蒙医蒜变剂泻药对阿霉素致大鼠肾病综合征模型局灶性病变的影响△

张 全 萨如拉 王青春

(内蒙古国际蒙医医院，内蒙古 呼和浩特 010056)

原发性肾病综合征(NS)由多种疾病组成，主要包括：微小病变肾病(MCD)、局灶节段性肾小球硬化(FSGS)、膜性肾病、IgA肾病、膜增生性肾小球肾炎等[1]。在临床实践中，慢性肾小球肾炎肾病综合征是一种常见疾病，也是导致终未期肾病(ESRD)最常见的病因，儿童多见。诊断标准为大量尿蛋白、低蛋白血症、水肿、高血脂等特点。

局灶阶段性肾小球硬化 (FSGS) 在儿童肾病综合征中约占5%，临床常表现为激素耐药或激素依赖，很快进展为终末期肾病 (ESRD) 并需行肾脏替代治疗。儿童ESRD中20%由FSGS引起，一般认为10～15 年内2/3的病例已进展至ESRD[2]。目前尚缺乏治疗FSGS的有效药物。临床研究表明，蒙医“蒜变剂泻药”治疗肾病综合征局灶性病变临床疗效确切，但其作用机制尚未明确。为了进一步开发和利用蒙医“蒜变剂泻药”，笔者观察了蒙医“蒜变剂泻药”对阿霉素致肾病大鼠局灶性病变的治疗作用，探讨了相关机制。

1 材料

1.1 实验动物 清洁级SD大鼠60只，体重(200 20g)，雄性，由北京维通利华实验技术有限公司提供[动物合格证号：SCXK(京)2014—0003]大鼠饲养和实验均在内蒙古自治区国际蒙医医院创新蒙医药工程研究中心进行。

1.2 药物及试剂 蒙医“蒜变剂泻药”是以大蒜、金柯子、肉蔻、红花、巴豆、冰片、牛奶等组成。制作方法，水煎、过滤、浓缩至2.5g/ mL，装入瓶中待用。注射用盐酸多柔比克(ADR 阿霉素批号031106)；戊巴比妥钠由佛山市化工实验厂提供。IL-8、IL-13试剂盒由美国R&D公司生产(96T，货号201308)。

1.3 主要仪器 全自动血液生化分析仪(美国实验仪器公司生产)，721 紫外分光光度仪(美国PACKA．Rn 公司生产)，透射电镜(JEM-1200EX)，ST16R台式高速冷冻离心机(由美国Thermo公司生产)。

2 方法

2.1 分组及造模 参照Bertani[3]氏方法，将60只小鼠随机分为6组，每组10只，对照组，模型组，阳性对照组，蒙医“蒜变剂泻药”高剂量、中剂量、低剂量组，除对照组之外，其余各组大鼠尾静脉注射ADR 4mg/kg，1W 后，第二次注射3.5mg/kg，对照组用相同的方法注射相同体积的生理盐水，复制多柔比星微小病变型肾病大鼠模型。

2.2 给药 自第二次注射ADR 后次日起给药，蒙医“蒜变剂泻药”高、中、低剂量组(5.5gkg-1d-1、2.25gkg-1d-1、0.63gkg-1d-1)、阳性对照药(肾炎四味片，1.296gkg-1d-1)，对照组、模型组给予等体积生理盐水作为对照，灌胃量3mL(kgd-1)。各组均连续给药21d。

2.3 指标检测

2.3.1 一般情况 一般情况观察大鼠的精神状态、体重、体毛、进食量、饮水量、二便及活动情况等。

2.3.2 24h尿蛋白检查 将大鼠单独喂养在代谢笼中，收集24h尿液，记录尿量，分别于第7 d和第14 d、第21 d用比色法测定大鼠24h 尿蛋白定量。尿蛋白定量(mg/dL)=比色结果×100×6.43。

2.3.3 IL-8、IL-13的检测 采用酶联免疫吸附测定法测定血清IL-8、IL-13，具体步骤按照试剂说明书。

2.3.4 肾组织形态学观察 肾脏形态学检查实验第6周末杀检。取少量肾皮质组织，用2%戊二醛固定30min，再用1%锇酸固定1h，脱水，常规包埋，制作超薄切片，铀-铅双染色，用电镜观察。

3 结果

3.1 一般情况 一般情况除对照组外，尾静脉注射ADR的各组大鼠均有不同程度的腹泻，摄食减少，精神萎靡，活动减少，体毛干枯不齐，尾部苍白粗糙，甚至烂尾等现象，治疗组大鼠一般情况较好。

3.2 各组24h 尿蛋白的比较 给药后7、14、21 d，模型组大鼠尿蛋白量进行性升高，明显高于对照组(P<0.01)；给药后第7d，蒙医“蒜变剂泻药”各组尿蛋白定量均较同期模型组降低，但无显著性差异：给药后14 d，蒙医“蒜变剂泻药”各组明显低于模型组，有显著性差异(P<0.05)，21d 后蒙医“蒜变剂泻药”各组治疗作用最为显著(P<0.01)，表1。

表1 各组24h 尿蛋白的比较

注：与同期对照组比较 ，#P<0.05，##P<0.01，与同期模型组比较 *P<0.05，**P<0.01。

3.3 各组血清IL-8、IL-13的比较 造模后，模型组大鼠血清IL-8升高，IL-13降低，与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)；给药后，与模型组比较，蒙医“蒜变剂泻药”各组IL-8降低，IL-13 升高(P<0.05)，其中蒙医“蒜变剂泻药”高剂量组尤为显著，但各组间无量效关系。提示，蒙医“蒜变剂泻药”能显著改炎症因子的失调，表2。

表2 各组血清IL-8、IL-13的比较

注：与同期对照组比较#P<0.05，##P<0.01，与同期模型对照组比较*P<0.05，**P<0.01。

3.4 肾组织形态学观察 电镜显示，对照组鼠肾小球上皮的足突清楚可见，内皮窗孔清晰，基底膜均匀完整。模型组鼠肾小球上皮的足突广泛融合。蒙医“蒜变剂泻药”高剂量组鼠肾小球上皮的足突融合较模型组明显减轻，仅局部融合，图1。

4 讨论

肾病综合征发病主要与免疫机制有关，体液免疫在肾小球肾炎中的作用已被证实，抗体与肾小球的结构成分结合或循环免疫复合物沉积于肾小球内，通过补体活化和炎症细胞反应导致组织损伤。细胞免疫在介导肾小球损伤中也起重要作用，T细胞在增值和非增值性肾小球病变中起作用。同时，原发性肾小球肾炎多种病灶伴间质大量T细胞及巨噬细胞浸润，与肾小球功能失常，肾小球硬化等有关[4]。

肾小球损伤起动后，通过浸润细胞和肾小球固有细胞产生多种细胞因子和其他炎症介质，这些炎症介质又作用于肾脏固有细胞及局部浸润炎症细胞，造成炎症反应的瀑布效应。致炎性细胞因子(proinflammatory factors)与抗炎性细胞因子(anti-inflammatory factors)的相互作用可能决定肾小球炎症的发展与转归。肾小球肾炎发病机制还与血流动力学改变和遗传因素等有关。

IL-8是一种重要的趋化因子，对炎症部位炎性细胞的浸润积聚和组织损伤起重要作用。IL-13主要作用为抑制炎症反应。两者均参与细胞因子网络，调节体内免疫平衡[5]。

蒙医“蒜变剂泻药”是著名老蒙医阿日木扎用来治疗肾病综合征的良方，是以大蒜、金柯子、肉蔻、红花、巴豆、冰片、牛奶等组成的制剂，主治3种水肿病，虚、寒型浮肿，对从下肢开始浮肿到胸腔的疾病具有很好的作用。它以蒙医基础理论为指导，通过肠道、尿道将病变组织的毒物、代谢物排出人体，调节体素，从而治疗该疾病，多年的临床实践表明，蒙医“蒜变剂泻药”治疗局灶阶段性肾小球硬化具有独特效果[6]。

本研究结果表明，蒙医“蒜变剂泻药”能显著改善24h尿蛋白排泄量，减轻肾脏损害，缓解肾组织局灶性病变，而其可能与调节趋化因子IL-8和抗炎性因子IL-13网络机制，减少体液免疫反应有关。