海尔福口服液对小鼠急性胰腺炎的作用研究

2018-10-16 10:42杨鹏陈学继黄夏诗陈伟潘青青韦儒志冯雪萍肖娟
右江医学 2018年4期
关键词:急性胰腺炎

杨鹏 陈学继 黄夏诗 陈伟 潘青青 韦儒志 冯雪萍 肖娟

【摘要】 目的 探讨海尔福口服液对急性胰腺炎小鼠的作用。方法 通过对小鼠腹腔注射L精氨酸(LArg)构建急性胰腺炎模型,采用海尔福口服液对模型小鼠进行灌胃,分析比较各组小鼠(生理盐水组、海尔福组、LArg组、LArg+海尔福组)的血清淀粉酶含量变化及病理组织形态学变化。结果 与生理盐水组对比,LArg组的血清淀粉酶含量显著提高(P<0.05),病理切片出现腺泡明显水肿、空泡化,小叶间隙增宽等表现;与LArg组相比,海尔福干预组的血清淀粉酶含量显著降低(P<0.05),病理切片图表明胰腺小叶结构完整,腺泡水肿程度减轻。结论 海尔福口服液能减轻LArg诱导的急性胰腺炎的炎症程度,降低血清淀粉酶含量,促进炎症恢复。

【关键词】 海尔福;L精氨酸;急性胰腺炎;血清淀粉酶

中图分类号:R576 文献标识码:A DOI:10.3969/j.issn.10031383.2018.04.001

【Abstract】 Objective To investigate the effects of Haierful oral liquid on acute pancreatitis in mice.Methods Acute pancreatitis model was established by intraperitoneal injection of Larginine (LArg) in mice,and the model mice were given Haierfu oral liquid by intragastric administration.And then,the changes of serum amylase content and pathological histomorphology of mice in each group(saline group,Haierful group,LArg group and Haierful+ LArg group) were analyzed and compared.Results Compared with the saline group,the serum amylase content significantly increased in the LArg group(P<0.05),and the histopathologic sections showed obvious edema,vacuolation and widening of interlobular septum,etc.Compared with the LArg group,the serum amylase content in the the Haierful group significantly decreased(P<0.05),and the pathological sections showed that the pancreatic lobule structure was intact and the acinar edema degree reduced.Conclusion Haierful oral liquid can reduce the inflammation degree of acute pancreatitis induced by LArg,reduce serum amylase content,and promote the recovery of inflammation.

【Key words】 Haierful oral liquid;LArg;acute pancreatitis;serum amylase

急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)是一种发病迅速,病情复杂,致死率高,治疗费用昂贵的急重症。全世界的科研工作者对急性胰腺炎进行了大量的研究,但其作用机制尚未完全清楚,治疗该种疾病的特异性药物也尚未研制成功。海尔福口服液是我院张树球教授研制成功的一种功能性饮料,可作为抗氧化剂来清除机体的氧自由基,保护炎症细胞中的細胞膜和线粒体功能,减少线粒体自噬,提供稳定的ATP,有利于炎症恢复。目前为止尚未发现海尔福对急性胰腺炎作用的相关文献报道,本实验拟注射L精氨酸(LArg)构建急性胰腺炎小鼠模型,采用中药提取液海尔福干预AP小鼠,并分析比较生理盐水(NS)组、海尔福(Haierful)组、LArg组和LArg+海尔福组的血清淀粉酶(AMS)的变化及胰腺组织病理学变化,探讨海尔福口服液对AP小鼠的作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物与分组

实验动物: SPF级6周龄昆明小鼠40只(由右江民族医学院动物实验中心提供,许可证号:SCXK(桂)20172003,使用许可证号:SYXK(桂)20170004),雌雄各半,体重(20±2)g。分组:SPF级环境下,适应性饲养一周后将小鼠随机分为4组:NS组(n=10),海尔福组(n=10)、LArg组(n=10)和LArg+海尔福组(n=10)。

1.2 药品

海尔福口服液由右江民族医学院海尔福研制中心提供,该口服液由金银花、茯苓、甘草、杨桃果等中药精制而成[1]。

1.3 试剂及仪器

L精氨酸(上海起发实验试剂有限公司);AMS 试剂盒(南京建成生物工程研究所);低速台式离心机(上海安亭科学仪器厂);电热恒温水浴锅(北京长源实验设备厂)。

1.4 实验方法

1.4.1 模型建立

所有小鼠在实验前禁食12 h,可自由饮水。前14 d,每间隔24 h,NS组和LArg组每天灌胃0.3 ml生理盐水,海尔福组和LArg+海尔福组每天灌胃0.3 ml海尔福口服液。第15天,分两次间隔1 h生理盐水组和海尔福组腹腔注射NS (0.01 ml/g体重),LArg组和LArg+海尔福组腹腔注射LArg(0.01 ml/g体重),LArg剂量为2 mg/g,浓度为20%。最后一次注射完成12 h后,行小鼠眼球取血,分离血清,测定血清淀粉酶含量;小鼠颈椎脱臼处死,取胰腺用标本固定液固定后,石蜡包埋、切片,常规HE染色,光镜下观察组织形态学变化。

1.4.2 小鼠血清淀粉酶含量检测

取适量制备好的血清,按照试剂盒使用说明书,检测和计算各血清样本中血清淀粉酶浓度(碘淀粉比色法)。

1.4.3 胰腺组织病理学检查

小鼠颈椎脱臼处死后解剖,取胰腺制作病理组织切片,光镜下观察胰腺组织形态学变化。

1.5 统计学方法

采用SPSS 19.0统计软件进行统计学处理,计量资料以均数±标准差(±s)表示,多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用最小显著性差异法(LSD),检验水准:α=0.05,双侧检验。

2 结 果

2.1 各组小鼠的血清淀粉酶含量检测

血清检验结果表明,与生理盐水组对比,海尔福组的血清淀粉酶含量差异无统计学意义(P>0.05),LArg组的血清淀粉酶含量显著提升(P<0.05),表明成功诱导急性胰腺炎模型。LArg+海尔福组与生理盐水组之间差异无统计学意义(P>0.05),而与LArg组比较差异有统计学意义(P<0.05)。实验结果表明,LArg会导致急性胰腺炎发生,血清淀粉酶提升,而海尔福能有效降低AP的血清淀粉酶含量。见表1。

2.2 胰腺病理学检查

生理盐水组小鼠胰腺切片提示:光镜下胰腺组织结构清晰,细胞形态正常,无水肿,无明显出血坏死;海尔福组小鼠胰腺切片提示:光镜下胰腺腺泡结构清晰,细胞形态正常,无水肿;LArg组小鼠胰腺切片提示:光镜下可见腺泡明显水肿、空泡化,腺泡边界不清,小叶间隙增宽,血管变化不明显;LArg+海尔福组小鼠胰腺切片提示:胰腺小叶结构完整,腺泡水肿程度减轻。见图1 A~D。

3 讨 论

LArg少量多次重复腹腔注射小鼠诱导急性胰腺炎,方法简单易操作,重复性好,发病进程及组织学变化与人类相似,是常用的复制急性胰腺炎的方法[2]。经前人研究发现,AP的发生与体内自由基的释放和清除机制紊乱有关[3],自由基参与 AP 胰腺水肿的形成过程,机体自由基增加会导致胰腺组织的直接损伤[4],甚至加速胰腺的坏死进程。

海尔福口服液由金银花、茯苓、甘草、杨桃果等中药精制而成,富含锌、硒、钙、镁等微量元素,具有清热解毒、健脾利湿、清除自由基、稳定生物膜、增强机体免疫力、提高机体的抗氧化能力等作用[5~8],可修复损伤的线粒体膜[9],促进细胞能量代谢,保护线粒体功能,促进炎症的恢复。血清淀粉酶活性测定是急性胰腺炎诊断的主要生化指标之一,通过测定血清淀粉酶活性可以了解胰腺炎的炎症程度。本实验的小鼠血清淀粉酶浓度检测结果表明,LArg組的含量与生理盐水组对比有显著提升,病理结果显示腺泡水肿,小叶间隙增宽。从病理切片和血清淀粉酶含量来看,海尔福组与生理盐水组差异无统计学意义。在LArg+海尔福组中,小鼠的血清淀粉酶与生理盐水组、海尔福组之间比较差异无统计学意义,与LArg组比较有统计学意义,病理切片图发现LArg+海尔福组小叶结构完整,腺泡水肿程度较LArg减轻。

本实验结果表明,海尔福有一定的修复急性胰腺炎损伤细胞和保护胰腺组织的作用,这与其具有很强的清除自由基能力和提高机体抗氧化能力是吻合的。另外,海尔福富含Mg2+(含量高达164.57 μmol/L),因Mg2+含量的高低直接影响到机体体内多种关键酶的活性,如磷酸果糖激酶、己糖激酶、丙酮酸激酶等[5]。通过比较,海尔福能够有效降低AP的血清淀粉酶含量,修复受损细胞,其作用机理可能与其Mg2+含量丰富,提高体内一系列酶活性,调节物质代谢过程有关。但海尔福对急性胰腺炎最大的有效给药剂量、药物应用间隔时间和作用机制有待进一步深入探索。

参 考 文 献

[1] 杨海龙,梁伟江,吴 艳,等.中药海尔福对铝中毒小鼠模型大脑的乙酰胆碱转移酶活性的影响[J].环境卫生学杂志,2014,4(6):509513.

[2] 谭至柔,唐国都,姜海行,等.抗氧化剂对急性胰腺炎大鼠核因子κB和一氧化氮合酶的影响[J].世界华人消化杂志,2004,12(3):711713.

[3] Schulz HU,Niederau C,KlonowskiStumpe H,et al.Oxidative stress in acute pancreatitis[J].Hepatogastroenterology,1999,46(29):27362750.

[4] 彭承宏,阙日升,周君富,等.一氧化氮等自由基在急性胰腺炎及并发SIRS中的作用[J].中国实用外科杂志,2000,20(12):718720.

[5] 李 韬,张树球,卢彩珍,等.海尔福微量元素的测定分析[J].右江民族医学院学报,1995,17(1):1416.

[6] 蒙 山,曲德英,张树球,等.海尔福口服液保护砷中毒小鼠肝脏的病理学观察[J].中国地方病防治杂志,2005,20(1):1213.

[7] 李 韬,陈菊芳,玉 莹,等.海尔福对铝致老年痴呆症小鼠治疗效果的实验研究[J].工业卫生与职业病,2012,38(4):224227.

[8] 何 胜,杨 猛,廖维芳,等.海尔福口服液对自由基清除率影响的实验研究[J].现代中西医结合杂志,2011,20(26):32683269.

[9] 李 海,王金花,黎 飚,等.汞对雄性小鼠生殖腺的影响及海尔福的治疗作用[J].中国冶金工业医学杂志,2010,27(4):381382.

(收稿日期:2018-05-07 修回日期:2018-06-15)

(编辑:梁明佩)

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