孤儿核受体Nur77在卵巢癌组织中的表达及意义

张慧慧，王 佩，何茂旭，裴 越，付 莉*

(1.临沂市妇女儿童医院 妇产科,山东 临沂276000；2.吉林大学第二医院 妇产科,吉林 长春130041)

卵巢癌在妇科恶性肿瘤中发病率居第三位，死亡率居首位，其发生发展机制一直是临床研究探索的重点。Nur77属于孤儿受体超家族，该家族有3 个成员：Nur77、Nurr1和 Nor-1。研究发现，Nur77对肿瘤细胞的生长是把双刃剑，既能促进肿瘤细胞增殖，又能导致其凋亡。而其在决定细胞死亡或生长方面表现出不同的作用主要依赖于其在线粒体或细胞核的不同定位。Nur77广泛表达于各种组织，在肺癌、胃癌、结肠癌和横纹肌肉瘤等肿瘤中常过度表达[1-3]，但在卵巢癌中Nur77是否过度表达，以及Nur77在卵巢癌的发生发展过程中是发挥了促进肿瘤生长的作用还是促进肿瘤细胞凋亡的作用，目前尚无定论。本研究利用免疫组化法检测Nur77在卵巢癌组织中的表达，分析卵巢癌组织中Nur77的表达与患者的临床手术分期及术后3年生存率之间的关系。

1 资料与方法

1.1临床资料

本实验所有卵巢组织标本均选自吉林大学第二医院妇产科2012年至2013年住院患者的手术标本存档蜡块，共60例。所有组织切片标本均已由同一病理科医生重新阅片确认。本研究分为4组，卵巢癌组：卵巢上皮性癌组织30例，其中浆液性囊腺癌21例，黏液性囊腺癌9例；交界性卵巢肿瘤组：交界性卵巢上皮性肿瘤10 例；良性卵巢肿瘤组：良性卵巢上皮性肿瘤10例；正常卵巢组：正常卵巢组织10例。卵巢癌组病理分级：高分化5例，中分化6例，低分化15例，未分化4例；卵巢癌组手术—病理分期(按FIGO 2013标准)：Ⅰ期11例，Ⅱ期5例，Ⅲ期11例，Ⅳ期3例；其中盆腔淋巴结转移者11例。

1.2主要试剂

兔抗人多克隆抗体购自abcam 生物技术有限公司，免疫组化试剂盒购于北京中衫金桥公司。

1.3方法

采用免疫组化法检测孤儿核受体Nur77在卵巢癌组织中的表达及定位。每批切片均设阴性对照，阴性对照以磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗。苏木素复染。Nur77抗原修复采用柠檬酸缓冲液煮沸冷却法。兔抗人Nur77抗体工作浓度为1∶120。染色方法按免疫组化试剂盒说明书进行。

1.4图像采集分析方法

数码显微镜捕捉免疫组化图片(jpg格式)。利用IPP6.0软件计数细胞：阳性细胞百分比记分按视野内阳性细胞所占总细胞数的比例记分，≤5%、5%-25%、26%-50%、51%-75%、>75%分别记分为0、1、2、3、4分。着色强度记分：按阳性细胞着色(颜色)无、弱(淡黄)、中(棕黄)、强(棕褐)分别记分为 0、1、2、3 分。 结果判定：本实验中每张切片随机取5个400倍视野，每个视野均进行阳性细胞百分比计分与着色强度记分，上述两种记分结果相加，0-1分为阴性(-)；2-3分为弱阳性(+)；4-5分为阳性(++)；6-7分为强阳性(+++)。

1.5统计学方法

用 SPSS 19.0 软件包对数据进行统计分析，应用卡方检验和Fisher 确切概率检验进行数据分析。若P>0.05，则表明不存在统计学差异；若P<0.05，则表明存在统计学差异。

2 结果

2.1四组卵巢组织中Nur77的表达情况

本实验研究表明Nur77表达主要定位于细胞核中，少量表达于细胞浆中，呈均匀的棕黄色、棕褐色颗粒状或片状分布。且Nur77主要表达在卵巢癌组及交界性卵巢肿瘤组中，在良性卵巢肿瘤组和正常卵巢组中，多数呈阴性表达，或者微弱的表达。Nur77在卵巢癌组的阳性表达率为70.00%，明显高于其他各组，差异具有统计学意义(P<0.05)，交界性卵巢肿瘤组的阳性表达率虽然高于良性卵巢肿瘤组及正常卵巢组，但差异无统计学意义(P>0.05)(见表1) 。

表1 各组卵巢组织中Nur77表达的比较

* P1、P2、P3为卵巢癌组与交界性卵巢肿瘤组、良性卵巢肿瘤组和正常卵巢组进行比较，P<0.05。

2.2Nur77的表达与卵巢癌临床病理参数分期的关系

在卵巢癌组中，Ⅰ-Ⅱ期及Ⅲ-Ⅳ期的阳性表达率分别为50.00%、92.86%，两者比较差异具有统计学意义(P<0.05)，表明Nur77的阳性率随着临床分期增加而增加(见表2)。

表2 Nur77阳性表达率与卵巢上皮性癌临床病理参数的关系

2.3Nur77的表达强度与患者术后3年复发死亡率的关系

在卵巢癌组中，Nur77阳性的患者术后3年复发死亡率为80.95%，明显高于Nur77阴性的患者，差异具有统计学意义(P<0.05)。但患者术后3年的复发死亡率与Nur77的表达强度之间差异没有统计学意义(P>0.05)(见表3)。

表3 Nur77的表达强度与患者术后3年复发死亡率的关系

*P1为卵巢癌组织中Nur77表达阴性与阳性的患者术后3年复发死亡率的比较 P2为卵巢癌组织中Nur77阳性表达强度间的患者术后3年复发死亡率的比较

3 讨论

Nur77定位于12q13染色体上，基因全长为2699bp，由NR4A1编码，Nur77与Nurr1及Nor-1组成孤儿核受体亚家族。这些核受体家族成员是具有高度同源性的核转录因子，与核受体超家族成员具有共同的结构特点。在癌组织或肿瘤细胞中 Nur77受到异常激活，往往呈现高水平的表达、亚细胞定位发生改变、以及复杂的翻译后修饰等表征[4]。当Nur77定位于细胞核时，作为核转录因子调控下游基因的转录，启动细胞的增殖过程；而当细胞受到凋亡因子刺激时，Nur77从细胞核转移至线粒体，与Bc1-2相互作用，引起细胞色素C的释放，诱导细胞凋亡。

Nur77的高水平表达是许多肿瘤赖以存活、增殖、恶性转化的前提条件[5]。Lee等[6]研究证实，约80%的胰腺癌组织中Nur77高表达，而正常的胰腺组织中仅有20%表达Nur77。并且当内源Nur77被敲除后，胰腺癌细胞的生长会被抑制，细胞内的生存因子也会下调。Kollurid等[7]的研究证实，在肺癌细胞系H460和Calu-6中，Nur77能够在表皮生长因子、血清等促有丝分裂刺激物作用下强烈地表达，促进细胞增殖生长。当细胞转染外源Nur77质粒时，细胞周期进程会加速，同时S/G 2期的细胞数目也会增加，而抑制内源Nur77表达水平时则明显抑制H460细胞生长。此外，Nur77还具有促进肿瘤细胞的转移能力。Wang等[8]发现，在结肠癌中发生侵袭转移的癌细胞内Nur77呈现高水平表达。同时，在结肠癌细胞HCT116中，当Nur77结合到基质金属蛋白酶9(matrix metalloprotein-9，MMP9)启动子上，激活MMP9转录，会加速癌细胞的侵袭转移。To等[9]研究发现，当Nur 77在低氧环境下诱导表达水平增强时，结肠癌细胞的迁移、侵袭及表层上皮间质转化过程也会同时增强。由此我们推测，孤儿核受体Nur77有可能与卵巢癌的发生及发展有关。

本研究结果显示：Nur77在卵巢上皮性癌组织中的表达明显高于交界性卵巢上皮性肿瘤、良性卵巢上皮性肿瘤及正常卵巢组织，而且，卵巢上皮性癌中，Nur77表达水平随着临床病理分期的增加而增加。但Nur77的阳性表达率与卵巢癌组织的病理分型、分化程度以及是否有淋巴结转移无关。此外，随访发现Nur77阳性的患者术后3年的复发死亡率明显增加。提示Nur77可能与卵巢癌的发生和发展有关。

Nur77在卵巢肿瘤方面的研究尚处于起步阶段，本文对于Nur77与卵巢肿瘤的关系仅仅只是初步探讨，研究结果提示孤儿核受体Nur77很可能是促进卵巢癌发生发展的相关因子。今后，我们还要进一步深入研究，探讨Nur77促进卵巢癌发生发展的机制。