血清miR-375、TSGF、SCC联合检测对宫颈癌的诊断价值

邓岳红，钱沁佳

(海南省第三人民医院，海南三亚572000)

宫颈癌是常见的妇科肿瘤之一。宫颈癌早期患者无明显的症状和体征，易造成漏诊或误诊[1]。随着宫颈细胞学筛查的普及，宫颈癌及宫颈上皮内瘤变的早期检出率逐渐提高，病死率明显下降[2，3]。然而宫颈细胞学检查因假阴性率较高而逐渐被取代。血清学检查具有便捷、快速、灵敏度高等特点，受到临床的广泛应用。恶性肿瘤特异性生长因子(TSGF)为广谱肿瘤标志物，对多种恶性肿瘤均具有较高的敏感度；鳞癌抗原(SCC)现已广泛用于宫颈癌的早期诊断及预后，微小RNA-375(miR-375)在食管癌及前列腺癌等患者体内表达降低，并有报道指出其在宫颈癌组织中表达同样下调。目前关于三者联合检测对宫颈癌的诊断价值报道少见。本研究通过观察宫颈癌患者血清miR-375、TSGF、SCC水平变化情况，探讨其对宫颈癌的诊断价值。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2015年8月～2017年9月我院收治的宫颈癌患者32例(宫颈癌组)，年龄35～74(53.25±4.67)岁。根据2000版国际妇产科联盟标准进行FIGO分期，Ⅰ～Ⅱ期13例，Ⅲ～Ⅳ期19例。宫颈上皮内瘤变患者23例(宫颈上皮内瘤变组)，年龄28～70(50.67±7.05)岁。同期健康体检者25例(对照组)，年龄24～68(54.37±5.58)岁。三组年龄具有可比性。本研究经我院医学伦理委员会批准，研究对象均签署知情同意书。

1.2 检测方法 采集受试者空腹静脉血5 mL，离心提取上清液，-80 ℃保存待测。①血清miR-375检测：采用实时荧光定量PCR法。使用miRNA提取试剂盒提取总miRNA，反转录合成cDNA。以cDNA为模板，用荧光定量PCR检测试剂盒进行检测。采用2-ΔΔCt法计算目的基因的相对表达量。②血清TSGF检测：采用光度比色法。取40 μL血清，加入试剂1 mL，吸取上清液于波长470 nm比色，全自动生化分析仪测定吸光度，根据标准曲线计算其含量。③血清SCC检测：采用ELISA法。取200 μL血清，使用SCC ELISA试剂盒及全自动酶联免疫分析仪BIOBASE2000测定其含量。

1.3 统计学方法 采用SPSS19.0统计软件。计量资料数据服从正态分布，采用x±s表示，三组比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验；若不服从正态分布，则用中位数(四分位数间距)表示，三组间比较采用Kruskal-WallisH方法，组间两两比较采用Mann-WhitneyU比较。通过二元Logistic回归分析计算各肿瘤标志物诊断宫颈癌的概率预测值，以miR-375、TSGF、SCC单独和联合检测的预测概率值为因变量，以诊断结果为状态变量绘制ROC曲线，计算曲线下面积(AUC)，比较各指标的诊断效能。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 三组血清miR-375、TSGF、SCC水平比较 宫颈癌组、宫颈上皮内瘤变组、对照组血清miR-375的相对表达量分别为0.31(0.21，0.58)、0.82(0.63，1.83)、1.29(1.06，1.61)，宫颈癌组低于宫颈上皮内瘤变组和对照组，宫颈上皮内瘤变组低于对照组(P均<0.05)。三组血清TSGF水平分别为(83.85±17.47)、(65.49±8.81)、(68.35±11.10)U/mL，宫颈癌组高于宫颈上皮内瘤变组和对照组(P均<0.05)，宫颈上皮内瘤变组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。三组血清SCC水平分别为(4.07±2.28)、(1.76±0.98)、(0.78±0.39)μg/L，宫颈癌组高于宫颈上皮内瘤变组和对照组，宫颈上皮内瘤变组高于对照组(P均<0.05)。

2.2 血清miR-375、TSGF、SCC诊断宫颈癌的效能 见图1。单独诊断宫颈癌时，miR-375诊断价值最大，SCC诊断价值最小，三者联合检测诊断价值高于单独指标检测，见表1。miR-375的敏感度、特异度、准确率高于TSGF、SCC，三者联合检测诊断宫颈癌的敏感度、特异度及准确率均高于单独指标检测。见表2。

图1 miR-375、TSGF、SCC单独和联合检测诊断宫颈癌的ROC曲线

表1 miR-375、TSGF、SCC单独和联合检测诊断宫颈癌的AUC结果

表2 miR-375、TSGF、SCC单独和联合检测对宫颈癌的诊断价值(%)

3 讨论

宫颈癌患者在早期无特殊表现，随着病情的不断加重，发展至中晚期时，患者会出现不规则流血等症状，并且对于年轻女性危害更大，因此提高宫颈癌的早期诊断率至关重要。目前诊断宫颈癌的手段多依靠宫颈刮片、阴道镜等传统检查方式，此类方法漏诊率较高；近年来，随着对肿瘤标志物及RNA研究的深入，有学者提出结合肿瘤标志物及RNA诊断宫颈癌具有较高的诊断价值。

miRNA是真核生物体内的一类非编码小RNA分子，其长度为18～22个核苷酸，参与细胞的增殖、分化及凋亡[4]。研究显示，miR-375可结合转录因子SP1抑制宫颈癌细胞的转移，并且发现其在宫颈癌患者肿瘤组织中表达下调[5～7]。Hao等[8]报道，宫颈癌Ⅲ～Ⅳ期患者血清miR-375表达水平低于宫颈癌Ⅰ～Ⅱ期患者，认为miR-375不仅可作为宫颈癌的诊断标志物，并且能在一定程度上反映病情的严重程度。本研究结果显示，宫颈癌组血清miR-375表达低于宫颈上皮内瘤变组和对照组，宫颈上皮内瘤变组低于对照组。表明宫颈癌患者miR-375表达减少，肿瘤细胞受抑制作用减弱，增殖转移的概率增大。

TSGF是恶性肿瘤生长相关的糖类物质和代谢物等物质的统称，其特点是在肿瘤形成的早期浓度就已经很高，异于其他肿瘤标志物[9～11]。TSGF水平升高可加快肿瘤组织血管增生，促进血管网形成，并参与肿瘤组织的形成、生长及扩散[12]。本研究结果显示，宫颈癌组血清TSGF水平高于宫颈上皮内瘤变组和对照组，提示TSGF可作为判别宫颈癌与宫颈其他疾病的标志物；而宫颈上皮内瘤变组血清TSGF水平与对照组比较差异无统计学意义，表明TSGF为肿瘤特异性标志物，在非癌变组织表达无明显变化。

SCC是从鳞状上皮细胞中分离出来的抗原物质，参与正常和恶变时的蛋白分解调控，是子宫颈鳞癌的首选肿瘤标志物[13]。SCC主要存在于宫颈、头颈等鳞状上皮细胞中，在高分化的细胞中敏感性更高[14]。本研究结果显示，宫颈癌组血清SCC水平高于宫颈上皮内瘤变组和对照组，宫颈上皮内瘤变组高于对照组，表明SCC可作为区别宫颈癌及宫颈上皮内瘤变的指标，并且其水平在恶性病变组织中表达明显升高，早期进行检测可敏感、准确地诊断疾病。

本研究进一步分析了miR-375、TSGF、SCC单独和联合检测对宫颈癌的诊断价值。结果表明，单独指标检测诊断宫颈癌时，miR-375诊断价值较大，SCC诊断价值最小，联合检测诊断价值高于单独指标检测;联合诊断的敏感度、特异性及准确率均高于单独肿瘤标志物检测。

综上所述，宫颈癌患者血清TSGF、SCC水平升高，miR-375水平降低，三者联合检测有助于宫颈癌的诊断。