我国胶体金试纸条研究现状及在畜禽屠宰检疫中应用展望

黎伟强

摘 要 胶体金免疫层析技术是在胶体金标记技术、免疫检测技术和层析分析技术基础上发展起来的一种新型免疫学诊断技术。因其具有简便、快速、无污染、不需特殊仪器、特异性强、敏感性高、结果判断直观等优点，成为当前广泛采用的动物疫病免疫学诊断技术。基于此，本文主要对我国胶体金试纸条研究现状及在畜禽屠宰检疫中应用展望进行分析探讨。

关键词 胶体金试纸条；研究现状；畜禽屠宰检疫；应用展望

1 前言

胶体金免疫层析试纸条（ImmunochromatographicStrip，ICS/ ColloidGoldStrip，CGS），通常简称为胶体金试纸条，是通过胶体金免疫层析技术制备的，可以准确、快速、低成本检测抗原或抗体的试纸。在禽病检测方面，胶体金试纸条作为一种检测工具，应用于疾病的诊断、流行病学调查、免疫方案制定、检验检疫等方面。与其他免疫学和分子生物学检测方法相比，胶体金试纸条具有无需专业仪器，检测耗时短，通过肉眼观察即可判定结果，较好的特异性和敏感性，易于运输和保存，适用于基层和现场检测。

2 胶体金试纸条研究现状与应用

2.1 禽流感

禽流感由禽流感病毒（Avianinfluenzavirus，AIV）感染所致，对禽养殖业及人类健康构成了严重威胁。根据AIV囊膜上血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）不同，可分为16个HA亚型和10个NA亚型。

2.2 新城疫

新城疫是由新城疫病毒（Newcastlediseasevirus，NDV）引起的，长期以来对禽养殖业造成重大危害。在NDV抗体检测方面，研究者用胶体金标记新城疫病毒，制作了检测NDV抗体的免疫胶体金试纸条，使用IDEXX公司标准NDV阴性和阳性血清测定，该试纸条检测血凝抑制抗体最低滴度为41og2；使用該试纸条和血凝抑制方法同时检测60份样品，试纸条检测结果与血凝抑制试验法检测结果符合率为93.8%。

2.3 传染性法氏囊病

传染性法氏囊病是由传染性法氏囊病毒（Infectiousbursaldiseasevirus，IBDV）引起的，主要感染幼鸡的急性高度接触性传染病。在IBDV抗体检测方面，2011年IsaNurulfiza等[1]以鸡抗IBDV血清和灭活IBDV作为待标记物和检测线，研制出检测IBDV抗体的胶体金试纸条，使用该试纸条和BioCheck公司ELISA试剂盒检测已知阳性样品时，该试纸条检测准确度与商品化ELISA试剂盒相同，灵敏度高于商品化ELISA试剂盒，最短仅2分钟即出结果。

2.4 鸡传染性支气管炎

鸡传染性支气管炎是由鸡传染性支气管炎病毒（Infectiousbronchitisvirus，IBV）引起的鸡的一种呼吸道传染性疾病，在我国鸡群中广泛存在。研究者用鼠抗鸡IgG单克隆抗体和大肠杆菌表达IBV核衣壳蛋白分别制备了胶体金标记物和检测线，研发出检测IBV抗体的胶体金试纸条。同时使用该试纸条、血凝抑制实验和IDEXX公司商品化ELISA试剂盒检测120份血清样品。结果显示，与血凝抑制实验相比该试纸条检测敏感性为92.11%，阳性符合率为85%；与商品化ELISA试剂盒相比该试纸条检测敏感性为92.31%，阳性符合率为95%。

3 展望

3.1 提升检测灵敏度

与分子检测技术相比，部分胶体金免疫层析试纸条存在着检测灵敏度低、假阴性结果等缺陷。胶体金银扩增免疫层析技术是基于摄影技术的免疫层析方法，结合有抗体的胶体金颗粒会使银离子浓缩还原形成银原子，并在胶体金金微粒周围形成直径为5～10μm的银簇，使标记物的体积增加到胶体金微粒直径的100倍，从而使检测能力大大提高。研究者运用胶体金银扩增免疫层析技术制备了检测H5N1亚型禽流感病毒的试纸条，与普通的胶体金试纸条相比，其检测灵敏度提高了500倍。

3.2 区分野生型毒（菌）株与疫苗毒（菌）株

疫苗作为动物疫病防控的重要手段得到了广泛的应用，但疫苗的使用往往会干扰动物疫病诊断和监测。研制胶体金免疫层析试纸条时，可选用能区分野生型毒（菌）株与疫苗毒（菌）株的单克隆抗体或蛋白，从而获得能区分野毒（菌）株与疫苗毒（菌）株的胶体金试纸条。研究者选用一株能特异性识别伪狂犬病野生型毒株的单克隆抗体，制备了检测野生型伪狂犬病病毒抗体的试纸条，使用该试纸条和IDEXX公司ELISA试剂盒平行检测样品，统计发现该试纸条与商品化ELISA试剂盒检测结果相符。

3.3 同一试纸条进行多疾病检测

疾病种类繁杂，并且许多疾病临床症状相似，出现混合感染。将易发生混合感染或常见的多种抗体或病原胶体金检测方法整合到同一胶体金试纸条中，可有效扩大试纸条检测范围，提高检测效率。

3.4 实现抗原或抗体定量检测

目前，大部分胶体金仅能做定性判断。而定量胶体金检测多根据胶体金试纸条检测已知不同浓度标准物时检测线存在的色差，来绘制标准物浓度与检测线颜色关系的标准曲线。当检测样品时，反应完成后将试纸条检测线颜色与标准曲线做比较，以确定待检样品中目的检测物含量。

4 结语

随着新的标记物和制备方法的发展、标记技术的日趋成熟、单克隆抗体技术和分子生物学技术的广泛应用，胶体金免疫层析技术将会有更为广阔的应用前景，实现更加理想的价值，从而促进我国畜牧兽医事业的健康、快速和持续发展。

参考文献：

[1]徐一鸣。金宁一，杨振国，等.胶体金方法检测H3和H7亚型禽流感病毒[刀.中国兽医学报，2009，29（5）；580—583.

[2]彭伏虎，王政，张进良.等.胶体金试纸条检测H9亚型禽流感病毒的研究[J].畜牧兽医学报，2008。39（8）：1081—1086.