高效液相色谱柱后衍生荧光法测定蔬菜中克百威含量

何旭东 李红梅

摘 要：本文建立了高效液相色谱柱后衍生-荧光法测定蔬菜中克百威含量实验方法。色谱柱采用安捷伦C18柱（25cm×4.6mm，5μm），以甲醇和水为流动相（80+20，V/V%），柱后衍生后，采用荧光检测器测定蔬菜中克百威的含量。克百威的线性范围分别为0.1～1μg/mL，最低检出限为0.01μg/mL，平均加标回收率为90.8%，相对标准偏差1.1%。该方法适用于蔬菜中克百威含量定量分析。

关键词：克百威；高效液相色谱；荧光检测器

中图分类号：S482.3 文献标识码：A 文章编号：1671-2064（2018）18-0246-02

克百威[1-5]属高毒杀虫剂，是广谱性杀虫、杀线虫剂，具有触杀和胃毒作用。1986年在我国正式登记使用，而在2002年，我国农业部发布199号公告，禁止在蔬菜中使用克百威农药，国家标准GB 2763-2017[6]规定蔬菜中克百威限量0.02mg/kg。本文采用乙腈提取蔬菜中克百威，氨基柱净化定容，柱后衍生高效液相色谱-荧光检测器定量，适用于蔬菜中克百威含量的测定。

1 材料与方法

1.1 材料和仪器

克百威标准品（上海安谱科学仪器有限公司）；蔬菜（超市购买）；甲醇（色谱纯），美国天地有限公司；实验用水，超纯水；氨基柱（Agela Technologies）。

1200液相色谱-荧光检测器，安捷伦公司；超纯水机，美国Millipore公司；柱后衍生装置（美国兰博）。

1.2 实验方法

1.2.1 色谱条件选择

色谱柱：安捷伦C18柱（25cm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇：水=80：20；进样量10μL；流速0.5mL/min。荧光检测器：激发波长：330nm，发射波长：465nm。

1.2.2 标准溶液配制

准确称取克百威标准品10mg，用乙腈溶解后定容至10mL容量瓶中，摇匀，该溶液作为标准储备溶液。准确移取上述溶液并且用流动相稀释定容为0.1，0.2，0.4，0.8，1μg/mL标准系列溶液。

1.2.3 样品制备

取蔬菜、水果样品可食部分粉碎，制成待测样。准确称取粉碎后的25g试样放于匀浆机中，加入50.0mL乙腈，在匀浆机中高速匀浆2min，经滤纸过滤，滤液40mL收集到装有5g氯化钠的100mL具塞量筒中，盖上塞子，剧烈震荡1min，在室温下静置30min，分层。从具塞量筒中准确吸取10mL乙腈相溶液，80℃水浴氮吹近干，加入2mL甲醇+二氯甲烷（1+99）溶解残留，氨基柱净化后过用0.2μm滤膜过滤，待测[7]。

2 结果与讨论

2.1 线性关系的考察

吸取克百威标准溶液10μL，高效液相色谱-荧光检测器检测，标准曲线图见图1。以峰面积为纵坐标，以浓度（μg/mL）为横坐标，绘制标准曲线，得到回归方程：y=56.1212x- 0.30943，R2=0.99996。克百威在0.1～1μg/mL之间线性关系良好。并以信噪比等于3为标准，测得克百威的检出限为0.01μg/mL。克百威标准曲线谱，如图1所示。

2.2 精密度试验

精密吸取克百威标准品溶液10μL重复进样6次，记录色谱图峰面积，并测定峰面积的平均值和相对标准偏差，测定结果见表1。连续6次实验结果显示，精密度实验相对标准偏差为1.70%，本实验测定克百威精密度良好，具有良好的准确度。

2.3 重复性实验

取同一样品，重复测定6次，记录色谱图，测定结果见表2，相对标准偏差1.99%，说明用本方法测克百威含量重复性良好。

2.4 回收率实验

精密称取样品六次，准确加入克百威0.5μg，按照1.2.3样品制备样品溶液，液相色谱因荧光法检测后，外标法定量。由表3中可知回收率在86.9%～95.5%之间，平均回收率为90.8%，表明高效液相色谱柱后衍生化荧光法检测蔬菜中克百威含量具有良好的准确性。

2.5 样品测定

用电子天平准确称取6个平行样品，按1.3.3方法制备样品溶液，液相色谱柱后衍生荧光法检测，计算含量，见表4，样品中克百威平均含量都在0.453μg/mL，相對标准偏差为1.11%。克百威标准品及样品的色谱图，如图2、图3所示，克百威标准品出峰时间在20.3min左右。

3 结语

本文采用高效液相色谱柱后衍生荧光法对蔬菜中中克百威含量，结果表明：采用C18柱，流动相以甲醇：水=80：20，方法的精密度比较好、回收率较高，表明该法适用于蔬菜中克百威含量的测定。

参考文献

[1]王素琴，王旭，沈莹华.液相色谱-串联质谱法测定蔬菜水果中克百威残留量[J].农药科学与管理，2017，（3）：44-48.

[2]杨清华，史玉坤，施逸岚，等.气相色谱-质谱联用测定蔬菜中克百威、三羟基克百威及丁硫克百威残留[J].中国卫生检验杂志，2011，（11）：1539-1541.

[3]冯莎莎，梁春凤，梁顺超，等.二氧化钛分子印迹膜传感器光电流法检测克百威[J].分析测试学报，2017，（5）： 684-688.

[4]何方洋，冯才伟，杜美红，等.蔬菜、茶叶中克百威酶联免疫检测方法的建立[J].江苏农业科学》，2017，（20）：213-216.

[5]杨挺，吕燕，陈国，等.液相色谱串联质谱法快速测定动物组织中克百威及其代谢产物残留量[J].肉类研究，2016，（9）：23-28.

[6]中国人民共和国国家卫生和计划生育委员会.GB 2763-2016食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量[S].

[7]中国人民共和国农业部.NY/T 761-2008蔬菜和水果中有机磷、有机氯、拟除虫菊酯和氨基甲酸酯类农药多残留的测定[S].