联合检测P16与SOX-2在宫颈上皮内病变中的表达及临床意义

李梅香，蔡丽萍

（南昌大学第一附属医院妇科，江西 南昌 330000）

在女性恶性肿瘤死亡疾病中，宫颈癌占第二位，目前宫颈癌是唯一一个机制明确，且可以预防的恶性肿瘤[1]。宫颈癌的癌前病变为宫颈上皮内病变（CIN），积极有效地治疗宫颈上皮内病变可降低宫颈癌的发病率。临床上用于评估宫颈上皮内病变癌变的常用分类方法为：低级别宫颈上皮内病变（LSIL）以及高级别宫颈上皮内病瘤变（HSIL）[2]。对于HPV感染不足以诊断 CIN以及CINⅠ级则为 LSIL，对于CINⅡ级及CINⅢ级则为HSIL。低级别宫颈上皮内病变与高级别宫颈上皮内病瘤变的治疗及预后均具有显著的差异性，有着不同的治疗方式，因此，诊断明确对于治疗具有重要意义[3]。病理医师主观因素易影响到CIN的分级，各分级间难以进行明确的区分，故诊断与治疗的难度增加。为了提高不同病理医师间诊断的可重复性，引进了多种生物化学标记物，其中P16、SOX-2已经在临床上广泛应用[4]。当病理医师用常规的HE染色不能明确诊断CIN时，则可以使用免疫组化法检测P16、SOX-2以进行形态学的诊断。本研究通过观察不同程度病变的宫颈组织中 P16、SOX-2阳性表达情况，探讨P16、SOX-2在病变组织中表达的意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 搜集2013年6月～2016年6月期间在本院经病理活检确诊为宫颈上皮内病变的病理组织标本80例，并搜集同期在本院经病理活检示宫颈组织正常的组织标本40例。将低级别宫颈上皮内病变组织标本设为为低级别组（n=30），将高级别宫颈上皮内病变组织标本设为高级别组（n=50），将宫颈组织正常标本设为正常组（n=40）。所有病理组织标本均经两位高年资病理医师审核确定符合本研究的要求，且病例临床资料完备，活检前均未行任何放化疗或中药等抗肿瘤治疗。

1.2 免疫组化染色检查 参照免疫组化染色质量控制要求严格执行操作程序。P16抗体、SOX-2抗体、浓缩型DAB试剂盒均来自于北京中杉金桥生物技术有限公司；其中P16抗体的克隆号为：3G5D5；SOX-2抗体的克隆号为：EP103；浓缩型DAB试剂盒的产品编号为：ZLI-9017。

1.3 结果判定 P16阳性：细胞浆呈棕黄色，SOX-2阳性：细胞核呈棕黄色。综合阳性率与染色强度进行评分：①阳性率评分：每张组织切片上观察5个高倍视野（×200），平均每高倍视野阳性细胞数占观察总细胞数的百分比；0分：阳性率＜5%；1分：阳性率在5%～25%；2分：阳性率在26%～50%；3分：阳性率在51%～75%；4分：阳性率在76%～100%。②染色强度评分：0分：无色；1分：淡黄色；2分：棕黄色；3分：棕褐色。最终阳性率评分与染色强度评分的得分相乘，若为0分，则为阴性（-）；若为1～4分，则为弱阳性（+）；若为5～12分，则为阳性（++）。

1.4 统计学方法 采用SPSS 20.0统计学软件进行统计分析，计量资料采用“x±s”表示，组间比较采用t检验；计数资料用例数（n）表示，计数资料组间率（%）的比较采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

正常组织中SOX-2、P16表达的阳性率均为0.00%，宫颈上皮内瘤变组织中SOX-2、P16表达的阳性率分别为55%（44/80）、67.5%（54/80），,见表1。低级别组内SOX-2的阳性表达率为13.33%（4/30），阴性（-）表达有26例，弱阳性（+）表达有3例，阳性（++）表达有1例；P16的阳性表达率为23.33%（7/30），阴性（-）表达有23例，弱阳性（+）表达有3例，阳性（++）表达有4例；高级别组内SOX-2的阳性表达率为80%（40/50），阴性（-）表达有10例，弱阳性（+）表达有13例，阳性（++）表达有27例；P16的阳性表达率为94%（47/50），阴性（-）表达有3例，弱阳性（+）表达有15例，阳性（++）表达有32例；组间的P16、SOX-2阳性表达率均有明显的差异性，差异具有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表1 SOX-2、P16在正常组织与宫颈上皮内瘤变组织中的表达Table 1 Sox-2 and P16 expression in normal tissue and cervical epithelial neoplasia

表2 SOX-2、P16在不同级别宫颈上皮内瘤变组织中的表达Table 2 Sox-2 and P16 expression in different levels of cervical epithelial neoplasia

3 讨论

宫颈癌是一种常见的女性恶性肿瘤，而宫颈上皮内病变是其癌前病变。明确的CIN分级诊断可以为宫颈上皮内病变提供有效的治疗方法，从而降低宫颈癌的发病率[5]。目前临床上病理活检为诊断CIN的金标准。宫颈组织标本通常采用HE染色诊断，而有一部分标本通过HE染色难以明确诊断，其受病理医师主观因素的影响较大[6]。有相关研究结果显示，不同病理医师对CINⅠ级诊断的一致性仅为64%，CINⅡ级诊断的一致性低于50%[7]。宫颈上皮内病变的病理诊断还会受到其它因素的影响。若标本采集时组织标本切片过厚，则CINⅠ级可能被诊断为CINⅡ级；若标本采集时组织标本切片过薄，则CINⅢ级可能被诊断为 CINⅡ级[8]。鳞状上皮萎缩、慢性炎症、特殊治疗、不成熟鳞状上皮化生等均有可能导致出现类似CIN病灶，从而会影响到宫颈上皮内病变的治疗。若治疗过度会对组织造成不必要的损伤，若治疗不足会使病灶残留。因此，为了提高宫颈上皮内病变病理诊断的可重复性及一致性，学术界提倡采用特异性强的生化指标来辅助诊断，如P16、SOX-2等。

在宫颈癌的发生过程中，HPV发挥着重要的作用，其中最常见的高危亚型为HPV16/18。HPV16/18在子宫颈鳞状细胞癌中的检出率较高，尽管目前还没有HPV感染导致宫颈癌发病的确切证据，但已有大量证据显示，HPV感染是宫颈癌十分常见的伴随现象[9]。P16蛋白是一种重要的HPV转染子宫颈细胞分子标志物，其聚集于宫颈细胞内，因此可以采用免疫组化染色方法进行清晰地观察。在宫颈细胞发生癌变的过程中，可通过观察P16蛋白在细胞内的表达情况而得到HPV转染细胞的直接证据。当CIN伴有慢性宫颈感染时，通过形态学的观察难以进行分级的判断，特别是样本较小，比较局限时，其重复性较差[10]。有无HPV感染可通过HPV16/18型原位杂交结果证实，但难以评价CIN的分级。在本研究结果中，正常宫颈组织的P16表达均为阴性，对于宫颈上皮内病变组织，随着病变严重程度的增加，P16的阳性表达率也明显增加。因此，P16在宫颈上皮内病变的病理诊断中具有重要意义，可以将其作为诊断及判断其病变严重程度的客观指标。

SOX-2是一种重要的转录因子，在DNA的损伤修复、肿瘤干细胞自我更新、细胞周期调节方面均有着不可替代的作用[11]。有相关文献研究发现，肿瘤干细胞的自我更新相关、宫颈癌的发生、宫颈癌细胞株的浸润转移均与SOX-2的表达密切相关[12]。在本研究结果中，正常宫颈组织的SOX-2表达均为阴性，对于宫颈上皮内病变组织，随着病变严重程度的增加，SOX-2的阳性表达率也明显增加，在高级宫颈上皮内病变组织中，SOX-2阳性表达率高达100%。该结果说明在宫颈上皮内病变的发生发展过程中均有SOX-2的参与，其阳性表达率与宫颈上皮内病变的严重程度密切相关，病变越严重，阳性率越高。SOX-2具有调控细胞的作用，其阳性表达率可能与宫颈细胞的分化程度有关，阳性表达率的升高表示宫颈上皮内病变的病情在进展。

综上所述，在宫颈上皮内病变的病理诊断中，如果将HE染色的形态学观察结合P16、SOX-2的免疫组化法检测，则能得到更加客观的诊断，且P16与SOX-2的联合检测能客观反映出宫颈上皮内病变的病变程度，提高病理诊断的精确性。