IRF6基因多态性与非综合征型唇腭裂相关性的meta分析

马 锐 孙慧慧 高 洁 葛振林

非综合征型唇腭裂（non-syndromic cleft lip with or without cleft palate，NSCL/P）是指不伴有其他先天畸形的唇腭裂，在世界范围内其出生率约为1‰～2‰，是最常见的先天畸形[1]。不同地区NSCL/P新生儿患病率存在差异，中国出生率约为1.62‰，是NSCL/P的高发区[2]。因此探究NSCL/P的病因和危险因素，进而预防其发生发展，对于提高我国出生人口素质有着非常重要的意义。NSCL/P病因较为复杂，涉及环境与遗传因素及其交互作用。目前研究并得到较多支持的有IRF6、MSX1、MTFR等基因和位点[3]。但IRF6基因是迄今发现的最有价值的、与NSCL/P致病有关的基因之一[4]。许多的研究表明IRF6基因和非综合征型唇腭裂的发生有密切的关联[5～7]。其中对于rs2235371位点SNPs的研究尤为突出，但各个研究得出结论并不一致[8～14]，因此本研究收集有关rs2235371位点SNPs与NSCL/P的病例对照研究进行meta分析，以探究rs2235371位点SNPs与NSCL/P之间的关系。

资料和方法

1.纳入和排除标准

（1）纳入标准：①研究对象为确诊为患有非综合征型唇腭裂的中国患者；②研究类型为病例对照；③相关IRF6基因rs2235371位点SNPs与NSCL/P的研究；④临床资料详细且文献中数据的完整文献；⑤文献仅限中英文。

（2）排除标准：对于研究对象非中国患者；质量低的文献以及综述；重复发表的文献报道；未提供充分原始数据的文献予以排除。

2.文献检索

计算机检索 PubMed、VIP、CNKI 和 WanFang Date数据库，检索自各数据库建库至2016年2月公开发表的有关IRF6基因多态性与NSCL/P相关的文献。英文检索词：“interferon regulatory factor 6”“IRF6”“polymorphism”“NSCL/P”“non-syndrom ic cleft lip with or without cleft palate”，中文检索词：“IRF6”“基因多态性”“唇腭裂”“非综合症型唇腭裂”等。

3.文献的筛选与数据提取

由两名研究人员（马锐和孙慧慧）独立地筛选文献，严格地按照此次研究的纳入排除标准进行文献的筛选，然后进行交叉核对筛选结果。若遇到分歧，则通过与第三方研究者（高洁）讨论解决。两名研究者独立地对原始文献中记录数据的收集。提取作者和时间、研究地区及种族、病例组对照组基因型分布、对照组基因型分布是否符合Hardy-Weinberg（H-W）平衡、纳入文献研究的质量分数。制作并完成文献数据提取表格根据相关文献报道[15]对各个纳入文献研究的质量标准的评估，本次研究的文献质量评估内容：①样本量大小；②研究中的病例诊断是否充分；③病例组与对照组的基线资料是否匹配；④对照组H-W平衡；⑤基因检测是否准确可靠；⑥一般信息是否充分。以上6项，每1项记1分，其中单篇评分总计＞3分者为质量可靠。

4.统计分析

应用Stata12.0软件对纳入的文献数据进行Mata分析，用OR值和其95%CI表示其效应量。可以利用卡方检验检验纳入的各研究间异质性的大小，此次检验的水准是α＝0.1，即当P≤0.1时，表示各研究之间的异质性较大。并且利用I2检验对其异质性进行定量的分析。当各研究之间的异质性较小时，可以应用固定效应模型对研究的数据进行Meta分析：当存在较大的统计学异质性时，可以采用随机效应模型对研究的数据进行Meta分析。为分析异质性来源，可根据纳人研究的某些特征分层，最终进行亚组分析。采用漏斗图检验是否存在发表偏倚，并采用Begg法对发表偏倚进行定量分析[16，17]。

结 果

1.纳入研究的一般情况

初检出相关文献296篇，查重之后剩下193篇。阅读题目和摘要，并经过小组讨论，确定基本符合纳入标准的文献共25篇。进一步查找和仔细阅读全文，剔除篇18，最终纳入完全符合标准的文献共7篇[8～14]。包含969例患者和783例对照。纳入研究的一般情况和质量评价分数见表1，文献筛选流程见图1。

图1 文献筛选流程图

表1 纳入研究基本信息表

2.分析结果

（1）meta分析结果：如表 2所示 GA vs GG：P＝0.000，OR＝0.629 （95%CI：0.519～0.762）；GA+AA vs GG：P ＝0.000，OR ＝0.615 （95%CI：0.512 ～0.738），有统计学意义，提示GA和GA+AA型可降低中国人罹患非综合征型唇腭裂的风险（图2、3）。AA vs GG ：P＝0.063，OR＝0.598（95%CI：0.349～1.025）；GA+GG vs AA：P＝0.304，OR＝1.355（95%CI：0.794～2.312），无统计学意义，同时其异质性检验定性P为0.032，0.006均小于0.1，定量I2（%）为56.6和66.9均大于50。考虑其异质性来源为种族差异引起，因此进行亚组分析。

图2 IRF6基因多态性与NSCL/P相关性的meta分析：GA vs GG

图3 IRF6基因多态性与NSCL/P相关性的meta分析：GA+AA vs GG

图4 亚组分析：汉族与非汉族AA vs GG

（2）亚组分析：如表2所示，亚组分析后其异质性明显减小，可采用固定效应模型。汉族AA vs GG ：P＝0.000，OR＝0.384（95%CI：0.256～0.577），有统计学意义，提示AA型可降低汉族罹患NSCL/P的风险。汉族GA+GG vs AA：P＝0.000，OR＝2.129（95%CI：1.457～3.111），有统计学意义，提示GA+GG型可增加汉族罹患NSCL/P的风险。非汉族AA vs GG：P＝0.857，OR＝1.050（95%CI：0.619～1.782）；GA+GG vs AA：P＝0.287，OR＝0.760（95%CI：0.461～1.253），无统计学意义（图 4、5）。

表2 IRF6基因rs2235371位点SNPs与NSCL/P的meta分析结果

图5 亚组分析：汉族与非汉族GA+GG vs AA

图6 IRF6基因多态性与NSCL/P相关性的发表性偏倚：GA vs GG

（3）发表性偏倚：如图6～7，应用Stata12.0Begg法对发表偏倚进行定量分析：GA vs GG：P＝1.000；GA+AA vs GG：P＝0.764。P 值均大于 0.5，且漏斗图结果对称，涂点均在95%CI内，提示发表偏倚较小，结果较为可靠。

图7 IRF6基因多态性与NSCL/P相关性的发表性偏倚：GA+AA vs GG

讨 论

本次研究共纳入7篇文献，其中Yongchu Pan2010[8]和王玲2015[13]的研究指出IRF6基因rs2235371位点基因型频率和等位基因频率分布在NSCL/P组与对照组间差别无统计学意义，但李梦洁2012[11]和姚旺2013[14]的研究却指出明rs2235371位点的A等位基因突变与NSCL/P的发病呈负相关，该突变降低了NSCL/P的发病危险。经过合并分析得出IRF6基因rs2235371位点GA和GA+AA基因型在NSCL/P组与对照组间差别有统计学意义，可降低中国人罹患非综合征型唇腭裂的风险。AA vs GG和GA+GG vs AA这两组meta分析时，其异质性较大，由于纳入的7个研究中，有4个来自汉族，3个来自其它民族，考虑种族可能是异质性来源之一，因此进行亚组分析。亚组分析后，异质性明显减小，且AA vs GG和GA+GG vs AA基因型在汉族NSCL/P组与对照组间差别有统计学意义。此结果提示：IRF6基因rs2235371位点SNPs与NSCL/P之间的关系存在种族差异，且AA型可降低汉族罹患NSCL/P的风险，GA+GG型可增加汉族罹患NSCL/P的风险。

IRF6基因是通过研究伍德综合征而被发现的，1987年，Bocian等[18]通过染色体分析首次报道了伍德综合征患者有染色体lq32-lq41的缺失。随后一些学者们在位于lq32-1q41区域内的IRF6基因上找到了与伍德综合征表型一样的基因突变。伍德综合征患者临床表现与单纯唇裂或腭裂难以区别，因此对伍德综合征致病基因的研究，为NSCL/P致病基因的探索提供了有利的线索。同时该基因编码干扰素调节因子6，其蛋白结构包括N端高度保守的DNA结合域以及C端相对保守的蛋白结合域，这种蛋白结合域是可以介导TGF-β信息通路的其中一种转录因子[19]，所以IRF6基因的变异导致此种重要的发育通路受到影响，许多研究分析表明伍德综合征在相关的颌面部、生殖器以及皮肤等部位中都有比较高表达，基于此将IRF6基因作为NSCL/P的候选基因来研究。2004年，Zucchero等[20]的研究证实NSCL/P的发生在遗传学方面12%归因于IRF6的基因突变，尤其是G等位基因变异作为一种危险因素。近年来，关于IRF6基因rs2235371位点的变异（由G到A的替换）日益增多，但各个研究得出的结论并不一致，因此本次研究采用meta分析的方法定量评价IRF6基因rs2235371位点SNPs与中国非综合征型唇腭裂患者的相关性。

另外此次研究同时存在一些局限性：本次二次研究的对象仅仅为中国患者，未考虑年龄、性别、饮食及其他基因因素的影响。这些因素都有可能会对此次结果产生一定的影响。所以，对于此次的研究结果还需要更多的大样本，同质性的临床病例研究去验证，以便对lRF6基因多态性与非综合征型唇腭裂相关性做出更可靠、更合理的结论。