幽门螺旋杆菌相关胃溃疡患者血清MMP和TIMP-1检测的临床价值

陈树峰

广东省东莞市望牛墩医院，广东东莞 523200

胃溃疡是常见的消化科慢性疾病之一，发病部位位于贲门与幽门之间。幽门螺旋杆菌（HP）一种螺旋形的革兰氏阴性杆菌感染，微厌氧，对生长条件要求十分苛刻，HP感染是导致胃溃疡发病的主要因素[1]。据报道，67%～80%的胃溃疡是由HP感染引起的，故根除HP能够提高胃溃疡愈合质量，但部分胃溃疡患者复发率高，治疗难度大[2]。因此，对胃溃疡愈合机制进行研究，对降低其复发率具有重要作用。研究表明，胃溃疡的愈合与上皮细胞的增殖、迁移、分化有关。而基质金属蛋白酶（MMP）、金属蛋白酶组织抑制剂-1（TIMP-1）在上皮细胞再生及伤口愈合中起着重要作用[3]。且有临床研究证实，HP感染相关胃溃疡患者的MMP、TIMP-1表达水平会升高，MMP及TIMP-1在HP感染性相关胃溃疡发病中起着重要作用[4]。故本研究对HP感染相关胃溃疡患者血清MMP和TIMP-1水平进行检测，并分析其与组织病理学之间的关系，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2015年1月～2017年12月于我院就诊的HP感染相关胃溃疡患者47例作为观察组。纳入标准：（1）符合《消化性溃疡与诊断标准规范建议》中胃溃疡的诊断标准[5]；（2）经快速尿素酶法和血清抗体检查证实为HP感染[6]；（3）无精神疾病、沟通障碍，能够配合研究。排除标准：（1）非甾体类抗炎药导致的胃溃疡；（2）恶性胃溃疡；（3）凝血功能障碍；（4）肝肾器官功能障碍；（5）未接受质子泵抑制剂等药物治疗；其中男28例，女19例，年龄22～68岁，平均（42.8±17.8）岁。选取同期于我院体检中心体检的健康者47例作为对照组；其中男30例，女17例，年龄25～71岁，平均（43.5±16.2）岁。两组一般资料对比差异无统计学意义，本研究具有可行性（P＞0.05）。本次研究征得我院医学伦理委员会同意，并与研究对象签署知情同意书。

表1 两组MMP、TIMP-1表达水平比较（± s ，ng/L）

表1 两组MMP、TIMP-1表达水平比较（± s ，ng/L）

组别 MMP-3 MMP-7 MMP-9 TIMP-1观察组（n=47）对照组（n=47）t P 18.47±2.82 12.16±2.35 11.784 0.000 96.83±11.92 65.27±8.21 14.949 0.000 43.28±5.61 21.59±4.39 20.874 0.000 2.65±0.41 0.57±0.15 32.662 0.000

表2 HP感染患者胃窦部、胃溃疡部MMP、TIMP-1表达水平比较（± s ，ng/L）

表2 HP感染患者胃窦部、胃溃疡部MMP、TIMP-1表达水平比较（± s ，ng/L）

组别 MMP-3 MMP-7 MMP-9 TIMP-1胃窦部（n=47）胃溃疡部（n=47）t P 16.22±3.09 20.75±3.85 6.291 0.000 85.67±10.79 106.51±13.96 8.704 0.000 36.45±7.55 52.28±12.37 7.489 0.000 2.12±0.45 3.08±0.53 9.466 0.000

1.2 检测方法

抽取研究对象的早晨空腹静脉血5mL，置于3000r/min的离心机中离心15min，分离血清后置于-70℃冰箱中保存待用。采用酶联免疫吸附法（ELISA）测定所有研究对象的MMP-3、MMP-7、MMP-9、TIMP-1水平，重复检测3次后取其平均值。ELISA试剂盒购自武汉博士德公司，所有操作均严格按照说明书进行。

1.3 病理组织获取、培养及评价

通过胃镜检查获取观察组胃窦部及胃溃疡处的组织各2块用于组织学检查。将组织标本置于具有3mL RPMI 1640培养液（采用5%热灭活胎牛血清、15mmol/L HEPES缓冲液、100U/mL青霉素、100mg/mL链霉素、10mg/mL PHA混合而成）的培养瓶中，在温度37℃、5%CO2的培养箱中培养24h，采集培养上清液置于-70℃冰箱中保存待用。采用ELISA法测定上清液中的MMP-3、MMP-7、MMP-9、TIMP-1水平。根据悉尼标准对组织标本进行HE染色，评价组织学的活动度、炎症、萎缩以及肠上皮化生程度，分为0、1、2、3四个等级，0级为无，1级为轻度，2级为中度，3级为重度。

1.4 统计学分析

应用统计学软件SPSS22.0处理数据，计数资料以“%”代表，组间行χ2检验，计量资料以（±s）代表，组间行t检验，采用Spearman等级相关性分析MMP、TIMP-1表达水平与组织学分级的相关性，所有结果均以P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组MMP、TIMP-1表达水平比较

观 察 组 血 清 MMP-3（18.47±2.82）ng/L、MMP-7（96.83±11.92）ng/L、MMP-9（43.28±5.61）ng/L及TIMP-1（2.65±0.41）ng/L显著高于对照组的（12.16±2.35）、（65.27±8.21）、（21.59±4.39）、（0.57±0.15）ng/L（t=11.784/14.949/20.874/32.662，P=0.000/0.000/0.000/0.000）；详见表 1。

2.2 HP感染患者胃窦部、胃溃疡部MMP、TIMP-1表达水平比较

观察组患者胃溃疡部MMP-3（16.22±3.09）ng/L、MMP-7（85.67±10.79）ng/L、MMP-9（36.45±7.55）ng/L及TIMP-1（2.12±0.45）ng/L显著高于其胃窦部的（20.75±3.85）、（106.51±13.96）、（52.28±12.37）、（3.08±0.53）ng/L（t=6.291/8.704/7.489/9.466，P=0.000/0.000/0.000/0.000）；详见表 2。

2.3 HP感染患者胃窦部MMP、TIMP-1表达水平与组织学分级相关性分析

经Spearman等级相关性分析，观察组患者胃窦部MMP-3、MMP-7、MMP-9及TIMP-1与组织学的活动度、炎症分级呈正相关性（r＞0，P＜0.05），与萎缩以及肠上皮化生分级无相关性（r＞或＜0，P＞0.05）；详见表3。

表3 HP感染患者胃窦部MMP、TIMP-1表达水平与组织学分级相关性分析

3 讨论

近年来，随着质子泵抑制剂以及根治HP感染的应用，使得HP感染相关胃溃疡的治疗效果得到了很大的提升，但部分患者的复发率仍然较高。研究证实，HP感染相关胃溃疡患者的复发率高达23.33%[7]。因此，控制胃溃疡的复发仍然是治疗胃溃疡的重要任务。MMP及TMIP-1在胃溃疡的形成及愈合中起着双重作用。MMP是有结缔组织分娩的Zn2+依赖性蛋白酶家族，能够参与到细胞外基质降解、组织再塑形和修复以及炎症因子募集、上皮细胞再生中[8]。研究证实，HP感染患者的MMP-3/MMP-7、MMP-9的表达水平会升高，HP越多则其MMP-3、MMP-7、MMP-9表达水平越高，导致核因子kappa轻链激活，以增强B细胞活化，MMP是影响上皮细胞再生的主要因素，MMP过度表达会导致上皮细胞再生过程出现缺陷，造成修复连接物的强度及完整性降低，不仅会影响胃溃疡的愈合质量，还会增加复发率[9]。TIMP-1是MMP的天然抑制剂，在细胞外基质合成及降解代谢平衡中起着至关重要的作用[10]。TIMP-1与MMP相互作用，能够是细胞外基质处于动态平衡状态中，但TIMP-1与MMP表达的增强或降低都会破坏细胞外基质的动态平衡，影响溃疡愈合[11]。

本研究采用血清学测定HP感染相关胃溃疡患者的MMP、TIMP-1表达水平，本研究结果表明，观察组血清MMP-3（18.47±2.82）ng/L、MMP-7（96.83±11.92）ng/L、MMP-9（43.28±5.61）ng/L及 TIMP-1（2.65±0.41）ng/L显 著 高 于 对 照 组的（12.16±2.35）、（65.27±8.21）、（21.59±4.39）、（0.57±0.15）ng/L（t=11.784/14.949/20.874/32.662，P=0.000/0.000/0.000/0.000）；说明HP感染相关胃溃疡患者的MMP、TIMP-1表达水平明显高于健康人群，结果提示着MMP、TIMP-1表达水平变化能够在一定程度上反应HP感染相关胃溃疡患者的病情发展情况。

从表2可以看出，观察组患者胃溃疡部MMP-3（16.22±3.09）ng/L、MMP-7（85.67±10.79）ng/L、MMP-9（36.45±7.55）ng/L及TIMP-1（2.12±0.45）ng/L显著高于其胃窦部的（20.75±3.85）、（106.51±13.96）、（52.28±12.37）、（3.08±0.53）ng/L（t=6.291/8.704/7.489/9.466， P=0.000/0.000/0.000/0.000）；说明在患者胃溃疡部的MMP、TIMP-1表达水平明显高于胃窦部，但胃窦部MMP、TIMP-1表达水平也明显高于对照组，说明MMP、TIMP-1表达水平在HP感染相关胃溃疡患者的整个胃部都较高。有基础研究证实，在大鼠急性胃溃疡的模型中，其MMP、TIMP-1的表达水平呈升高趋势，且大鼠胃溃疡严重程度与MMP、TIMP-1呈正相关性[12]；与本文的研究结果相似。TIMP-1能够适应性调节MMP表达，在胃溃疡发病早期，患者的MMP表达量及其活性增加，这主要是因为中性粒细胞、巨噬细胞等一部分炎症因子能够通过降解细胞外来基质，调节外来细胞基质与细胞间的黏附作用，通过刺激细胞迁移从而促进上皮细胞再生，促进溃疡愈合[13]。而对于慢性胃溃疡患者，其溃疡病情发展以及溃疡愈合共同存在，这时患者的MMP表达升高会抑制其溃疡的自发愈合，同时患者的TIMP表达水平升高也会抑制MMP的活性，从而促进其溃疡愈合[14]。

从表3结果得知，经Spearman等级相关性分析，观察组患者胃窦部MMP-3、MMP-7、MMP-9及TIMP-1与组织学的活动度、炎症分级呈正相关性（r＞0，P＜0.05），与萎缩以及肠上皮化生分级无相关性（r＞或＜0，P＞0.05）；结果说明患者胃溃疡部及胃窦部的MMP、TIMP-1表达水平与患者组织学的炎症、活动度分级具有相关性，而与患者组织学的萎缩、肠上皮化生分级无关。上述研究结果也进一步证实了胃溃疡部的MMP、TIMP-1表达水平的升高与HP感染造成的炎症活动具有相关性，笔者分析可能是HP感染导致患者的胃部粘膜因为刺激从而产生炎症反应，诱发MMP产生，导致NF-κB信号通路被激活，引发MMP的转录，造成MMP表达水平升高。而进行HP感染根治后，其MMP表达水平明显降低[15-16]。

综上所述，幽门螺旋杆菌相关胃溃疡患者患处血清MMP和TIMP-1表达水平上升，且与其组织学的活动度、炎症分级密切相关，通过减轻患者的炎症反应，控制MMP、TIMP-1表达，从而加快患者溃疡部位的愈合，进一步保护患者的胃部正常生理功能。通过加强对血清MMP和TIMP-1表达在幽门螺旋杆菌相关胃溃疡发病机制中的作用研究，能够为治疗该病提供一条新的途径，临床检测血清MMP和TIMP-1水平对幽门螺旋杆菌相关胃溃疡病情监测及疗效评估具有指导意义，有利于提高该病的治疗疗效，降低其复发率。