某电化学发光仪冷冻试剂再利用的可行性研究

姚 丽,王 珊,李佳琪,王莎莎

(山东省济宁市汶上县人民医院检验科 272500)

电化学发光免疫分析(ECLIA)是电化学发光和免疫测定相结合的新一代标记免疫测定技术，现已广泛应用于各种激素、肿瘤标志物等测定。罗氏e601全自动电化学发光免疫分析仪是目前检验科在该领域使用最广泛的仪器之一，具有高灵敏度、检测范围宽、重复性好、检验结果稳定可靠等优点。电化学发光试剂为原装进口，价格相对较高，测定人份固定，扫描条码自动获取试剂信息。每个检验项目试剂检测完毕后仍有30%～35%剩余量，造成了试剂的浪费，可以对试剂进行回收再利用[1-8]。另外不同保存温度的罗氏试剂对实验结果影响较大，罗氏原装试剂由M、R1、R2三联瓶组成，M试剂为免疫磁性微球或称免疫磁珠，是表面结合有单克隆抗体的磁性微球[9-13]。试剂冷冻后可能由于M试剂中的磁珠微粒很怕低温，被冻后会聚集成团，机器无法混匀完全，导致结果很不稳定。在实际工作中发现，试剂在运输和保存过程中由于各种原因被冻后，即使试剂再次复溶使用，仍会出现室内质控失控，即使定标也不能纠正，导致检验结果不可信。出现这种情况，为保证检验结果的准确，只能丢弃试剂，造成浪费。笔者又发现不同项目三联试剂瓶中的M试剂主要成分均为链霉亲和素包被的磁珠微粒，为非特异性，试剂冷冻后主要是M试剂受到影响，R1、R2试剂可能影响不大，因此考虑冷冻后的M试剂是否可以用任意剩余M试剂代替进行检测。

1 资料与方法

1.1一般资料 标本来源于本院住院和门诊患者血清。

1.2仪器与试剂 罗氏e601全自动电化学发光免疫分析仪。原装试剂为e601原装配套试剂。更换M试剂：将冷冻复溶后的M试剂轻轻混匀，用一次性吸管全部吸出丢弃，用任意项目、批号剩余的1～2瓶M试剂混匀后代替。2～8 ℃冰箱放置一夜，使其充分沉淀消除气泡备用。使用时放入仪器试剂盘，仪器自动扫描识别。定标物和质控物均为罗氏原装配套，小量分装放于-20 ℃冰箱保存。

1.3方法

1.3.1精密度验证 参考EP15-A2[14-15]，选取两个水平的质控，连续重复测定20次，计算批内精密度，要求批内精密度≤1/4允许总误差(TEa)；将两个浓度的质控品每日检测1次，连续检测20 d，计算批间精密度，要求批间精密度≤1/3 TEa。

1.3.2准确性测试 更换M试剂分别检测三碘甲状腺原氨酸(T3)、甲状腺素(T4)、促甲状腺激素(TSH)、β-人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)、黄体酮(PRG)高、低水平质控物各20次，检测分析结果是否在允许范围内。

1.3.3标本检测 分别用原装试剂和更换M试剂对低、中、高3个水平的标本各20例进行T3、T4、TSH、β-HCG、PRG的测定。

2 结 果

2.1精密度检测 更换M试剂T3、T4、TSH、β-HCG、PRG的检测，批内精密度及批间精密度结果均合格，见表1。

2.2更换M试剂准确性检测 更换M试剂测得2个水平质控物结果与原装试剂靶值结果比较，均在质控允许范围内。

2.3标本检测 2种试剂检测患者血清样品的结果呈良好的线性相关(r>0.95)，差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。

表1 更换M试剂批内、批间CV结果

表2 原装试剂与更换M试剂检测20例标本血清T3、T4、TSH、β-HCG、PRG结果比较

3 讨 论

罗氏e601全自动电化学发光免疫分析仪采用ECLIA的原理，其基本原理及大致反应过程为反应杯中加入用三联吡啶钌标记的抗体及生物素化的抗体及含抗原的待测血清，加入链霉亲和素磁性微粒，再加入三丙胺，启动电化学反应过程，激发态的二价的三联吡啶钌被还原成基态，发出的620 nm 波长的光被光电倍增管收集，根据光的强度换算成待测标本中抗原的水平。

本研究结果显示，更换M试剂检测血清T3、T4、TSH、β-HCG、PRG的重复性及准确性实验性能指标均符合相关实验要求，原装试剂与更换M试剂的比对结果呈良好的线性相关(r>0.95)，差异无统计学意义(P>0.05)，说明更换M试剂性能稳定，质量可靠。因此只要注意保存条件，冷冻试剂复溶后更换任意项目M试剂是完全可行的。

根据罗氏化学发光试剂说明书可知，原装试剂在未开封的情况下可在2～8 ℃下保存最长至规定的有效期；应用于罗氏e601电化学发光检测仪使用时间为6周，或在仪器和冰箱中交替存放8周；若开封后可在2～8 ℃下保存12周，试剂稳定性几乎不变[16]。在工作中应注意使用完原装试剂后，将其瓶盖扣紧尽量尽快放入2～8 ℃冰箱中保存，防止瓶中试剂包被的单克隆抗体活性降低捕捉抗原能力下降及防止试剂水分蒸发，造成变质。因此更换的M试剂应选择相应保存时间内的剩余试剂，最好4周内的剩余试剂。更换M试剂后应尽快使用，最好在1周内应用完毕。更换M试剂应用操作过程中应设置质控进行严密监控，如发现失控等情况，应查明原因，需要定标时应重新定标至质控通过方可进行标本检测，但需特别注意更换M试剂使用完毕，再次使用原装试剂时必须重新定标，质控在允许范围内方可进行标本检测。实践证明罗氏e601试剂冷冻后更换任意项目M试剂操作简便、检测结果可靠，可有效避免试剂浪费。