原子吸收分光光度法测定安宫牛黄丸中雄黄和朱砂的含量

贡庆欣 李文君 张进

安宫牛黄丸是我国传统药物中最负盛名的急症用药，由牛黄、水牛角、麝香、雄黄、朱砂、冰片等11味药材组成，其中雄黄和朱砂为毒性成分[1-2]。《中国药典》2015年版一部该品种项下没有规定雄黄和朱砂的含量测定，无法对其质量进行有效控制[1]。近年来针对安宫牛黄丸质量的研究主要集中在其他成分的含量，对雄黄和朱砂含量的研究很少[3-6]。本实验参照 《中国药典》并通过实验摸索，采用原子吸收分光光度法[7]测定了不同生产企业 6批安宫牛黄丸中雄黄和朱砂的主要成分砷和汞的含量，为制定该药物中雄黄和朱砂含量限度提供了依据。

1 仪器与试药

Agilent 200 SeriesAA型原子吸收分光光度计及工作站（美国Agilent公司）；CEM MARS 高通量密闭微波消解仪（美国CEM公司）；汞、砷空心阴极灯（北京有色金属研究总院），汞（Hg）单元素标准溶液（1 000 μg/ml，编号GBW08617，批号18031，中国计量科学研究院）；砷（As）单元素标准溶液（1 000 μg/ml，编号GBW08611，批号17123，中国计量科学研究院）；AL104电子天平；盐酸和硝酸均为优级纯，水为超纯水；安宫牛黄丸6批，均为市售成药，来自6家药品生产企业。

2 方法

2.1 实验方法

对照品贮备溶液的制备：精密量取砷单元素标准溶液和汞单元素标准溶液适量，分别加水制成每 1 ml含砷、汞各100μg 的溶液，即得。

标准曲线溶液的制备：精密量取砷、汞对照品贮备溶液适量，分别加 10%混合酸[硝酸-盐酸（4∶1）]溶液制成每 1 ml 含砷、汞 0 μg、1 μg、2 μg、5 μg、10 μg、20 μg、50 μg 的溶液，作为砷标准曲线溶液和汞标准曲线溶液。

供试品溶液的制备：取本品10丸，剪碎，混匀，精密称取0.2 g，置聚四氟乙烯微波消解罐中，加入硝酸 4 ml、盐酸 1 ml，置微波消解仪中消解，消解条件：功率1 600 W，5 min内由室温升至120℃，在120℃保持5 min，在5 min内由120℃升温至160℃，在160℃保持5 min，然后5 min内由160℃升温至180℃，在180℃保持20 min，最后25 min内由180℃降温至30℃。消解液放冷，转移至50 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，精密量取5 ml，置50 ml量瓶中，加 10%混合酸[硝酸-盐酸（4∶1）]溶液稀释至刻度，摇匀，即得。同法制备试剂空白溶液。

测定：精密吸取砷、汞标准曲线溶液、供试品溶液和试剂空白溶液，按照原子吸收分光光度法（火焰原子化器，标准曲线法）[7]，在 193.7 nm 波长处测定砷，在 253.7 nm 波长处测定汞，计算，即得。

2.2 方法学考察

2.2.1 阴性干扰试验 按处方工艺制备不含雄黄的阴性样品，取 6份，按2.1 实验方法测定砷的含量，结果6份样品均未检出砷，说明样品中除雄黄外的其余药材对砷的含量测定没有干扰；按处方工艺制备不含朱砂的阴性样品，取 6份，按2.1 实验方法测定汞的含量，结果6份样品均未检出汞，说明样品中除朱砂外的其余药材对汞的含量测定没有干扰。阴性干扰试验表明该方法的专属性良好。

2.2.2 线性关系考察 精密量取砷、汞对照品贮备溶液适量，加 10%混合酸[硝酸-盐酸（4∶1）]溶液分别制成每1 ml 含 砷 0 μg、1 μg、2 μg、5 μg、10 μg、20 μg、50 μg 的溶液和每 1 ml 含汞 0 μg、1 μg、2 μg、5 μg、10 μg、20 μg、50 μg的溶液，照原子吸收分光光度法（火焰原子化器，标准曲线法）[7]，在 193.7 nm 波长处测定砷的吸光度，在 253.7 nm 波长处测定汞的吸光度，以吸光度为纵坐标（ Y，ml ），以浓度为横坐标（ X，μg /ml ），得砷的回归方程Y = 5.302×10-3X +2.997×10-3，r = 0.999 6，汞的回归方程Y= 3.793×10-3X +5.638×10-3，r = 0.999 7。结果表明砷和汞的浓度在0～50 μg/ml范围内与吸光度之间线性关系良好。

2.2.3 重复性试验 称取同一批号安宫牛黄丸，剪碎，混匀，取约0.2 g，精密称定，共6份，按2.1项下方法测定砷和汞含量，结果砷的平均含量为37.87 mg/g，RSD 为1.39%，汞的平均含量为45.59 mg/g，RSD 为1.28%，表明方法的重复性性良好。

2.2.4 稳定性试验 称取同一批号安宫牛黄丸，剪碎，混匀，取约0.2 g，精密称定，共6份，分别放置0、2、4、8、12、24小时，按2.1.1项下方法测定硫化汞含量，结果砷的RSD 为1.32%，汞的RSD 为1.45%，表明在24小时内的稳定性良好。

2.2.5 加样回收试验 精密称取已知砷含量的安宫牛黄丸（批号17030006，As含量37.93mg /g）6份，每份约0.1 g，精密加入砷单元素标准溶液（1 000 μg/ml ） 4 ml，混匀，按2.1实验方法测定砷的回收率，结果平均回收率为 98.86%，RSD为1.08%。

精密称取已知汞含量的安宫牛黄丸（批号17030006，As含量45.65 mg /g）6份，每份约0.1 g，精密加入汞单元素标准溶液（1 000 μg/ml ） 4 ml，混匀，按2.1实验方法测定汞的回收率，结果平均回收率为98.95%，RSD为0.99%。

加样回收试验结果表明，该方法具有良好的准确性。

3 实验结果

精密称取6批不同批号的安宫牛黄丸样品，每批随机取3份，每份约 0.2 g，按2.1方法测定砷和汞的含量。结果见表 1、2。

表 1 安宫牛黄丸中砷的含量测定结果（n=3）

表 2 安宫牛黄丸中汞的含量测定结果（n=3）

4 讨论

目前测定砷、汞含量的方法主要有容量法[8-9]、原子吸收分光光度法（AAS）[10-12]、电感耦合等离子体原子发射光谱法（ICP-AES）[12]、电感耦合等离子体质谱法（ICP-MS）[13]等。与AAS法相比，容量法存在操作繁琐、灵敏度低、取样量大、有时消化不完全等缺点；ICP-AES法和ICP-MS由于灵敏度太高，当样品中砷、汞含量较高时，容易导致仪器被污染。AAS法灵敏度高、专属性强，适合应用于中成药中雄黄和朱砂的含量测定。

由于本品中雄黄和朱砂含量较高，用石墨炉原子化器容易导致石墨炉被污染，用氢化物发生原子化器操作相对繁琐，选择火焰原子化器操作简便，能够满足实验要求。

实验中选择不同的消解试剂进行比较，即硝酸、硝酸-盐酸（4∶1）、硝酸-盐酸（3∶2）、硝酸-过氧化氢（4∶1），结果选择硝酸-盐酸（4∶1）消解效果最好。同时还对微波消解的不同升温条件进行了比较，结果在正文中的升温条件下消解最完全。

采用本文方法对6批安宫牛黄丸中雄黄和朱砂的含量进行了测定，6批供试品中的砷含量为18.27～37.93 mg/g，汞含量为22.79～43.65 mg/g。按每丸重3 g计算，砷含量在54.81～113.79 mg /丸范围内，汞含量在 68.37～130.95 mg /丸范围内。不同厂家、批次样品含量差异较大，分析原因主要有以下几方面：（1）有的企业对所用的雄黄和朱砂药材未测定含量，可能采用不合格的雄黄和朱砂投料；（2）有的企业未按规定对雄黄和朱砂进行水飞炮制，故不敢按处方规定加入足量的雄黄和朱砂；（3）由于药典对安宫牛黄丸中的雄黄和朱砂未规定含量测定，个别企业为了降低成本，在生产中有意减少雄黄和朱砂黄的投料量。

雄黄和朱砂的主要成分分别为二硫化二砷（As2S2）和硫化汞（HgS），由于处方中只有雄黄含砷，朱砂含汞，可以根据测定砷和汞的含量来确定制剂中雄黄和朱砂的含量限度以及含量上限。建议《中国药典》增加安宫牛黄丸中雄黄和朱砂的含量测定，以有效控制生产投料，保证药品质量。