保健食品中大蒜素的测定方法验证

刘昶 李宁 李镇宏

【摘 要】根据《保健食品检验与评价技术规范》2003版，通过GC-FID进行测定，对大蒜素的测定项目进行系统适用性试验、精密度试验、检测限、定量限、线性关系与线性范围考察、重复性试验、准确度试验（加样回收试验）的验证，通过重复性试验和回收率试验验证检验过程的回收率和重现性，并确定大蒜素的线性范围、定量限，用以确定GC-FID法的适用性及可控性。

【关键词】保健食品、大蒜素、方法学验证

引言

大蒜素（大蒜新素、garlicin）为三硫代烯丙醚类化合物，天然存在于百合科植物大蒜的鳞茎中。对多种革兰氏阳性和阴性菌均有抗菌作用，对骨髓移植者并发巨细胞病毒感染有明显防治作用。尚有降低血胆固醇、甘油三酯和脂蛋白以及抗血小板凝集、抗肿瘤作用，成为近年来较受关注的保健食品功效性成分和特征成分。因此，对于第三方检测机构，以大蒜素等功效成分为例的保健食品的检测中蕴藏着大量的商机。

1 试验方法

1.1 色谱条件

HP-5柱（30m*250μm*0.25μm），程序升温：初始温度为50℃，以30℃/min的速率升至160℃，保持3分钟，以100℃/min的速率升至230℃，保持3分钟。进样口温度180℃，分流比10：1；检测器温度180℃。

1.2 大蒜素标准液

（1）储备液：准确称取大蒜素标准品适量，用正己烷稀释，使得溶液浓度为10mg/mL。

（2）工作曲线：取标准储备液，用正己烷配制稀释成浓度为0.02，0.05，0.10，0.50，1.00，2.00，3.00，5.00mg/mL的标准工作溶液。

1.3 供试品溶液

称取1.0g样品（以大蒜软胶囊为例），于10mL量瓶中，加入5mL正己烷，超声提取30min，用正己烷定容，振摇后静置，经0.45μm滤膜过滤后待测。

2 结果与讨论

2.1 精密度试验

分别精密吸取大蒜素标准工作溶液的最高点和最低点各1μL，按测定方法重复进样6次，测定峰面积值。对各次测得的峰面积值求相对标准偏差值，用以说明仪器精密度情况，其RSD为0.53%，说明仪器精密度良好。

2.2 线性关系与线性范围考察

按照2.2所述配制大蒜素标准储备液，分别取该工作溶液1μL注入气相色谱仪，以峰面积为纵坐标，以大蒜素浓度为横坐标作线性回归，绘制标准曲线为598.2x-5.3，R2=0.99999。

2.3 检测限的确定

配制浓度为0.009mg/mL的对照品溶液，按上述色谱条件进行测定，测得信噪比为4.6：1，满足信噪比3：1为最低检测限的要求，因此该方法中由仪器检出限所推到得到的大蒜素检出限为0.009%。

2.4定量限的确定

配制浓度为0.9mg/mL的对照品溶液，按上述色谱条件进行测定，测得信噪比为10.7：1，满足信噪比10：1为最低检测限的要求，因此该方法中由仪器定量限所推到得到的大蒜素定量限为0.02%。

2.5 重复性试验：

取样品6份进行重复性试验，RSD为1.0%，重复性良好。

2.6 加标回收率试验（准确度试验）

采取全程加样法。取6份已知含量的保健食品2.0g，精密称定，按照1：1的大蒜素量加标，依法测定，并计算出保健食品中大蒜素的含量。以下式计算回收率。

试验结果：平均回收率为96.0%（RSD=1.4%）。结果较满意，表明本法适用于本实验室。

3 结论

根据《保健食品检验与评价技术规范》2003版，通过GC-FID进行测定，对大蒜素的测定项目进行系统适用性试验、特异性试验、精密度试验、线性关系与线性范围考察、检测限、定量限、重复性试验、准确度试验（加样回收试验），各项试验測试结果均能满足要求，仪器性能稳定，质控结果满意。从以上数据可以看出用该方法检测牙膏中的大蒜素的含量，结果准确可靠，该方法中大蒜素的方法检出限为0.009%，定量限为0.02%，大蒜素的线性范围为0.01mg/mL～4.5mg/mL。