Ebp1和Ki67蛋白在胃癌组织中的表达变化及临床意义

权明吉，朴正根，滕永旺，许东元，刘兰，金头峰

(1 延边大学附属医院，吉林延吉133000；2 济宁市第一人民医院)

胃癌是全球常见的消化道恶性肿瘤之一，因其发病率及病死率高而严重影响人们的生命及健康。近年来随着分子生物技术的发展，胃癌分子靶向治疗研究成为了热点。表皮生长因子受体(HER)家族包括HER1(EGFR)、HER2(ErbB2)、HER3(ErbB3)和HER4(ErbB4)4个成员，能调节细胞生长、分化、迁移及其他细胞功能。已有研究发现，HER2为靶点的靶向治疗能延长胃癌患者的总生存期[1]。Ebp1蛋白是一种最新发现的ErbB3结合蛋白，在乳腺癌、宫颈癌、前列腺癌、肝癌等多种肿瘤组织中异常表达，且Ebp1蛋白表达与各肿瘤的临床分期及预后等有关[2～5]。有研究表明，胃癌组织中ErbB3较正常胃组织表达增高，在胃癌中起到重要作用[6]。故Ebp1蛋白作为ErbB3的结合蛋白，有可能与胃癌有关。Ki67蛋白是一种增殖细胞相关核蛋白，可反映细胞的增殖状况，且作为重要的细胞增殖标记物，应用于各种肿瘤疾病的研究中。有研究报道，Ki67蛋白在胃癌组织中高表达，且与胃癌的病理特征及预后相关[7～9]。但目前Ebp1蛋白在胃癌组织中的表达变化及Ebp1和Ki67蛋白在胃癌组织中表达的相关性鲜有报道。本研究通过检测胃癌组织及癌旁组织中Ebp1和Ki67蛋白的表达差异，探讨二者的相关性，为胃癌的发生、发展机制研究及分子靶向治疗提供新思路。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集延边大学附属医院2011年1月～2013年11月收治的胃癌患者121例，术中均留取癌组织。患者中男90例，女31例；年龄<60岁37例，≥60岁84例；汉族79例，朝鲜族42例；肿瘤组织高中分化40例，低分化81例；肿瘤直径<5 cm 71例，≥5 cm 50例；Borrmann分型Ⅰ型+Ⅱ型102例，Ⅲ型+Ⅳ型19例；TNM分期T1～T2期17例，T3～T4期104例；淋巴结转移84例，无淋巴结转移37例。术中另收集60例患者相应的癌旁组织作为对照，男32例，女28例；年龄<60岁26例，≥60岁34例；汉族41例，朝鲜族19例。术前均未行放、化疗，术后病理学检查证实癌组织均为胃腺癌、相应癌旁组织均未见累及。本研究经医院医学伦理委员会批准，患者均知情同意。

1.2 Ebp1和Ki67蛋白检测方法 采用免疫组化SP法。所有样本离体后经4%甲醛固定，石蜡包埋，4 μm连续切片；常规二甲苯脱蜡，梯度乙醇脱水；抗原热修复，在0.01 mol/L的枸橼酸缓冲液(pH 6.0)中煮沸10 min，自然冷却；3% H2O2孵育，灭活内源性过氧化物酶，PBS冲洗；血清封闭后，滴加一抗，4 ℃过夜孵育，PBS冲洗；滴加聚合酶辅助剂，37 ℃孵育20 min，PBS冲洗；滴加辣根过氧化物酶标记的多抗，37 ℃孵育30 min，DAB显色，冲洗、复染、脱水、封片。以试剂盒自带的阳性对照片作为阳性对照，用PBS代替一抗作阴性对照。Ki67蛋白阳性表现为细胞核呈棕黄色；Ebp1蛋白阳性表现为细胞核呈黄色或棕褐色，细胞质偶可出现着色。随机选5个高倍镜视野，根据阳性细胞百分率及染色强度判断结果。阳性细胞百分率<10%为0分、10%～<25%为1分、25%～<50%为2分、≥50%为3分，染色强度淡黄色为1分、棕黄色为2分、棕褐色为3分。两项指标得分相乘，0为-，1～2为+，3～4为++，5以上为+++。+～+++判为阳性表达。

1.3 统计学方法 采用SPSS20.0统计软件。计数资料以百分数表示，胃癌组织与癌旁组织中Ebp1和Ki67蛋白表达比较行χ2检验，Spearman等级相关分析Ebp1和Ki67蛋白的相关性。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 Ebp1和ki67蛋白在胃癌组织及癌旁组织中的表达 胃癌组织Ebp1和Ki67蛋白阳性表达率分别为26.45%(32/121)、73.55%(89/121)，均高于癌旁组织的5.00%(3/60)和0(P均<0.05)。

2.2 Ebp1和Ki67蛋白阳性表达与胃癌临床病理参数的关系 Ebp1蛋白在Borrmann分型Ⅲ型+Ⅳ型、低分化、有淋巴结转移胃癌组织中的阳性表达率均高于Borrmann分型Ⅰ型+Ⅱ型、高中分化及无淋巴结转移者(P均<0.05)，但Ebp1蛋白表达在不同性别、年龄、民族患者及肿瘤直径、TNM分期之间差异无统计学意义(P均>0.05)。Ki67蛋白在Borrmann分型Ⅲ型+Ⅳ型、低分化、TNM分期T3～T4期、有淋巴结转移胃癌组织中的阳性表达率均高于Borrmann分型Ⅰ型+Ⅱ型、高中分化、TNM分期T1～T2期、无淋巴结转移者(P均<0.05)，但Ki67蛋白表达在不同性别、年龄、民族患者及肿瘤直径之间差异无统计学意义(P均>0.05)。见表1。

2.3 胃癌组织中Ebp1和ki67蛋白表达的关系 胃癌组织中Ebp1蛋白与Ki67蛋白表达呈正相关(r=0.34，P<0.05)。见表2。

表1 Ebp1和Ki67蛋白阳性表达与胃癌临床病理参数的关系

表2 胃癌组织中Ebp1和Ki67蛋白表达的关系(例)

3 讨论

这些年来，人们虽然不断深入研究胃癌的发生及发展机制，不断提高胃癌的临床诊断及治疗技术，但胃癌的发病率及病死率仍不低。而在中国，不仅胃癌的发病率及病死率高，早期胃癌发现率低，更有胃癌年轻化倾向[10]。所以，一直以来攻克胃癌是许多临床医师及基础研究者们的愿望。本研究采用免疫组化SP法检测Ebp1蛋白在胃癌组织及癌旁组织中的表达，发现Ebp1蛋白在胃癌组织中的阳性表达率高于癌旁组织。这与Gannon等[4]在前列腺中及Liu等[3]在宫颈癌中的研究结果相一致。进一步分析Ebp1蛋白阳性表达与胃癌临床病理参数的关系，发现Ebp1蛋白在Borrmann分型Ⅲ型+Ⅳ型、低分化、有淋巴结转移胃癌组织中的阳性表达率均高于Borrmann分型Ⅰ型+Ⅱ型、高中分化及无淋巴结转移者，但Ebp1蛋白表达在不同性别、年龄、民族患者及肿瘤直径、TNM分期之间差异无统计学意义。这表示Ebp1蛋白在胃癌组织中高表达，且与胃癌的Borrmann分型、分化程度及淋巴结有无转移相关。Ki67蛋白是目前研究者们认可的与细胞增殖相关的一种细胞核抗原标记物，其功能与有丝分裂有关。Ki67蛋白在细胞分裂早期表达水平较低，而随着细胞分裂表达水平逐渐增高，M期到达最高值，之后随着细胞分裂过程结束，表达水平逐渐下降。Ki67蛋白作为肿瘤增殖标记物，应用于肿瘤的基础及临床研究中[11]。本研究结果显示，Ki67蛋白在Borrmann分型Ⅲ型+Ⅳ型、低分化、TNM分期T3～T4期、有淋巴结转移胃癌组织中的阳性表达率均高于Borrmann分型Ⅰ型+Ⅱ型、高中分化、TNM分期T1～T2期、无淋巴结转移者，但Ki67蛋白表达在不同性别、年龄、民族患者及肿瘤直径之间差异无统计学意义。这表明Ki67在胃癌中高表达，且与胃癌的Borrmann分型、分化程度、肿瘤TNM分期及有无淋巴结转移相关。这与刘伟等[8]研究结果基本一致，且与其他研究[7,9]结果有相同之处。

我们进一步分析了Ebp1和Ki67蛋白之间的相关性，发现Ebp1和Ki67蛋白在胃癌组织中的表达呈正相关，这与刘兰等[12]在宫颈癌组织中研究结果相一致。而Ki67蛋白是常见的肿瘤增殖相关标志物之一，因此我们考虑Ebp1蛋白可能与胃癌细胞增殖有关。Kim等[13]报道，神经胶质瘤细胞中Ebp1蛋白有促进肿瘤细胞增殖及侵袭作用；但与之相反，崔玲玲等[14]认为在贲门癌中Ebp1蛋白有抑制肿瘤增殖作用。究其原因，可能与Ebp1蛋白有两种亚型p48及p42有关。有研究者认为，p48有致癌作用，能促进肿瘤的增殖，而p42可能有调节基因转录功能，是一种有效的肿瘤抑制物，抑制肿瘤的增殖[15]。在不同组织中，p48及p42表达量不同，可能对肿瘤有着不同的作用，当然这有待进一步研究。

总之，本研究发现Ebp1与Ki67蛋白在胃癌的发生、发展过程中起着重要作用，二者可能有相互促进作用；Ebp1和Ki67蛋白表达阳性的患者肿瘤恶性程度更高、侵袭和转移的倾向也更强，因此联合检测Ebp1及Ki67蛋白有助于判断胃癌的恶性程度及侵袭、转移能力，且Ebp1蛋白有望成为抑制肿瘤增殖的新靶点。