高效液相色谱法测定阿昔洛韦片含量的仪器比对实验

(1.辽宁省大连市药品检验所，大连 116021；2.辽宁师范大学化学与化工学院，大连 116029)

阿昔洛韦片是抑制DNA型抗病毒药物, 临床上主要用于乙型肝炎及水痘、带状疱疹、单纯性疱疹病毒引起的皮肤和黏膜感染[1]。

高效液相色谱仪因其分离效能高，应用范围广，分析速度快等优势，成为目前在化学分析领域应用较多的仪器，以此建立的高效液相色谱分析方法在仪器分析领域的使用也很广泛。高效液相色谱仪依据《JJG705-2014液相色谱仪检定规程》每两年进行一次检定，以评价仪器性能。但由于各台仪器使用年限不同，检测物质不同，检定时检测指标有限，即使每台仪器在检定时为合格，也可能导致实验结果产生偏差。所以为了更准确的评价各台高效液相色谱仪，实验室可以通过仪器比对试验，使其避免受到这种偏差的影响。本次实验选用6台高效液相色谱仪，依据《中国药典》2015年版二部[2]阿昔洛韦片的含量测定方法[3-5]，采用Z比分数统计法对试验结果进行分析，以评估不同高效液相色谱仪之间的差异，进一步确保分析结果的准确和可靠。

稳健统计[6-9]即利用一些受离群值影响较小的、稳定的统计标准来代替很容易受离群值影响的统计统计标准，最大限度降低离群值影响的方法。例如平均值和标准偏差极易受到离群值影响，可以用不易受离群值影响的中位值和标准IQR代替。

1 仪器比对方法应用[10，11]

1.1 仪器

Waters e2695高效液相色谱仪，紫外检测器：2998；Acquity UPLC超高效液相色谱仪， PDA检测器；Waters e2695高效液相色谱仪，紫外检测器：2489；岛津 LC-20AD高效液相色谱仪，紫外检测器：SPD-20A；Dionex SUMMITP680A高效液相色谱仪，紫外检测器：UVD170U；Waters e2695高效液相色谱仪，紫外检测器：2489；电子天平(BP211D，BP221S，德国赛多利斯)；电热恒温振荡水槽(DKZ-450B，上海森信实验仪器有限公司)。

1.2 耗材与试药

色谱柱：资生堂 PAK C18CAPCELL PAK 柱(250×4.6 mm,5μm)；Waters ACQUITY UPLC BEH C18柱(50mm×2.1，1.7μm)；Thermo Hypersil GOLD C18柱(150×4.6 mm,5μm)；Kromasil C18柱(250×4.6 mm,5μm)；Agilent TC-C18柱(250×4.6 mm,5μm)；Agilent ZORBAX SB-Aq C18柱(250×4.6 mm,5μm)；甲醇(色谱纯，MREDA)；鸟嘌呤对照品(批号140631-201606，中国食品药品检定研究院)；阿昔洛韦对照品(批号140630-201403，纯度：99.8%，中国食品药品检定研究院)；阿昔洛韦片(规格：0.1g×24片，批号：B160406179)；氢氧化钠(20160103，天津科密欧化学试剂有限公司)。

1.3 方法与结果

1.3.1 色谱条件

填充剂：十八烷基硅烷键合硅胶；流动相：甲醇-水(10∶90)；检测波长：254nm；进样量：20μL。

1.3.2 溶液制备

供试品溶液：取阿昔洛韦片20片，精密称定，平均片重：0.2008g，研细，密称取细粉适量(称取两份①0.1000g，②0.0972g，每份约相当于阿昔洛韦50mg)，将两份药品分别置于250mL量瓶中，加0. 4%氢氧化钠溶液5mL，超声1min，加水适量，于热水浴(95～100℃)振摇10min，放冷至室温，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5mL，置50mL量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液(①0.01992mg/mL，②0.01936 mg/mL)。

对照品溶液：精密称取阿昔洛韦对照品(已在105℃烘干4h干燥至恒重)适量(两份①9.90mg，②10.22mg，)，置50mL量瓶中，用0.4%氢氧化钠溶液5mL使溶解，用水稀释至刻度，混匀，精密量取5mL，置50mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，作为对照品溶液(①0.01976mg/mL，②0.02040 mg/mL)。

1.3.3 含量测定

外标法计算阿昔洛韦片的含量。进样次数：4次(供试品和对照品均为2次)两份样品所测含量平均值即为阿昔洛韦片的含量(结果保留到小数点后1位)。

2 结果统计

本方法以阿昔洛韦片的含量测定结果评价各高效液相色谱仪之间的差异，6台仪器比对结果经Grubbs检验[12,13]，都在95%置信水平，数据均有效，无异常值。中位值是将一组实验数据按从小到大的顺序排列，位于正中间位置的数值即为中位值。计算方法：先将这一组数据从小到大的顺序排列，若是奇数个测量数据，则为排列在中间位置的数为中位值，若是偶数个测量数据，则排列在中间相邻的两个数据之和的1 /2为中位值。

极差是一组数据中的最大值减去最小值。稳健变异系数是标准四分位数间距比中位值：NIQR /中位值。结果见图1及表1，从图表的数据中可以清晰地观察到，本次实验统计结果数为6，极大值为99.6%，极小值为98.2% ; 变动范围为1.4% ;中位值98.9%，标准化IQR为0.55。传统统计中的平均值和标准偏差由中位值和标准化IQR代替，由此避免了数据中存在的离群值的影响。而通过图1可清楚地观察到本次试验中6组数据Z值均在│Z│≤2的范围内。

图1 阿昔洛韦片含量比对试验Z比分数图

代码仪器编号仪器型号/检测器型号结果(%)Z值1JY-050Waters2695/299898.2-1.722JY-060Waters UPLC/PDA98.7-0.493JY-070Waters2695/248998.7-0.494JY-037岛津 LC-20AD/SPD-20A99.10.495JY-022DionexSUMMITP680A/UVD170U99.30.986JY-063Waters2695/248999.61.72平均值(%)98.9中位值(%)98.9四分位间距IQR0.55低四分位间距98.7高四分位间距99.25标准化IQR0.407715稳健CV(%)0.4122497极大值99.6极小值98.2极差1.4

3 讨论

仪器比对试验作为实验室内部质量控制计划的一部分对实验室具有重要意义，通过比对试验结果可以看出实验室仪器的运行状态，对于保证检验数据的准确性意义重大。

Z比分数为实验室测得值减去中位值除以标准四分位数间距。Z值=(观察值-中位值)/标准化四分位间距。Z比分数判定规则：满意结果：|Z|≤2；可疑结果：2<|Z|<3；离群结果：|Z|≥3。参加本次比对实验的仪器中，6台仪器均达到满意结果。实验室人员可以充分利用仪器比对结果，在参加能力验证、限度边缘样品检测、OOS样品调查等试验中，选择Z值偏离较小的仪器进行分析；对于比对中出现可疑结果的仪器，在日常使用中应加以注意；对于仪器比对中出现不满意结果的仪器，应追根溯源，采取有效的措施去纠正错误。从试验结果来看，本次参与比对的6台液相色谱仪的Z值均小于2，说明仪器各自状态稳定，结果具有一致性[14,15]。

总之，仪器比对试验对实验室质量控制具有重要作用。