非小细胞肺癌中雌激素受体α与β的表达及临床意义

井晓婷　何芳　钱盼盼　张培蓓　叶贤伟　余红　张湘燕

[摘要] 目的 探析非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）组织中雌激素受体α（estrogen receptor alpha，ERα）、雌激素受体β（estrogen receptor beta，ERβ）的表达及临床意义。 方法 采用免疫组织化学SP法检测144个非小细胞肺癌组织标本、32个癌旁正常肺组织标本（距肿块5 cm以上）及17个肺良性病变组织标本中ERα、ERβ的表达。 结果 ERα和ERβ在肺良性病变组织、癌旁肺组织、NSCLC组织中表达率分别为82.23%、84.38%、87.50%和47.06%、53.13%、66.67%，两者组间比较差异均无统计学意义（P>0.05）；NSCLC组织中ERα、ERβ阳性表达与患者性别、癌细胞分化程度、病理类型、淋巴结转移、TNM分期等因素无相关（P>0.05），NSCLC患者年龄≥60岁的癌组织中ERβ阳性表达率77.27%高于年龄<60岁患者50.00%，差异有统计学意义（P<0.01），然而NSCLC组织中ERα阳性表达率在年龄方面比较差异无统计学意义（P>0.05）。 结论 ERα、ERβ在NSCLC组织中阳性表达与患者性别、癌细胞分化程度、病理类型、淋巴结转移、TNM分期等因素均无明显相关，ERβ在NSCLC组织中阳性表达可能与年龄相关。

[关键词] 非小细胞肺癌；雌激素受体α；雌激素受体β；表达

[中图分类号] R734.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2018）16-0001-04

[Abstract] Objective To investigate the expression and clinical significance of estrogen receptor alpha（ERα） and estrogen receptor beta（ERβ） in the tissues of non-small cell lung cancer（NSCLC）. Methods Immunohistochemical SP was used to assess the expression of ERα and ERβ in 144 specimens of NSCLC tissues， 32 specimens of healthy lung tissues near the cancer（the distance to tumor was more than 5 cm） and 17 specimens of benign lung lesion tissues. Results The expression rates of ERα and ERβ in benign lung lesion tissues， lung tissues near the cancer and NSCLC tissues were 82.23%， 84.38%， 87.50% and 47.06%， 53.13%， 66.67%. There were no statistical differences between each other（P>0.05）. The positive expression of ERα and ERβ in the NSCLC tissues was not associated with patients gender， the degree of cancer cell differentiation， pathological type， lymphatic metastasis and TNM staging（P>0.05）. The positive expression of ERβ in the NSCLC tissues in patients aged ≥60 years was 77.27%， which was statistically different from that in patients aged<60 years （50.00%）（P<0.05）. The positive expression of ERα in the NSCLC tissues was not statistically different in different subgroups of age（P>0.05）. Conclusion The positive expression of ERα and ERβ in the NSCLC tissues was not significantly associated with patients gender， the degree of cancer cell differentiation， pathological type， lymphatic metastasis and TNM staging. The positive expression of ERβ in the NSCLC tissues might be associated with age.

[Key words] Non-Small cell lung cancer； Estrogen receptor α； Estrogen receptor β； Expression

肺癌，尤其是非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）是全球常见的恶性肿瘤之一。近年来的研究发现，雌激素及其受体系统在NSCLC的发生发展中可能发挥着重要作用。雌激素受体（estrogen receptor，ER）目前已经被证实包括雌激素受体α（estrogen receptor alpha，ERα）和雌激素受体β（estrogen receptor beta，ERβ），存在于细胞核内或胞浆内[1]。国内外众多报道均认为NSCLC肿瘤细胞中均有ERα和/或ERβ阳性表达，且在正常肺组织中也发现有ERα和/或ERβ阳性表达[2]。近年来，众多学者对NSCLC患者ER表达情况和预后相關性进行研究发现，ER的表达和肿瘤的预后有着极为密切的关系，但具体呈何种相关性尚需进一步证实[3]。本研究应用免疫组织化学方法探讨NSCLC患者肺癌组织中雌激素受体表达情况，并和癌旁肺组织与肺良性病变组织中的表达情况进行对比分析，分析雌激素受体与肿瘤临床行为的相关性，为雌激素受体作为新靶点在NSCLC的治疗中提供新的策略。

1 材料与方法

1.1 材料来源

选取2014年1月～2015年1月经病理确诊的NSCLC患者肺癌组织标本144个，其中男108例，女36例（均为绝经后），年龄46～72岁，伴淋巴结转移111例、无淋巴结转移33例；癌旁肺组织标本（距肿块5 cm以上）32个；17个经病理确诊的肺良性病变组织标本（肺部炎症13例、胸内孤立性纤维性肿瘤1例、肺大泡1例、少许粘连坏死1例、肺结核1例）为对照组，其中男10例，女7例（均已绝经），年龄44～68岁。以上入选患者均无内分泌相关疾病、慢性肝肾疾病，术前无使用激素类药物情况，术前均未行生物、免疫、放化疗等抗肿瘤治疗。

1.2 免疫组化法

应用兔抗人ERα、ERβ多克隆抗体采用免疫组化法（S-P法）检测上述非小细胞肺癌组织、癌旁肺组织、肺良性病变组织中ERα、ERβ的表达，兔抗人ERα多克隆抗体（使用时工作浓度1：100）购自美国Santa Cruz公司，兔抗人ERβ多克隆抗体购自英国Abcam公司（使用时工作浓度1：100），ERα、ERβ用已知乳腺癌阳性切片作为阳性对照，用PBS缓冲液替代一抗作为阴性对照。

1.3 结果判定

ERα阳性表达位于细胞质，ERβ阳性表达位于细胞核，均呈黄色、棕黄色颗粒[4]，根据Kawasaki和Yang等的半定量方法以阳性细胞率及染色强度两者乘积来判断结果[5-6]，<5分为（-），5～8分为（+），9～12分为（++），13～16分为（+++）。

1.4 统计学处理

采用SPSS19.0统计学软件进行分析，计数资料以%表示，采用χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 雌激素受体ERα、ERβ的表达情况

ERα、ERβ在144例NSCLC组织中表达阳性率分别为87.50%（126/144）、66.67%（96/144），在32例癌旁肺組织中的表达阳性率分别为84.38%（27/32）、53.13%（17/32），在17例肺良性病变组织中表达阳性率分别为82.23%（14/17）、47.06%（8/17）；NSCLC组织中ERα、ERβ的表达与癌旁肺组织相比差异无统计学意义（χ2=0.225，P=0.635；χ2=2.089，P=0.148），与肺良性病变组织相比差异无统计学意义（χ2=0.355，P=0.551；χ2=2.556，P=0.110），癌旁肺组织中ERα、ERβ的表达与肺良性病变组织相比差异无统计学意义（χ2=0.033，P=0.855；χ2=0.163，P=0.686）。

2.2 ERα、ERβ在NSCLC中的阳性表达及和临床病理特征之间的关系

ERα、ERβ在NSCLC组织中的阳性表达与患者的性别、癌细胞分化程度、病理类型、淋巴结转移、TNM分期等因素无相关（P>0.05），年龄≥60岁NSCLC组织中ERβ阳性表达率高于年龄<60岁者，差异有统计学意义（P<0.01），ERα在NSCLC组织中阳性表达率在年龄方面比较差异无统计学意义（P>0.05），见表1。

3 讨论

目前普遍认为雌激素及其受体系统与NSCLC的发生、发展有着一定的相关性，雌激素受体可分为ERα和ERβ，其广泛存在于腺癌、子宫内膜癌、肺癌及正常肺组织中，这些受体蛋白可以调控细胞周期、控制细胞信号转导和影响细胞生存[7]。体内体外实验均证实雌激素具有增强肿瘤细胞恶性程度、刺激肿瘤细胞生长的作用[8-13]，故部分专家学者认为有效抑制ERα和ERβ的表达可能抑制NSCLC细胞的增殖[14]。

美国病理学家Chaudhuri等[15]于1982年首次报道25例肺癌组织中ER阳性。国内外研究表明ER在非小细胞肺癌组织和正常肺组织中均有表达，但两组间的表达情况存在差异。有研究[16]通过免疫组化法检测183例肺癌（NSCLC180例，SCLC3例）组织及对应癌旁肺组织中ER的表达，发现肺癌组织中ERα、ERβ的表达率高于癌旁肺组织，差异有统计学意义。Schwartz等[17]发现278例NSCLC患者（其中女性214例，男性64例）和10例正常肺组织中没有一例ERα的阳性表达，而ERβ在NSCLC组织和正常肺组织中的阳性率分别为61%、20%，组间比较差异有统计学意义。李婷婷等[18]通过免疫组化法检测28例绝经前女性肺腺癌组织及癌旁肺组织中ERβ的表达，发现肺癌组织中的ERβ的表达率明显高于癌旁肺组织，差异有统计学意义。邵东辉等[19]发现在53例NSCLC组织中ERα、ERβ的表达阳性率分别为79.2%、67.9%，而在28例癌旁肺组织中ERα、ERβ的表达阳性率分别为30.76%、42.30%，差异有统计学意义。本研究通过免疫组化法检测NSCLC组织、癌旁肺组织、肺良性病变组织中的ERα、ERβ的表达，发现ERα在非小细胞肺癌组织、癌旁肺组织、肺良性病变组织中表达率分别为87.50%、84.38%、82.23%，ERβ在非小细胞肺癌组织、癌旁肺组织、肺良性病变组织中表达率分别为66.67%、53.13%、47.06%，ERα、ERβ，差异无统计学意义。

Schwartz等[17]发现278例NSCLC患者（其中女性214例，男性64例）中ERβ在女性NSCLC组织中的阳性表达率较其在男性NSCLC组织中阳性表达率低，而本研究发现NSCLC组织中ERβ的阳性表达情况与患者性别无明显相关（P>0.05），可能与两项研究的男女比例不同相关。闫明等[20]通过免疫组化法检测286例NSCLC患者的病理组织切片，ERα在NSCLC组织中表达阳性率为36%，在女性患者中的表达要显著高于男性（P=0.0004），肿瘤最大直径≤3 cm的患者显著高于肿瘤直径>3 cm的患者（P<0.01）。本研究发现NSCLC组织中ERα和ERβ的阳性表达情况与患者性别、TNM分期、淋巴结转移、分化程度等因素无明显相关（P>0.05），年龄≥60岁NSCLC患者组织中ERβ阳性表达率77.27%明显高于<60岁患者50.00%（P<0.01），ERα阳性表达率与NSCLC患者的年龄分层没有相关性，ERβ在NSCLC患者中阳性表达可能与年龄相关。黄伟等[21]发现在60例NSCLC病理标本中，ERβ的表达与患者性别、肿瘤大小、淋巴结转移、分化程度、TNM分期等方面无明显差异（P>0.05），与本文的研究结果相同，但在腺癌的表达率高于鳞癌（P<0.05）。

目前国外研究对NSCLC肿瘤细胞中的雌激素受体阳性表达机制有了进一步探讨。Unai Aresti等[22]通过逆转录PCR法检测96例NSCLC患者肿瘤组织及邻近正常肺组织中ERα、ERβ的mRNA表达，发现ERα在非肿瘤组织的表达较肿瘤组织高，差异有统计学意义（P<0.0001），ERβ在非肿瘤组织与肿瘤组织的表达无差异（P=0.364），在肿瘤组织中ERα高表达组有更高的总生存期（P=0.05），而ERβ高表达组与低表达组总生存期无显著差异（P=0.253），ERα+ERβ高表达组与ERα+ERβ低表达组相比总生存期更高（P=0.025），提示ERα高表达可能是NSCLC患者预后较好的因素。Atmaca A等[23]通过逆转录定量PCR法检测31例晚期或转移NSCLC患者腫瘤组织ERα的mRNA表达，发现ERα高表达组有更高的中位生存期（P=0.0498），并与患者性别、年龄、病理类型、TNM分期无明显相关，可以通过定量PCR法评估NSCLC患者组织中ERα的mRNA表达，ERα的表达是转移性NSCLC患者预后的独立因素。

根据国内外众多研究，NSCLC组织中ERα、ERβ的表达率高于癌旁肺组织及正常肺组织，但本实验结果显示，ERα、ERβ在NSCLC组织、癌旁肺组织及正常肺组织的表达无显著差异，可能与病例选择、检测技术和准确度等存在差异有关。各个研究中关于NSCLC组织中ER的表达与性别、年龄、肿瘤大小、病理类型、TNM分期等临床特征的关系也不尽相同。两个受体的阳性表达与NSCLC的临床表现是否有明确的相关性，两者的表达是否可作为NSCLC的预测因子，可行较大规模人群为基础的病例研究，并进一步利用基因检测等更为准确的方法，为今后NSCLC的临床诊断和治疗提供新的思路。

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（收稿日期：2018-02-08）