EU-8000全自动尿液分析流水线性能验证

程瑞飞，姜亚锋，侯思南，赵晓慧,侯思南△

(1.南京中医药大学连云港附属医院检验科，江苏连云港 222000；2.江苏省连云港市第三人民医院 222000)

尿常规是检验科三大常规项目之一，在泌尿生殖系统疾病、肾脏疾病的诊断及疗效观察，职业病防护，健康体检中发挥极其重要的作用。良好的仪器性能和高质量的配套试纸条是尿液分析结果的重要保证[1-3]。南京中医药大学连云港附属医院购进的迈瑞EU-8000全自动尿液分析流水线(简称EU-8000)是迈瑞公司生产的第一款全自动尿液分析流水线，由干化学部分UA-5800尿液分析仪(简称UA-5800)、尿液有形成分分析部分EH-2080B(简称EH-2080B)及连接桥组成。为验证EU-8000的可靠性，本文根据《干化学尿液分析仪》(YY/T0475-2011)、《尿液有形成分分析仪(数字成像自动识别)》(YY/T0996-2015)等行业标准[4-5]，对其进行性能验证。现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 收集2017年10月16日至11月30日南京中医药大学连云港附属医院住院患者的新鲜尿液标本1 988份，用EU-8000在2 h内完成检测。

1.2仪器与试剂 EU-8000及其配套的试纸条，A液和B液，Olympus CX-31显微镜，优利特URIT-1600全自动尿液分析仪及其配套试纸条，上海伊华生产的多项目尿液化学分析质控品(批号为16031205)，江苏省临床检验中心2017年第2次尿液分析质评物，0.9%生理盐水(石家庄四药有限公司生产，批号1706163203)。

1.3UA-5800验证方法

1.3.1携带污染率 采用尿液干化学阳性质控品和蒸馏水评价UA-5800除pH值、尿比重(SG)以外的检验项目的携带污染率，用质控品连续检测3次之后再连续检测蒸馏水3次，观察空白测试被污染的程度。

1.3.2精密度 采用UA-5800连续重复检测阳性质控品20次，在20次检测结果中，以出现次数最多的结果为该项目的均值，计算出现均值的结果个数所占检测总数的百分比，符合率≥90%为合格。

1.3.3准确性 采用UA-5800测定江苏省临床检验中心2017年第2次尿液分析室间质评物，质评物共5个批号，分别为171206、171207、171208、171209、171210；从低温冰箱中取出质评物，恢复至室温，每个批号检测5次，统计5个批号10个项目的能力比对得分(PT)。PT得分判断标准：测定结果与靶值相差一个量级，且阴性结果不可为阳性、阳性结果不可为阴性认定为合格，PT得分大于80分为合格。

1.3.4阴性和阳性符合率 收集住院患者的新鲜尿液标本100份，采集后2 h内用UA-5800完成检测，同时用优利特URIT-1600尿液分析仪检测干化学项目，以URIT-1600尿液分析仪为基准仪器(仪器运行良好，质控在控，多次参加省室间质评PT成绩≥95分)，将UA-5800结果与优利特URIT-1600检测结果比对。阴性结果测定为阳性，阳性结果测定为阴性或阳性结果相差一个量级以上时认定为不符合，计算阴性符合率、阳性符合率和总符合率，总符合率在80%以上时符合要求。

1.4EH-2080B验证方法

1.4.1携带污染率 采用EH-2080B检测红细胞(RBC)水平大于10 000个/微升的标本3次，检验结果为H1、H2、H3，再连续3次检测蒸馏水，结果分别为L1、L2、L3，根据携带污染率=(L1-L3)/(H3-L3)×100%,计算RBC的携带污染率；取高白细胞(WBC)水平(>5 000个/微升)尿液标本，WBC携带污染率检测方法同RBC。携带污染率不大于0.05%为合格。

1.4.2重复性 配制pH为6.0的含高、中、低水平RBC和WBC的标本各3份，每份标本混匀后测定20次，计算RBC和WBC的平均值和变异系数(CV)；判断合格的标准是高、中水平处CV≤15%，低水平处CV≤25%。

1.4.3识别率 收集2017年10月16日至11月30日住院患者的新鲜尿液标本1 988份，采集后2 h内用EH-2080B完成检测，每份标本同时用显微镜镜检，以镜检法为金标准[6]，以SPSS17.0统计软件计算镜检法与EH-2080B两种方法检测RBC、WBC、管型的符合率和Kappa值。判断合格的标准：RBC符合率≥70%、WBC符合率≥80%、管型符合率≥50%。

1.4.4稳定性 配置RBC水平均为200个/微升的尿液标本，在开机预热后0、4、8 h分别重复检测标本10次，计算30次的CV；判断合格的标准为CV≤15%。

1.4.5线性 用少量全血加入pH值为6.0正常新鲜尿液，分别配制成RBC水平为14 000个/微升，WBC水平为10 000个/微升的标本，充分混匀，各用Sysmex XN-1000血细胞分析仪体液模式检测3次，以RBC、WBC平均值为理论值，按1∶2、1∶4、1∶16、1∶64、1∶256的比例稀释，稀释后以EH-2080B分别检测3次，计算RBC、WBC的均值，将理论值与检测均值做线性回归方程。

1.4.6检出限 分别配置RBC、WBC水平为5个/微升的尿液标本2份,用EH-2080B各检测20次,如18次检测结果大于0个/微升,则符合行业标准要求。

1.4.7可报告范围 配制极高水平的RBC标本，水平分别为15 000、16 000、17 000个/微升，同时利用阴性标本，用EH-2080B各检测10次，计算均值和CV。

1.5统计学处理 采用SPSS17.0统计软件进行统计分析。计数资料以率表示，组间比较采用χ2检验。一致性检验采用Kappa检验；Kappa值分级标准：0.00～0.40为一致性不够理想；0.40～0.75为中度一致性；kappa值大于0.75为高度一致性。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1UA-5800相关指标结果

2.1.1携带污染率 阳性质控物检测之后检测的蒸馏水结果均不为阳性，符合行业标准。见表1。

2.1.2精密度 UA-5800检测的10个项目精密度符合率均≥90%，符合要求。见表2。

2.1.3准确性 UA-5800参加江苏省临床检验中心2017年第2次尿液分析室间质评，5个批次，每1个批次应做项目10个，按照江苏省临床检验中心尿液室间质评结果的判断标准统计，合格项目10个，PT得分100分，具有较高的准确性。

表1 UA-5800携带污染率结果

注： PRO为尿蛋白；GLU为尿糖；KET为尿酮体；NIT为亚硝酸盐；BIL为胆红素；URO为尿胆原

表2 UA-5800精密度统计

注：PRO为尿蛋白；GLU为尿糖；KET为尿酮体；NIT为亚硝酸盐；BIL为胆红素；URO为尿胆原

表3 UA-5800与URIT-1600的阴性和阳性符合率(%)

注：PRO为尿蛋白；GLU为尿糖；KET为尿酮体；NIT为亚硝酸盐；BIL为胆红素；URO为尿胆原

2.1.4阴性和阳性符合率 10个项目总符合率均在90%以上，符合要求。见表3。

2.2EH-2080B相关指标结果

2.2.1携带污染率 根据携带污染率公式计算，RBC、WBC的携带污染率均为0，小于0.05%，符合行业标准要求。

2.2.2重复性 RBC在高、中、低水平尿液标本中的CV分别是9.54%、11.08%、14.72%，WBC在高、中、低水平尿液标本中的CV分别是10.10%、11.79%、17.96%，符合《尿液有形成分分析仪(数字成像自动识别)》(YY/T0996-2015)行业标准的要求。见表4。

表4 EH-2080B重复性结果

2.2.3识别率 通过与显微镜镜检结果进行比对，RBC、WBC、管型的符合率(分别为95.7%、95.2%、98.0%)均符合要求，仪器测定的RBC、WBC与镜检的Kappa值(分别为0.823、0.843)>0.75，具有高度一致性，两种方法测定的管型Kappa值为0.716，具有中度一致性。见表5。

表5 EH-2080B测定结果与显微镜镜检结果比对(n)

2.2.4稳定性 计算30次检测结果的CV为11.78%，符合要求。

2.2.5线性 RBC的线性回归方程为Y=0.962 7X-14.113 0，R2=0.999 1，WBC的线性回归方程为Y=0.965 5X+41.511 0，R2=0.998 3。RBC、WBC的斜率(b值)在1.00±0.05范围内，R2≥0.95，线性良好。

2.2.6检出限 RBC、WBC各检测20次,结果均大于0,均值分别为3.95、3.03个/微升。EH-2080B可以检测出水平为5个/微升RBC、WBC的标本,符合行业标准要求。

2.2.7可报告范围 RBC阴性标本重复测定，均值为0，水平为15 000、16 000个/微升时，均值分别为14 459、15 657个/微升，CV分别为8.01%、8.75%,符合要求。在RBC水平为17 000个/微升时，检测均值为15 928个/微升,CV为17.5%，高于15.0%的判断标准。仪器显微镜下拍摄的视野模糊，细胞有重叠，易被识别成真菌，重复性较差，故可认为RBC的可报告范围是0～16 000个/微升，对于严重血尿时，可用生理盐水对标本稀释后再检测。

3 讨 论

随着检验医学的发展，作为常规检查仪器的尿液分析仪种类越来越多。根据自己实验室的实际情况，选择适合的尿液分析仪并验证仪器的性能对实验室尤为重要，其性能的好坏直接关系到尿液分析结果的准确性，因此有必要对新引进的EU-8000进行性能验证。干化学部分UA-5800为定性及半定量检测仪器，在当前没有相对标准化的性能验证方案，根据《医学实验室质量和能力认可准则在体液学检验领域的应用说明》[7]，干化学仪器至少需验证阴性和阳性符合率，尿沉渣至少验证携带污染率、精密度和可报告范围。本文验证了UA-5800的携带污染率、精密度、阴阳性符合率，以及与优利特URIT-1600尿液分析仪结果的一致性，同时验证了沉渣部分EH-2080B携带污染率、重复性、识别率、稳定性、线性、检出限及可报告范围。

UA-5800采用传统的光反射原理，通过试纸条的颜色变化，计算出反射率，通过对反射率的处理将相应项目转化成定性或半定量结果。该仪器检测结果不受操作者手法及试纸条浸入尿液时间长短等因素的影响。由于住院患者尿液标本检验前周转时间较长，尿有形成分易沉淀，检测时需要手工混匀标本，建议增加自动搅拌功能，减少因操作者混匀操作的差异造成结果的偏差。UA-5800的性能验证目前尚缺少相应的标准，本文的验证方法简单、操作性强。通过验证可知，UA-5800的携带污染率、精密度、准确性、阴阳性符合率均符合要求。

EH-2080B采用显微镜数字图像拍摄技术，通过软件的自动识别和分类，达到对尿液常见有形成分的检测。拥有国家发明专利DIF技术，不需要调焦液，仪器自动调焦，可节省检测成本。采用自主研发的高精注射器加样，持久耐用、无需更换，节省了维护成本。标本不需要离心处理，保持图像全程高清直观。特别是对于识别错误或误认的成分，可以进行人工审核确认，减少了大批量标本的人工涂片镜检。通过对EH-2080B尿沉渣部分进行验证，RBC、WBC具有极低的携带污染率，提示仪器经过初始化冲洗后，管路几乎无残留细胞。该仪器具有良好的精密度，CV在细胞低水平时大于中高水平。以镜检法为标准，通过比较，两种方法检测的RBC、WBC具有高度一致性，测定的管型Kappa值为0.716，呈中度一致性，对管型的识别稍差一点，但也符合要求。这与管型形态种类多样，水平又极低有关，在背景复杂时极易识别错误，需要检验人员对具有管型形成条件的标本进行审核确认[8]。在连续开机4～8 h，具有较高的稳定性。RBC、WBC具有极低的检出限和极宽的线性范围，可满足临床异常标本(如血尿、脓尿)检测的要求。

本文通过验证发现，EU-8000操作较简单，无需离心处理标本，图像直观、清晰，检测结果准确、可靠，具有较高的临床应用价值，但需对仪器识别的阳性结果进行人工确认[9]。目前任何自动化的尿液分析仪均不能完全代替镜检[10]，在注重仪器检测的同时，仍需提高检验人员的形态学水平。