵敏度高，结果准确，操作简单。实验结果表明，斑花黄堇藏药材总生物碱含量高低，可能与各地区温度，海拔等地域条件有关。通过对斑花黄堇藏药材总生物碱的含量测定，可以为下一步紫堇属藏药材总生物碱的合理开发与利用提供坚实的实验依据。