参股芪口服液提取工艺研究

李小进

（山西省医药与生命科学研究院，山西太原030006）

参股芪口服液（暂命名）是由人参、西洋参、绞股蓝、黄芪、甘草提取物、调味剂低聚果糖和稳定剂海藻酸钠制成的具有提高人体免疫力的中药复方保健食品。人参作为药食两用的强壮滋补药，具有补气固脱、生津安神益智等功效；西洋参补而不燥；绞股蓝与人参功效相似；黄芪具有补中益气的功效。四味合用，补中益气功效加强。甘草既可以滋补脾胃，又可以调和诸药。

现代药理研究证实，人参能提高机体免疫功能，调节内分泌系统功能，延长细胞寿命，消除自由基，延缓大脑衰老，改善大脑功能［1］；黄芪对免疫功能有双向调节作用［2］；西洋参总皂苷可活化巨噬细胞，从而增强机体的免疫功能［3］；绞股蓝中含有136种绞股蓝皂苷，已确定其中6种绞股蓝皂苷结构与人参皂苷结构完全相同［4］；甘草免疫调节作用体现在其具有激活小鼠淋巴细胞增殖的作用，选择性增强辅助性T淋巴细胞的增殖力与活性，调节多种细胞因子的生成与分泌［5］。本研究比较高速离心方法和水醇法处理传统方法提取的总皂苷含量，探索研制参股芪口服液的最佳提取工艺。

1 仪器与材料

1.1 仪器

高效液相色谱仪（Agilent 1200 series）；ELSD检测器（Agilent 3300）；高速离心机（型号LYNX 6000），Thermo公司。

1.2 试剂与材料

人参、西洋参、绞股蓝、黄芪、甘草饮片均购自山西省中医院药房，低聚果糖、海藻酸钠均购自山西国药集团；所用试剂乙腈为色谱纯，磷酸、乙醇均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 配方与产品

按照5 d配方量设计配方：人参80 g，西洋参100 g，绞股蓝 250 g，黄芪 200 g，甘草 60 g，低聚果糖70 g，海藻酸钠2 g。经水煮等工艺，制成1 000 mL成品，按10 mL/支规格灌装。

2.2 供试品溶液的制备

取口服液5只，合并口服液，滤过，取续滤液1 mL，置10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，滤过即得。

2.3 含量测定

参照药典方法［6］以人参皂苷为含量指标测定提取液总皂苷含量。

2.3.1 色谱条件与系统适用性实验 采用高效液相色谱仪（Angilent 1200 series），十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，乙腈（A）和0.1%磷酸溶液（B）以不同比例混合为流动相，采用紫外检测器进行检测，检测波长为203 nm，柱温20℃，流速1 mL/min，进样量20 μL，理论塔板数按人参皂苷Re计算不低于1 500。

2.3.2 线性关系考察 精密称取人参皂昔Re对照品0.501 mg，加流动相（乙腈-0.1%磷酸溶液，20∶80）配制成浓度为 0.501 mg/mL 的对照品溶液，精密吸取 1 mL，2 mL，4 mL，6 mL，8 mL，10 mL 置10 mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，分别进样20 μL，测定峰面积，以峰面积（Y）对进样量（X，μg）进行线性回归，回归方程为：Y=170.34 X+1.18，r=0.999 8，人参皂苷 Re 在 l～10.000 μg 范围内与峰面积呈良好的线性关系。结果见表1。

表1 线性关系考察

2.3.3 精密度考察 精密吸取人参皂苷对照品溶液（0.501 mg／mL）5 mL置于10 mL量瓶中加流动相稀释至刻度，摇匀，重复5次进样20 μL，测定峰面积，计算含量。结果RSD为1.15%（n＝5），表明仪器精密度良好。结果见表2。

表2 精密度考察

2.3.4 重复性考察 精密吸取同一批口服液样品溶液20 μL，连续重复进样5次，记录峰面积，计算结果，平均值0.45%，RSD=1.93%，表明重复性良好。结果见表3。

表3 重复性考察结果

2.3.5 回收率实验 取同一批口服液样品5只，分别加入1.00 mL混和标准品储备液，水浴锅加热至10 mL以下，置10 mL量瓶中补足体积，进样20 μL，计算加样回收率。结果见表4。

表4 加样回收率

2.4 提取方法

按照传统提取煎煮的方法，按配方称量饮片，提取2次，第1次煎煮前浸泡4 h，分别加入12倍和10倍量的去离子水，每次煎煮均用1 h时间，合并提取液，浓缩至700 mL左右，即可。

2.4.1 高速离心工艺流程 上述提取浓缩液分别加入低聚果糖和海藻酸钠并充分搅拌，冷藏、静置24 h，调节pH值，高速离心，加入去离子水至1 000 mL，分装、灌封、灭菌，即得。

2.4.2 水醇法工艺流程 上述提取浓缩液继续浓缩至400 mL，放冷，加入乙醇1 100 mL充分搅拌，放置24 h过滤，回收乙醇并浓缩至700 mL左右，加入去离子水至1 000 mL，分装、灌封、灭菌，即得。

2.5 样品含量测定

2种工艺生产的样品各3批（样品I为高速离心工艺生产：20160701、20160702、20170703；样品II 为 水 醇 法 工 艺 生 产 ：20160704、20160705、20160706），分别取溶液 20 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法，以峰面积计算含量。含量测定结果表明，高速离心方法处理提取液保留了更多的总皂苷。结果见表5。

表5 供试品含量测定

2.6 样品比较

2.6.1 外观观察 色泽：样品I为深黄棕色，样品Ⅱ为浅黄棕色。澄清度：样品I、Ⅱ澄清，均无沉淀。有效成分含量：样品I中所含总皂苷量明显高于样品Ⅱ。

2.6.2 留样观察 分别取上述各批号的药液放置12个月，观察其变化。色泽：基本无变化，样品I为深黄棕色，样品Ⅱ为浅黄棕色。澄明度：样品I、Ⅱ澄清，均无沉淀。有效成分含量：样品I中所含总皂苷量明显高于样品Ⅱ。原料成本及生产周期：高速离心法比水醇法节省了大量乙醇、蒸馏水等，降低了原料成本，缩短了生产周期。

3 讨论

本产品中有效成分主要为以人参皂苷Re为代表的总皂苷及多糖，以总皂苷含量为指标作为衡量产品的定量指标。结果表明，水醇法制备参股芪口服液工艺成本较高，有效成分损失较大。高速离心法是一种物理的分离法，它除去的是水不溶的固体杂质，有效地保留了绝大部可溶性有效成分，从而节省了大量物料和能源，降低了产品的成本。因此高速离心法简便可行，适宜工业化生产，值得进一步推广。