NT-proBNP 检测假阳性1例报道

金文青，顾嫣婷

（上海市虹口区四川北路街道社区卫生服务中心检验科，上海 200080）

慢性心力衰竭的诊断主要依据病史、临床表现、超声心动图、胸片等指标的综合评价结果[1]。但许多心力衰竭患者症状和体征可能表现不特异，因此目前常用的诊断和监测心力衰竭的指标主要有血清氨基末端B型钠尿肽原（amino-terminal pro-B-type natriuretic peptide，NT-proBNP）和B型钠尿肽（B-type natriuretic peptide，BNP）。我国相关指南推荐将NT-proBNP和BNP用于慢性心力衰竭的诊断和鉴别诊断，NT-proBNP＜300 pg/mL或BNP＜100 pg/mL可排除心力衰竭[2]。我们在采用双向侧流免疫法测定NT-proBNP时发现1例可能因患者自身抗体引起NT-proBNP假阳性的病例。

1 病例资料

1.1 病例

患者：男，80岁。2017年5月8日摔倒致右髋部疼痛，急送复旦大学附属华山医院治疗，X线检查显示右侧股骨粗隆间骨折，经排除手术禁忌后，于5月22日全麻下行内固定术，术中无输血。术后给予头孢拉定抗感染。术后收入上海市虹口区四川北路街道社区卫生服务中心进行康复治疗。既往病史：有2型糖尿病史，病程7年余，给予门冬胰岛素降糖，血糖控制不佳。既往史：20年前有甲状腺功能亢进症病史，于上海交通大学医学院附属瑞金医院治疗，具体不详；否认冠心病、高血压病、慢性支气管炎等病史。无胸闷痛、心悸、气急、少尿、水肿。传染病史：70余年前有血吸虫病史，具体治疗不详，否认肝炎、结核、伤寒等传染病史。手术外伤史：10年前因摔倒致颈椎骨折，于复旦大学附属华山医院行内固定术；否认其他手术外伤史。患者于2017年5月19日NT-proBNP首次检测结果无效，将样本1∶1稀释后重新检测，NT-proBNP＞15 000 pg/mL，达到危急值，遂报告临床，但临床反馈该患者未有任何心力衰竭的临床表现。

1.2 相关实验室指标检测结果

患者肝、肾功能指标均正常，血糖为7.89 mmoL/L，糖化血红蛋白为8.5%，糖类抗原（carbohydrate antigen，CA）19-9为8.2 U/mL，癌胚抗原为3.8 ng/mL，CA15-3为13.8 U/mL，CA125为6.1 U/mL，总前列腺特异抗原为2.1 ng/mL，游离前列腺特异抗原为0.386 ng/mL，CA72-4为1.10 U/mL，细胞角蛋白19片段为2.17 ng/mL， 神经元特异性烯醇化酶为3.3 ng/mL，鳞状细胞癌相关抗原为1.51 ng/mL，CA242为3.15 U/mL，抗双链DNA抗体＜100 IU/mL，类风湿因子为36 IU/mL，抗链球菌溶血素O为197 IU/mL ，抗谷氨酸脱羧酶抗体阴性，胰岛素抗体阴性，抗胰岛素抗体阴性，血吸虫抗体阴性，抗核抗体（颗粒型）阳性，肌酸激酶-MB同工酶质量为2.03 ng/mL，血清肌红蛋白为35 ng/mL，血清高敏肌钙蛋白T为11.6 pg/mL。

1.3 心电图及超声检查

心电图：窦性心律，完全性右束支传导阻滞。B超：左侧颈外动脉斑块形成，甲状腺未见明显异常，颈部未见肿大淋巴结；血吸虫肝病声像图，胆、胰、脾、双肾未见明显异常，胸腔腹腔未见积液。心脏超声：左室收缩舒张功能均正常，主动脉瓣轻度反流。

1.4 NT-proBNP检测方法

采用瑞莱多功能免疫检测仪[瑞莱生物工程（深圳）有限公司]及配套试剂（双向侧流免疫法）和cobas h232钠尿肽原检测卡（胶体金法，瑞士罗氏公司）检测NT-proBNP。

2 NT-proBNP检测结果及假阳性原因查找

2.1 NT-proBNP检测结果

双向侧流免疫法直接检测样本显示检测结果无效，仪器提示：C1内控带吸光度值太小，质控失控，请查明原因重新检测。根据检测原理推测可能是异嗜性自身抗体竞争结合化学偶合垫上的抗NT-proBNP抗体偶合物导致C1内控带吸光度值太小。由此将样本1∶1稀释后重新检测，结果为＞15 000 pg/mL。随后采用胶体金法检测，同样显示质控带吸光度小，未能检测出结果。而后将样本送至上海交通大学医学院附属同仁医院检验科，采用ADVIA Centaur XP 全自动化学发光免疫分析仪（德国西门子公司）及配套试剂（化学发光法）检测BNP，结果为BNP＜5 pg/mL。因此，根据该患者的BNP检测结果可排除心力衰竭，且与临床症状与体征相符。由此考虑本实验室检测系统结果为假阳性，需考虑存在干扰物质。

2.2 回收试验

采用回收试验验证是否存在干扰物质。因为原倍检测为无效结果，将样本稀释后检测，根据最小稀释倍数推出期望值，结果显示实测值与期望值的偏移明显，说明该患者血清中存在干扰物质。见表1。

表1 NT-proBNP回收实验

2.3 复检

7月11日患者样本送检，复检NT-proBNP，检测结果与之前相同，显示检测无效，将样本送至上海市第十人民医院检验科，采用cobas e601全自动电化学发光免疫分析仪（瑞士罗氏公司）及配套试剂（电化学发光法）检测NT-proBNP，结果为72.48 pmol/L，该仪器当天质控为在控。

3 随访

该患者于2017年7月14日出院，出院时神清、气平，心率70次/min，律齐。2017年8月29日随访，患者主述未有任何不适，当天采集患者静脉血，同时做心脏超声检查。心脏超声提示左室收缩舒张功能均正常，主动脉瓣轻度反流。本实验室NT-proBNP检测结果仍然为无效。将样本送至上海兰卫医学检验所，采用cobas e601全自动电化学发光免疫分析仪（瑞士罗氏公司）及配套试剂（电化学发光法）检测NT-proBNP。结果为46.16 pg/mL，仪器当天质控为在控。

4 讨论

NT-proBNP升高主要见于急慢性心力衰竭、冠心病、慢性肾病。NT-proBNP是慢性心力衰竭最强的独立预后因素之一，适用于不同严重程度的心力衰竭。如果检验结果发生假阳性会引起临床医生的错误判断，因此检测时更应小心谨慎。

本实验室使用的瑞莱多功能免疫检测仪的检测原理为双向侧流免疫法，通过双抗体夹心法制备而成。检测时样本中的NT-proBNP首先与化学偶合垫上的抗NT-proBNP抗体偶合物发生免疫反应，形成免疫复合物。免疫复合物随着样本在硝基纤维素膜上层析流动，当免疫复合物移动至硝基纤维素膜上的检测区（NT-proBNP测试带）时，与预先包被在硝基纤维素膜上的抗NT-proBNP抗体发生反应，从而被固定在检测区。血液中的NT-proBNP越多，测试带上的复合物越多，条带上的吸光度值就越高。另外，本研究还采用cobas h232钠尿肽原检测卡（胶体金法）检测NT-proBNP。该检测方法是对NT-proBNP分子表位进行单克隆抗体和多克隆抗体的检测。在血液样本中，抗体与NT-proBNP一起形成夹心复合物，将红细胞从样本中去除后，血浆流过金标记NT-proBNP夹心复合物聚集的检测区，出现红色线即表示阳性。

由于这2种检测方法均是由2个单克隆抗体组成复合体或是由单克隆抗体或多克隆抗体组成复合体的夹心免疫分析法。由于检测方法的局限性，当人体内存在人抗大鼠抗体（human anti-mouse antibody，HAMA）或异嗜性自身抗体时，除了正常的抗原抗体复合物之外，还会形成HAMA介导的固相抗体/标记抗体复合物，使检测结果变为高值，引起假阳性结果。虽然这类检测方法已经通过特殊方法尽量减少这些抗体对检测结果的影响，但在已知患者含有这些抗体时仍需小心检测[3]。本研究根据试剂说明书的要求，排除高浓度甘油三酯、胆红素及由溶血所致的高浓度血红蛋白导致的错误检测结果。回收试验结果显示该患者可能存在影响结果的抗体。检测发现该患者抗核抗体为阳性。抗核抗体属于异嗜性自身抗体的一种。有研究结果显示，酶标记抗人IgG可与非特异性吸附的IgG或类风湿因子、抗核抗体等自身抗体结合，导致假阳性的产生[4]。故推测该患者自身抗体可能是引起NT-proBNP假阳性的原因[5]。

综上所述，采用双向侧流免疫法或胶体金法检测NT-proBNP时显示结果无效，提示血清中可能存在异嗜性抗体时需注意：（1）了解患者是否已接受大鼠源性单抗免疫药物治疗；（2）检查样本是否有高浓度甘油三酯和严重黄疸；（3）稀释后检测，了解有无干扰性抗体；（4）采用不同的检测系统检测同一样本，以得到可靠的结果；（5）保存样本，以备复查；（6）告知临床医生可能引起NT-proBNP假阳性的干扰因素。