人附睾分泌蛋白4在胰腺癌诊断中的应用

刘伟旗 刘伟玲 赵 东 刘玉华 蔡锦河

胰腺癌是目前已知肿瘤中恶性程度最高的肿瘤之一，居消化系统恶性肿瘤第2位[1]。近年全球其发病率和死亡率明显上升趋势，在美国与肿瘤相关死亡中排第4位[1]，据《2013年中国肿瘤登记年报》统计显示在我国胰腺癌列恶性肿瘤发病率第8位，人群恶性肿瘤死亡率第7位[2]，近年来随着新技术、新理念在胰腺癌诊治的应用下取得了明显进步，但形势仍不容乐观。由于胰腺癌早期癌症状态隐匿性强，临床实验室辅助诊断指标又较少，且诊断胰腺癌血清肿瘤标志物检测的特异性和敏感性都难以满足临床诊断要求，一直影响着临床对胰腺癌的诊治。近几年来随着新的肿瘤相关蛋白[3]的不断涌现，研究者期望在胰腺癌早期诊断方面有新的突破。因此，寻找胰腺癌新的肿瘤标志物成为各方关注的热点。本文拟通过对胰腺癌患者血清上人附睾蛋白4(human epididymis gene protein 4，HE4)检测，探讨血清HE4在辅助诊断胰腺癌中的临床价值。

1 材料与方法

1.1 一般资料

收集2017年5月—2018年1月广州医科大学附属肿瘤医院收治已确诊为胰腺癌患者70例，其中男43例，女27例，年龄32～77岁；健康对照组选取禅城区中心医院健康体检者51例，男34例，女17例，年龄23～76岁，疾病组与对照组年龄差异无统计学意义(P<0.05)。

1.2 标本采集

采集胰腺癌患者空腹静脉血5 mL，离心，分离血清置-70℃保存，待测；检测胰腺癌患者标本当天留取健康体检者血清标本，同时进行检测项目分析。

1.3 仪器与试剂

采用罗氏cobase 601全自动电化学发光免疫分析仪电化学发光检测血清HE4水平，试剂盒、定标品及由罗氏公司提供，严格按照相关操作规程进行操作，质控在控后方进行标本检测。

1.4 统计学处理

采用SPSS 17.0、MedCalc 15.0统计软件对实验数据进行分析，偏态分布资料分析采用非参数Mann-WhitneyU检验；绘制血清HE4在诊断胰腺癌中的ROC曲线，计算曲线下面积、特异性和敏感性。P<0.05差异有统计学意义。

2 结果

2.1 胰腺癌组与对照组血清HE4水平变化

121例研究对象血清HE4呈偏态分布，结果显示，胰腺癌组血清HE4水平明显高于对照组，两者进行比较，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

注：“-”表示无数据

2.2 血清HE4诊断胰腺癌的ROC分析

以已确认胰腺癌结果为金标准，绘制血清HE4水平在诊断胰腺癌的ROC曲线，血清HE4水平的ROC曲线下面积为0.899(P<0.05)，其诊断敏感度与特异性为77.1%和90.2%。见图1。

图1 血清HE4在辅助诊断胰腺癌的ROC曲线

3 讨论

胰腺癌的病因尚不十分清楚,一般认为慢性胰腺炎、酗酒、吸烟、肥胖等是引起胰腺癌的危险因素，接触苯类化合物可使罹患胰腺癌的风险大大增加。糖尿病也是患胰腺癌的风险因素之一，特别是低身体质量指数、新发Ⅱ型糖尿病、糖尿病家族史等患者应警惕胰腺癌的可能。同时个体遗传因素在胰腺癌的发生、发展中起着重要作用，如遗传性胰腺炎、家族性恶性黑色素瘤、Peutz-Jeghers综合征等均可能胰腺癌的发病风险显著升高。

绝大多数胰腺癌为非家族性的散发性胰腺癌，由于胰腺生理解剖位置的原因，临床特异性的症状较难发现，当出现症状表现时大多数癌症患者已发生癌症转移。研究表明胰腺癌患者确诊时大约 60%患者已发生远处转移，大约25%患者为局部晚期，不能行根治性切除术，中位生存期仅为 6～9个月；能够手术切除的患者仅为15%，5年生存率5%左右[4-5]。现临床常用CA199与癌胚抗原(CEA)辅助诊断胰腺癌，虽然CA199的特异性及敏感性在诊断胰腺癌中分别达到87%及77%[6]，但由于非恶性疾病也可导致CA199假阳性结果[6]，影响了CA199的临床应用；CEA常用于辅助诊断消化道癌症，虽然CEA与胰腺癌具有相关性，但由于它的特异性与敏感性都较低，常与其他实验室指标联合应用，有研究表明[7]CA199与CEA联合应用可提高诊断的敏感性及诊断胰腺癌是否发生转移。随着人们对胰腺癌越来越重视和实验室检测技术的不断更新，学者们迫切的希望寻找一种在胰腺癌诊断中具有足够敏感性、特异性的肿瘤标志物，但至今仍未找到一种对胰腺癌，特别是针对早期胰腺癌对临床可疑患者进行筛查。

人附睾分泌蛋白4(human sapiens epididymis specific protein 4，HE4)是一个相对分子质量较小、酸性、半胱氨酸含量丰富的分泌性蛋白，因含有2个乳酸蛋白(whey acidic protein, WAP)重链，也被称为WFDC2。自1991年在男性附睾组织中发现以来[8]，仍未完全了解HE4的全部生理功能。目前较多用来监测上皮性卵巢癌复发或进展的血清肿瘤标志物，Yang等[9]研究结果显示在卵巢癌诊断中HE4比CA125有着更高的灵敏度和特异性；同时国外已有一些关于HE4与肺癌之间关系的报道，Tokuishi 等[10]在肺癌细胞胞浆中发现了免疫荧光染色着色的HE4蛋白；Yamashita 等[11]通过免疫组化法对137例肺腺癌患者组织中 HE4 蛋白表达情况进行测定，发现41.6%的患者HE4呈阳性表达， 且HE4阳性表达者的5年无病生存率及5年总体生存率均较对应的阴性表达者明显降低；Yamashita等[12]研究发现肺癌患者HE4水平明显高于肺部良性疾病与健康对照组，因此，HE4已成为肺癌筛查指标之一。

随着对HE4功能的研究，越来越多研究表明HE4蛋白在胰腺癌患者存在高度表达，O’Neal等[13]通过组织微阵列分析技术在220例胰腺癌患者中有103例患者可检测到HE4蛋白，而在胰腺上皮肉瘤样变患者中未能检测到HE4蛋白；Galgano等[14]通过基因芯片分析技术研究证明在胰腺癌患者中HE4 mRNA出现中至高范围表达，在6份胰腺癌标本结果显示有4份为中等表达，1份为高水平表达；Faca等[15]通过蛋白质组学分析研究发现，与正常小鼠血浆相比，胰腺导管腺癌小鼠血浆中HE4蛋白明显增加。因此，HE4与胰腺癌之间存在密不可分的关系。本次研究结果显示，胰腺癌患者血清中H4水平明显高于健康体检者，两者差异有统计学意义(P<0.05)，再次证明了在胰腺癌患者血清中HE4处于高表达水平。由于血清HE4检测方法成熟，且检测时间较短，一次性抽取静脉血就能实现，大大提高了患者的依从性。以已确认胰腺癌结果为金标准，绘制血清HE4水平在诊断胰腺癌的ROC曲线，血清HE4水平的ROC曲线下面积为0.899(P<0.05)，当血清HE4水平为63.57 pmol/L时，其诊断敏感度与特异性为77.1%和90.2%。其敏感度与特异性均高于CA199。因此，对怀疑断胰腺癌患者进行血清HE4检测，有助于胰腺癌的检出率，降低临床漏诊率。

目前，临床用于诊断胰腺癌的肿瘤标志物虽然种类繁多，但由于其特异性及敏感性均尚不理想，限制了其在人群中的筛查作用。虽然超声内镜下的肿瘤穿刺对胰腺癌早期诊断检出率较高，但由于其操作复杂且价格昂贵，限制了其在临床应用的普遍性。有研究报道[17]微小RNA(miRNA)作为胰腺癌肿瘤标志物，联合CA199检测可提高对胰腺癌的诊断效能，但由于单分子miRNA尚处于研究起步阶段，且商品化试剂盒在实验室应用较少，广泛应用于临床尚需时日；而本次研究表明血清HE4在胰腺癌患者血清中呈现高表达，且敏感性与特异性均高于CA199，血清HE4检测方法学为电化学发光法，且试剂盒已实现商品化，对其在临床推广铺平了道路。因此，血清HE4可作为胰腺癌诊断肿瘤标志物，可协助临床辅助诊断胰腺癌。