白芨组培快繁试验研究

洪献梅

(丽江市林业科学研究所，云南 丽江 674100)

1 引言

白芨为兰科白芨属多年生草本植物。分布在河南、陕西、甘肃、浙江、福建、四川、贵州、云南等地。白芨块茎入药，具有收敛、补肺止血、消肿生肌等广泛的药用价值。白芨市场需求量较大，但由于人们长期的采挖导致野生资源愈来愈少，濒临灭绝，而常规的分株繁殖，繁殖系数低，难以满足市场需求，本实验选用白芨种子进行无菌播种，获得无菌苗后建立快繁体系，为规模化生产优质种苗奠定基础。

2 试验设计

(1)试验仪器：电子天平，超净工作台，高压灭菌锅等。

(2)试剂：基本培养基(MS，1/2MS)，植物外源激素(萘乙酸，6-苄氨基嘌呤)，蔗糖，琼脂，消毒试剂(HgCl2，酒精)等。

(3)培养材料：白芨种子。

(4)基本药剂和培养基。

试验设计采用MS和1/2MS两种基础培养基和不同激素配比的培养基，附加蔗糖3%，琼脂0.65%，pH为5.8～6.0。

诱导白芨种子萌发培养基采用3个不同配比做对比:①1/2MS2.47 g/L+NAA1 mg /L+琼脂6.5 g/L+蔗糖30 g/L；②MS4.74 g/L+NAA1 mg /L+琼脂6.5 g/L+蔗糖30 g/L；③1/2MS2.47 g/L+6-BA1 mg/L+琼脂6.5 g/L+蔗糖30 g/L。

白芨丛芽增殖培养基采用4个不同配比做对比:④1/2MS2.47 g/L+6-BA1.0 mg/L+NAA0.15 mg/L+琼脂6.5 g/L+蔗糖30 g/L；⑤MS4.74 g/L+6-BA1.0 mg/L+ NAA0.15 mg/L + 琼脂6.5 g/L+ 蔗糖30 g/L；⑥MS4.74 g/L+6-BA1.0 mg/L+琼脂6.5 g/L+蔗糖30 g/L；⑦MS4.74 g/L+ NAA0.15 mg/L+琼脂6.5 g/L+ 蔗糖30 g/L。

壮苗生根培养基采用3个不同配比做对比：⑧1/2MS2.47 g/L+NAA0.5 mg /L+琼脂6.5 g/L+蔗糖30 g/L；⑨1/2MS2.47 g/L+NAA1 mg/L+琼脂6.5 g/L+蔗糖30 g/L；⑩1/2MS2.47 g/L +NAA1.5 mg/L+琼脂6.5 g/L+蔗糖30 g/L。

3 试验方法及过程

(1)环境消毒。将组培操作室、培养室清洁消毒，然后将操作室内及洁净工作台上的紫外灯开启照射消毒30min，保证工作台工作区内处于无菌环境。

(2)外植体消毒。选取较饱满的白芨种子用少量洗衣粉水清洗干净，在超净工作台上采用70%乙醇消毒30 s，无菌水冲洗后用0.1%升汞消毒15 min，再用无菌水冲洗3～4次，用无菌滤纸把水分吸干。从果实中部剥开，取出种子，迅速接种到配置好的培养基上。

(3)培养基配制。按照试验设计，根据不同阶段各个培养基配方的不同处理，分别称取各个成分并加入少量水加热完全溶解后，混合定溶，调节pH值，分装到组培瓶内，连同接种用具一起进行高温灭菌。在121 ℃高温蒸汽灭菌30 min后冷却备用。

(4)接种。做好器具及双手消毒后，在超净工作台里按无菌操作要求打开瓶盖，用镊子夹取适量上述准备好的种子，均匀撒落在培养基上，并盖好瓶盖。

(5)培养室培养。将接种好的组培瓶移至组培室内组培架上进行培养，培养环境条件设定为：温度25±1 ℃，光照1000～1500 Lx，光周期为14 h。

培养2个月后培养基养份耗尽并且小苗过密，更换培养基转接到丛芽增殖培养基并进行分瓶，更换培养基瓶后继续培养2个月左右再转接至壮苗生根培养基上进行培养。前后总共培养大约7个月左右，即可出瓶炼苗。

4 炼苗移栽

炼苗移栽基质采用透气性和保湿性较好的珍珠岩、蛭石、松树皮、泥炭土等。移栽前在大棚室内炼苗3～5 d，提高抗性和适应性。将小苗根部的培养基清洗干净，移栽到准备好的基质中。适度遮荫，湿度保持在80%左右，待组培移栽苗新叶展开和新根长出后，即可按常规管理。

5 结果分析

通过不同成分配比培养基的试验比较，认真观察记录各个阶段白芨在培养基上生长表现状况，分析白芨种子萌发增殖生根表现最佳的培养基，试验结果见表1。

表1 4个不同配比的培养基对苗高的影响-方差分析

表1的结果表明F>Fcrit，差异显著，说明编号为④、⑤、⑥、⑦这4种不同培养基的对苗高的影响有显著的差异。

表2 3种不同浓度NAA对诱导白芨苗生根的影响-方差分析

表2的结果表明F>Fcrit，差异显著，说明编号为⑧、⑨、⑩这3种不同培养基对生根的影响有显著的差异。

根据白芨组培苗在各个阶段不同培养上的生长表现状况，进行综合评价分析，表现较好的用+++表示，一般的用++表示，相对较差的用+表示。结果如表3。

表3 白芨组培各阶段不同培养基表现状况汇总

结果表明：在相同培养条件下，种子的萌发率及长势对比可见①>②、①>③，说明MS, 1/2MS这两种常用的基本培养基中，1/2MS培养基更有利于白芨种子的萌发。NAA，6-BA这两种外源激素对比，NAA更利于白芨种子萌发；增殖培养中⑤>④、⑤>⑥、⑤>⑦，说明MS, 1/2MS相比，MS更有利于白芨的增殖生长，外源激素同时加6-BA和NAA对促进增殖生长的影响要强于只加其中一种；壮苗生根培养中⑧>⑨>⑩,说明低浓度的外源激素NAA更有利于诱导生根。本实验采用NAA作为诱导生根的外源激素，诱导出来的根较长、较粗壮，植株生根率为100%。移栽后成活率达到了70%左右(图1、2)。

图1 接种一周后白芨种子萌发状况

图2 清洗干净的组培苗

6 结论

6.1 不同基本培养基对白芨种子萌发的影响

MS培养基盐分较高，而1/2MS的盐分相对较低，在诱导白芨种子萌发时，低盐的1/2MS作为种子萌发的基本培养基，更有力于种子萌发。而在白芨进行丛芽增殖的时候，富含更多盐分的MS则更加适合，能够提供更多的养分。

6.2 不同的植物激素对白芨组培的影响

通过试验表明：不同的外源激素及不同的浓度对白芨组培各阶段的影响都不同。种子萌发最好的NAA1mg/L；丛芽增殖培养较适宜6-BA1.0mg/L+NAA0.15mg/L ；壮苗生根较适宜NAA0.5mg/L 。