24种中药及复方制剂对奶牛隐性乳房炎主要致病菌的抑菌试验

张靖飞

(西安市动物疫病预防控制中心，陕西 西安 71006)

奶牛乳腺炎是奶牛的常见病和多发病，给奶牛业造成巨大的经济损失，引起奶牛乳腺炎的主要致病因素是传染性病原微生物感染，主要病原菌包括金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、停乳链球菌、大肠杆菌等。为了防治乳腺炎，临床滥用抗生素，致使病原菌的抗药性增强，且导致高药物残留等问题。中草药是纯天然物质，含有多种生物活性成分，具有抗菌、消炎、不易产生细菌耐药性、低毒、无残留或低残留等特点；本试验选取鱼腥草、蒲公英、黄芪等24味中药及两个复方进行浸液制备。分别利用单味中药和组成的两个复方制剂对致乳房炎的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌进行体外抑菌试验，为研制治疗奶牛乳腺炎的方剂提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细菌菌种 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、链球菌均来由西安市某规模化奶牛场的乳房炎奶牛乳汁中分离。

1.1.2 供试中药均购自于西安市医药公司 有鱼腥草、蒲公英、黄芪、白芍、陈皮、甘草、王不留行、路路通、漏芦、连翘、穿心莲、瓜蒌、益母草、当归、紫花地丁、红花、丹参、川芎、通草、柴胡、夏枯草、板蓝根、黄连、大青叶24味中药，由上述中药组成的复方一、复方二。

1.1.3 主要仪器设备 全自动压力蒸汽灭菌器，恒温培养箱，超净工作台(SW-CJ-1F型)，离心机等。

1.2 方法

1.2.1 中药煎液的制备 取中药50 g，加8倍于其体积的水浸泡2h，煎煮沸腾40 min，过滤，向沉淀中再加5倍体积的水煎煮20 min，合并煎液，纱布过滤后离心(5 000 r/min， 10 min)，加热浓缩使滤液含生药1 g/mL。

1.2.2 细菌的培养 将取得的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和链球菌采用无菌操作的办法接种于肉汤培养基中，恒温箱中37℃培养16～20 h。

1.2.3 中药抑菌试验

1.2.3.1 药敏实验 采用平板挖洞灌药法。《中药药理学》里药敏试验抑菌圈直径判断其抑菌效果。

1.2.3.2 最低抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)测定 采用试管二倍稀释法，设药物对照、培养基和菌液对照。根据MIC和MBC值评价中药抗菌活性。

2 结果

2.1 中药抑菌圈试验结果

由表1可知，对大肠杆菌的抑菌直径比较明显的是： 蒲公英12.60 mm，黄芪11.26 mm，白芍10.02 mm，陈皮13.62 mm，紫花地丁12.06 mm。复方一：16.82 mm，复方二：10.22 mm。

对金黄色葡萄球菌抑菌直径比较明显的是： 蒲公英13.32 mm，黄芪13.24 mm，白芍12.42 mm，陈皮12.72 mm，路路通13.64 mm，丹参12.28 mm。复方一：14.42 mm，复方二：18.42 mm。

对链球菌抑菌直径比较明显的是：蒲公英12.44 mm，鱼腥草12.48 mm，黄连13.66 mm，紫花地丁11.22 mm柴胡11.22 mm。复方一：13.32 mm，复方二：15.47 mm。对大肠杆菌、金黄色球菌和链球菌效果都显著的是蒲公英、复方一、复方二。

2.2 中药的最低抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)结果

中药鱼腥草、蒲公英、黄芪等24味中药的最低抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)结果见表1。

表1 中药隐性乳房炎主要致病菌药敏试验结果

注：AD为抑菌直径：抑菌效果按《消毒规程》相关标准判定，即AD<4mm为不敏感，用“-”表示，5～8为中度敏感，AD>9mm为高度敏感。

由表1可知，蒲公英、紫花地丁、复方一、复方二对大肠杆菌具有很好的杀菌作用，鱼腥草、蒲公英、路路通、穿心莲、金银花、丹参、白芍、复方一、复方二对金黄色葡萄球菌具有很好的杀菌作用。蒲公英、鱼腥草、黄连、柴胡、复方一、复方二对链球菌具有很好的杀菌作用。蒲公英、复方一、复方二对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌均具有很好的杀菌作用。

3 分析与讨论

3.1 该试验采用两种方法进行中药抑菌试验

采用药槽灌注法对抑菌效果不是很精确，因为操作上的误差掩盖其抑菌效果，而试管二倍稀释法测定的结果比较精确，但有些中药提取液色泽深，浑浊度大，在试管内培养后不易观察细菌生长情况。同时采用两种方法，可以较准确的测定各药物的抑制作用。

3.2 中药抑菌试验结果

大肠杆菌对蒲公英、紫花地丁、白芍、复方一、复方二较敏感，金黄色葡萄球菌对鱼腥草、蒲公英、路路通、穿心莲、金银花、丹参、白芍、复方一、复方二较敏感，蒲公英、鱼腥草、黄连、柴胡、复方一、复方二对链球菌具有很好的杀菌作用；综合判定以蒲公英、复方一、复方二对这3种细菌抑菌效果好。

3.3 试验过程

连翘的抑菌圈直径不大，但是抑菌的最低抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)却很高，可能是细菌自身抗药性发生了改变，或者所购买的药物出现问题。有些药在试验中抑菌圈效果很好，但最低抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)效果不理想，有些药物的抑菌圈效果不明显，但是最低抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)效果却很好，这可能是试验方法对比或是对中药的耐药性发生改变，关于这个问题还有待进一步试验。

3.4 中药应用前景广阔

该实验测定的是中药煎剂的抑菌效果，但由于生药的某些成分不溶于水或遇热易分解，导致某些有效成分丢失。同时，又进行高压灭菌，也可导致一些活性降低。考虑抗生素的残留，抑菌效果和成本等问题，中药还是有很大的发展前景，因此，要全面了解中草药的功能，还需对其进行体内试验。