CD4+CD28null T细胞与糖尿病慢性并发症的关系研究

汤珂珂 洪萍萍 裘双燕 余筱燕 毛玉山

研究表明，糖尿病患者动脉粥样硬化具有发病年龄早、进展快、病情重等特点，发生率比非糖尿病患者高出3倍［1］。而糖尿病肾病是2型糖尿病（T2DM）微血管病变的典型临床表现，是糖尿病患者肾功能衰竭的主要原因，其严重性仅次于心脑血管疾病。CD4+CD28null T细胞是有记忆的细胞毒性效应T细胞，近来被发现在多种自身免疫性疾病中发挥致病作用［2］。本研究旨在分析和探讨T2DM患者外周血CD4+CD28null T细胞亚群的表达与糖尿病动脉粥样硬化及糖尿病肾病的相关性，报道如下。

1 临床资料

1.1 一般资料 入选标准：选取2013年1月至2015年6月期间在浙江省台州医院内分泌科住院的156例T2DM患者，其中男83例，女73例；年龄25～88岁，平均（56.3±11.9）岁。符合中国糖尿病指南分型和诊断标准（2010年版）。根据是否存在血管病变分为单纯糖尿病组（T2DM，n=41）、糖尿病动脉粥样硬化组（DA，n=35）、糖尿病肾病组（DN，n=39）、糖尿病动脉粥样硬化合并肾病组（DA+DN，n=41）。糖尿病动脉粥样硬化筛查：以彩色多普勒B超常规检测2型糖尿病患者颈动脉内-中膜厚度、有无斑块及其性质。内膜粗糙及厚度＞110mm或局部有斑块者诊断为颈动脉粥样硬化。糖尿病肾病筛查：收集患者24h小便，检测其微量白蛋白浓度，计算24h尿微量白蛋白总量，＞30mg诊断为糖尿病肾病。需排除急慢性肾炎、发热、泌尿道感染或充血性心衰等引起的蛋白尿和肾功能不全。排除标准：糖尿病急性并发症患者；妊娠糖尿病患者；急性心梗、严重脑血管意外等合并症患者；合并其他影响糖代谢的疾病患者，如甲状腺机能亢进症、库欣综合征、生长激素瘤等患者；严重胃肠道及肝肾疾病哮；恶性肿瘤及艾滋病等免疫缺陷疾病患者；合并类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、硬皮病等风湿性疾病患者；并发急慢性感染患者。

1.2 方法 （1）检测患者空腹血糖（FPG）、餐后2h血糖（PBG）、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、糖化血红蛋白（HbA1c）、24h尿蛋白、尿微量白蛋白、身高、体重、体重指数（BMI）、腰围、臀围、收缩压、舒张压等情况。（2）采用流式细胞仪（美国BD公司FACSCalibur）测定2型糖尿病患者外周血CD4+CD28null T细胞亚群的表达情况：患者于清晨空腹抽取静脉血2ml，EDTA抗凝。取2支试管（a、b），a试管加入单抗MOUSE IgG1-FITC/MOUSE IgG2-PE（美国BD公司）。b试管加入CD4-PE/CD28-FITC单抗（美国BD公司）各20μl及100μl抗凝血混匀，避光15min。加溶血素2ml避光15min。300r/min离心10min，去上清液，加2ml PBS洗1次。每管加1%多聚甲醛0.5ml。以CD4/SSC散点图设CD4+淋巴细胞门，分析CD4+CD28null T细胞亚群比率。

1.3 统计学方法 采用SPSS 16.0统计软件。正态分布参数以（）表示，非正态分布参数以中位数（25%～75%四分位数间距）表示。正态分布参数多组间比较采用方差分析，非正态分布参数比较采用Kruskal-Wallis检验。正态分布参数两组间比较采用独立样本t检验，非正态分布参数采用Wilcoxon秩和检验。独立影响因素分析采用Logistic回归分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组间CD4+CD28null T细胞亚群的表达情况及基本资料对照 见表1。

2.2 独立影响因素分析 以糖尿病动脉粥样硬化为因变量，以BMI、腰围、臀围、收缩压、舒张压、FPG、PBG、HbA1c、CRP、TC、TG、HDL-C、LDL-C、尿微量白蛋白、CD4+CD28null T细胞亚群的表达为自变量进行Logistic回归分析，在校正年龄和病程后所得到的结果显示CD4+CD28null T细胞亚群的表达、餐后血糖、CRP是糖尿病动脉粥样硬化的独立影响因素，见表2。以糖尿病肾病为因变量，以BMI、腰围、臀围、收缩压、舒张压、FPG、PBG、HbA1c、CRP、TC、TG、HDL-C、LDL-C、CD4+CD28null T细胞 亚 群的表达为自变量进行Logistic回归分析，在校正年龄和病程后所得到的结果显示，CD4+CD28null T细胞亚群的表达、腰围是糖尿病肾病的独立影响因素，见表3。

表1 各组间CD4+CD28null T细胞亚群的表达情况及基本资料对照

表2 糖尿病动脉粥样硬化相关危险因素的logistic回归分析

表3 糖尿病肾病相关危险因素的logistic回归分析

3 讨论

T细胞在糖尿病动脉粥样硬化和糖尿病肾病中均扮演了重要的角色。多项研究表明，CD4+CD28nullT细胞可能参与大动脉血管结构的改变和动脉粥样硬化斑块的发生和发展［3-4］。本研究结果显示，糖尿病动脉粥样硬化组相比单纯糖尿病组，糖尿病动脉粥样硬化合并肾病组相比糖尿病肾病组，CD4+CD28null T细胞亚群表达均明显升高，差异具有统计学意义。Logistic回归分析显示，在校正年龄和病程后，CD4+CD28null T细胞亚群的表达、餐后血糖、CRP是糖尿病动脉粥样硬化的独立影响因素。近来有研究表明，CD4+CD28null T细胞亚群可以独立影响糖尿病微血管病变的进展［5］。Cantón A 等［6］提出CD4+CD28null T细胞可能参与糖尿病视网膜病变的发生发展。本研究结果显示，糖尿病肾病组相比单纯糖尿病组CD4+CD28null T细胞表达明显升高，差异具有统计学意义。Logistic回归分析显示，CD4+CD28null T细胞的表达、腰围是糖尿病肾病的独立影响因素。因而认为CD4+CD28null T细胞的表达分别是糖尿病动脉粥样硬化和糖尿病肾病的独立影响因素。

已有研究表明，CD4+CD28null T细胞是在炎症环境下产生的，产生很多病理过程，比如动脉粥样硬化及自身免疫性疾病。国外专家在具有高浓度CD4+CD28null T细胞的眼部玻璃体液中，也发现了高水平的细胞因子和炎症介质［6］。有研究提出糖尿病大血管病变和微血管病变可能存在一种共通性，即可能都存在一种微炎症状态。微炎症状态是一种由非微生物因素引起的慢性进展的隐性炎症状态，表现为IL-6等细胞因子及CRP等炎症标志物轻度持续增高，引起各种慢性并发症的发生［7］。本研究结果表明，糖尿病动脉粥样硬化组和糖尿病肾病组的炎症指标CRP均显著高于单纯糖尿病组，证实了微炎症状态的存在以及这两种糖尿病慢性并发症的共通性。但本研究还发现糖尿病动脉粥样硬化组的CRP指标明显高于糖尿病肾病组，差异有统计学意义。Logistic回归分析显示，CRP是糖尿病动脉粥样硬化的独立影响因素，却不是糖尿病肾病的独立影响因素。因而本研究认为炎症反应可能是CD4+CD28null T细胞影响2型糖尿病患者动脉粥样硬化进展的主要途径。但在2型糖尿病肾病中虽然也存在CD4+CD28null T细胞相关的炎症反应，还可能与其他CD4+T细胞和胞内信号转导异常、全身因素引起的局部改变等相关，其内在机制仍需要进一步深入研究。