22种杀菌剂对甜瓜靶斑病菌的室内毒力测试

李俊香 洪霓 古勤生

摘 要： 为筛选多主棒孢甜瓜分离物的高效杀菌剂，在室内采用菌丝生长速率法测定了22种杀菌剂对甜瓜多主棒孢SY和GX分离株菌丝生长的抑制能力。结果表明，50%咪鲜胺锰盐WP对多主棒孢甜瓜分离物SY和GX菌株的EC50都最小，病菌对它的敏感性最高，抑菌效果最好；30%苯醚甲环唑SC、40%氟硅唑EC和80%福美双WG对多主棒孢甜瓜分离物GX分离株的EC50均小于5 μg·mL-1，抑菌效果较好，但在SY菌株上抑菌效果减弱。在试验浓度下，2个多主棒孢供试菌株对25%嘧菌酯SC、75%百菌清WP和90%多菌灵WG都非常不敏感，说明这3种杀菌剂对甜瓜靶斑病的防控不能起到有效作用。

关键词： 甜瓜；多主棒孢；杀菌剂

Abstract：Melon target spot （Corynespora cassiicola） is an emerging disease as a potential risk for melon production. In order to evaluate fungicides on the pathogen，indoor toxicity of 22 fungicides for Corynespora cassiicola SY strain and GX strain of melon were determined in laboratory. The results indicated that EC50 value of 50% Sporgeon WP was the most effective for both SY strain and GX strain. 30% difenoconazole SC，40% flusilazole EC and 80% thiram WG also had significant inhibition activity on GX strain mycelium growth，with the EC50 values less than 5 μg·mL-1，but the three fungicides were less effective on SY strain. 25% azoxystrobin SC，75% chlorothalonil WP and 90% carbendazim WG were least effective on SY strain and GX strain.

Key words： Melon； Corynespora cassiicola； Fungicides

多主棒孢[Corynespora cassiicola （Berk. & M. A. Curtis） C. T. Wei]是一種重要的植物病原菌[1]，寄主范围广泛，可危害390种的热带和亚热带植物[2]，包括西红柿、豌豆、橡胶树、芝麻、棉花、大豆、烟草、茄子等[3-11]多种经济作物。该病原菌常常危害植物叶部形成靶状病斑，也可侵染寄主的花、果实、茎和根[12-13]。

黄瓜、西瓜和甜瓜是我国重要的葫芦科作物，具有重要的经济价值，栽培广泛。多主棒孢引起的黄瓜靶斑病已有100多年的历史，首次在欧洲报道[14-15]。黄瓜靶斑病在我国曾是次要病害，然而，1993年辽宁、河南等黄瓜栽培地普遍受到多主棒孢危害，经济损失严重[16]，近几年，该病已上升为主要病害，成为制约黄瓜产业发展的重要因素[17]。多主棒孢很少侵染甜瓜，直到2013年，该病害在海南三亚于甜瓜生长后期发生严重，发病株率达到30%～50%[18]。本实验室（西瓜甜瓜病虫害防控实验室）于2015年10月在我国广西武鸣甜瓜主要种植区进行病害调查时发现甜瓜靶斑病，该病害典型症状表现为受害叶片产生圆形或不规则形、棕色、或有黄色晕圈呈轮纹状病斑。对病样进行病原分离及病菌致病性试验、形态学观察及多基因测序分析，鉴定病原菌为多主棒孢。

目前，该病害有可能严重危害甜瓜甚至对其他葫芦科瓜菜的生产造成影响，而国内外还没有关于甜瓜靶斑病的杀菌剂筛选试验。生产上缺乏针对该病的抗性品种，化学防治仍是控制该病害的重要措施。笔者选取22种常见杀菌剂，采用菌丝生长速率抑制法对多主棒孢甜瓜分离物三亚分离菌株（SY）[18]及广西分离菌株（GX）进行了室内毒力测定，旨在为病害的有效防治提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

试验于2017年 3—6月在中国农业科学院郑州果树研究所病菌培养试验室进行。供试菌株为多主棒孢（Corynespora cassiicola）甜瓜分离物三亚菌株SY为三亚市南繁科学技术研究院王爽赠送，广西菌株GX为本试验室分离鉴定并保存。供试培养基为马铃薯琼脂培养基（Potato Dextrose Agar，PDA）：马铃薯去皮切薄片200 g，加水煮沸30 min，双层纱布过滤，加2%葡萄糖，1.5%琼脂，定容至1 L。共选22种杀菌剂进行室内毒力测定试验，供试药剂特征及相关信息见表1。

1.2 方法

1.2.1 不同杀菌剂对甜瓜靶斑病菌的室内毒力测定 采用菌丝生长速率抑制法测定抑菌效果。将22种杀菌剂加入灭菌后冷却至50 °C的PDA培养基中，分别制成平板，根据预试验结果每种药剂设置5个浓度处理，分别于平板中心接种单个菌饼（d=5 mm）。无菌水做对照，每处理3个平板，重复3次，25 °C黑暗培养7 d，十字交叉法测量菌落直径，并计算菌丝生长抑制率。菌丝生长抑制率/%=[（对照菌落直径-菌饼直径）-（处理菌落直径-菌饼直径）]/（对照菌落直径-菌饼直径）×100。根据生物统计方法即定量数据概率分析建立菌丝生长抑制率与药剂浓度对数的毒力回归方程。以杀菌剂浓度的对数为横坐标（x），生长抑制率几率值为纵坐标（y）绘制毒力曲线，求得线性回归方程y=a+bx，相关系数r，并以回归方程计算有效抑制中浓度EC50。比较毒力大小，进而评价不同杀菌剂对多主棒孢甜瓜分离物SY菌株和GX菌株的抑制作用，筛选出抑制效果好的杀菌剂。

1.2.2 数据处理 采用DPS 7.05数据处理系统软件进行数据分析。

2 结果与分析

2.1 22种杀菌剂对多主棒孢甜瓜分离物SY菌株的室内毒力比较

22种杀菌剂对多主棒孢甜瓜分离物SY菌株的室内毒力测定结果见表2，从表中得知，50%咪鲜胺锰盐WP对SY菌株菌丝的EC50为0.609 4 μg·mL-1，在1 μg·mL-1以下，具有很好的抑菌活性。30%苯醚甲环唑SC和40%氟硅唑EC对SY菌株菌丝生长的抑制效果较好，EC50在5～10 μg·mL-1，其中40%氟硅唑EC毒力回归方程的斜率较高，为1.414 7，说明多主棒孢甜瓜分离物SY菌株对40%氟硅唑EC的敏感性很高。80%福美双WG，43%腐霉利SC和25%腈菌唑EC对多主棒孢甜瓜分离物SY菌株的抑制作用一般，EC50在10～20 μg·mL-1，其中80%福美双WG、43%腐霉利SC毒力回归方程的斜率较高，分别为0.994 7和1.436 1，说明多主棒孢SY菌株对这两种杀菌剂具有较高的敏感性。40%嘧霉胺SC、22.5%异菌脲SC，20%抑霉唑EW和43%戊唑醇SC的EC50值相近，约为22～24 μg·mL-1，对多主棒孢甜瓜分离物SY菌株的抑制作用有限，但43%戊唑醇SC毒力回归方程的斜率高达3.424 8，说明多主棒孢甜瓜分离物SY菌株在43%戊唑醇SC浓度高于24.033 9 μg·mL-1后对其非常敏感。其余12种杀菌剂，除15%吡唑醚菌酯SC的EC50值为30.412 3 μg·mL-1，80%克菌丹WG的EC50值为99.751 7 μg·mL-1外，均高于100 μg·mL-1，抑菌作用非常微弱。

2.2 22种杀菌剂对多主棒孢甜瓜分离物GX菌株的室内毒力比较

22种杀菌剂对多主棒孢甜瓜分离物GX菌株的室内毒力测定结果见表3，从表中得知，50%咪鲜胺锰盐WP对GX菌株菌丝的EC50为0.623 9 μg·mL-1，在1 μg·mL-1以下，具有非常好的抑菌活性。30%苯醚甲环唑SC、40%氟硅唑EC和80%福美双WG的EC50均小于5 μg·mL-1，抑菌活性很好，其中40%氟硅唑EC毒力回归方程的斜率较高，为1.134 9，说明多主棒孢甜瓜分离物GX菌株对40%氟硅唑EC的敏感性较高。43%腐霉利SC、80%克菌丹WG，20%抑霉唑EW，43%戊唑醇SC和25%腈菌唑EC对多主棒孢甜瓜分离物GX菌株菌丝的抑制效果较好，EC50均在5～10 μg·mL-1，其中20%抑霉唑EW毒力回归方程的斜率高达3.627 7，说明多主棒孢甜瓜分离物GX菌株对20%抑霉唑EW具有相当高的敏感性。22.5%异菌脲SC的EC50为10.785 5 μg·mL-1，毒力回归方程的斜率较高为1.129 2，所以22.5%异菌脲SC对多主棒孢甜瓜分离物GX菌株的抑菌效果较好且灵敏。40%嘧霉胺SC的EC50值偏高，为23.419 μg·mL-1，抑菌效果一般，但毒力回归方程的斜率很高为2.621 2，说明当40%嘧霉胺SC浓度高于23.419 μg·mL-1时，多主棒孢甜瓜分离物GX菌株对其非常敏感。其余11种杀菌剂的EC50值均高于100 μg·mL-1，说明抑菌活性有限。

3 讨 论

50%咪鲜胺锰盐WP对多主棒孢甜瓜分离物SY和GX菌株菌丝的抑制效果最好，EC50非常接近，分别为0.609 4 μg·mL-1和0.623 9 μg·mL-1。另外，30%苯醚甲环唑SC，40%氟硅唑EC，80%福美双WG和43%腐霉利SC对多主棒孢甜瓜分离物SY和GX菌株均具有非常好的抑菌活性，对应的每一种杀菌剂对SY菌株比GX菌株的EC50值都偏大，約为其2倍，说明这4种杀菌剂对GX菌株的抑菌效果更好。并且，除40%氟硅唑EC对SY菌株的毒力回归方程斜率比对GX菌株的毒力回归方程斜率略高外，30%苯醚甲环唑SC，80%福美双WG和43%腐霉利SC对SY菌株的毒力回归方程斜率均低于对GX菌株的毒力回归方程斜率，由于毒力回归曲线的斜率与病原菌对杀菌剂的敏感性成正比，因此，整体上GX菌株对这几种杀菌剂更敏感。综合考虑这4种供试杀菌剂对多主棒孢甜瓜分离物SY菌株和GX菌株的EC50和毒力回归方程斜率发现，GX菌株比SY菌株的EC50值偏小，而毒力回归曲线斜率偏大，说明，这4种杀菌剂能在更低浓度下抑制GX菌株的生长，并且随着杀菌剂浓度的增加，对GX菌株菌丝比对SY菌株菌丝生长抑制作用提高更快。

40%嘧霉胺SC，30%噁霉灵AS和30%壬菌铜ME对多主棒孢甜瓜分离物SY菌株和GX菌株的毒力回归方程斜率在供试杀菌剂中均偏大，都大于1.5，但EC50值均偏高，说明这3种杀菌剂在较高浓度下才能抑制这两个多主棒孢菌株菌丝的生长，但是随着杀菌剂浓度的增加，对菌丝生长抑制作用比其他供试杀菌剂提高更快。

20%抑霉唑EW和43%戊唑醇SC对多主棒孢甜瓜分离物SY菌株的EC50非常接近，分别为23.505 8 μg·mL-1和24.033 9 μg·mL-1，而且对GX菌株的EC50也非常接近，分别为8.577 6 μg·mL-1和8.728 5 μg·mL-1。但是毒力回归方程斜率差别很大，20%抑霉唑EW对SY菌株和GX菌株的毒力回归方程斜率分别为1.006 0和3.627 7，而43%戊唑醇SC对SY菌株和GX菌株的毒力回归方程斜率分别为3.424 8和0.932 1。这2种杀菌剂对SY菌株的EC50值都大约是GX菌株的3倍，说明，这两种杀菌剂在较低浓度时对GX菌株有更好的抑制生长作用。而随着杀菌剂浓度的增加，20%抑霉唑EW对GX菌株菌丝生长抑制作用比SY菌株提高更快，而43%戊唑醇SC则呈相反趋势。

化学防治是最直接有效的病害防治方法，国内外有关多主棒孢引起的葫芦科作物靶斑病的化学防治研究多见于黄瓜，还没有关于甜瓜靶斑病的杀菌剂筛选试验。笔者选取22种常见杀菌剂对多主棒孢甜瓜分离物SY菌株和GX菌株的室内毒力测定表明咪鲜胺锰盐的抑菌效果非常好，这同黄瓜靶斑病方面的研究类似[19-21]。有报道称苯醚甲环唑、氟硅唑和福美双能够强烈抑制多主棒孢黄瓜分离物菌丝的生长[20-22]，而本试验结果表明，多主棒孢甜瓜分离物GX菌株对这3种杀菌剂有很强的敏感性，而SY菌株敏感性稍差。黄瓜上最初选用嘧菌酯、百菌清和多菌灵防治靶斑病，取得了良好的防治效果[21-24]，但很快产生了抗药性[22]，同样的，这3种杀菌剂对多主棒孢甜瓜分离物SY菌株和GX菌株菌丝生长的抑制效果都很差。目前，黄瓜上依旧使用代森锰锌防治靶斑病[20]，而本研究结果发现，代森锰锌对多数棒孢甜瓜分离物SY菌株和GX菌株的抑制效果并不理想。戊唑醇对多主棒孢黄瓜分离物[25]和多主棒孢甜瓜分离物GX分离株都有较好的抑制效果，而在SY菌株上效果一般。

室内杀菌剂毒力测定结果虽然可以看出杀菌剂对多主棒孢甜瓜分离物菌丝生长的抑制效果，为农业生产上防治该病害提供了理论依据。但是由于受到很多因素影响，杀菌剂在培养皿里的抑菌活性和在田间植物上的作用效果不一定完全一致，因此还有待进一步做田间防效试验。

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