基于射干苷临床利用量的川射干质量评价研究

徐玉玲， 王 姚， 张文静， 杨 慧， 杨俊莉， 彭晓宇

(成都大学 药学与生物工程学院， 四川 成都 610106)

0 引 言

川射干，为鸢尾科植物鸢尾的干燥根茎，有清热解毒、消痰利咽的功效，主治咽喉肿痛、痰咳气喘等症[1].据文献报道，川射干在临床上具有神经保护、抗肿瘤、抑菌等作用[2-5].研究表明，射干苷为川射干药材的主要有效成分之一，具有抗炎、祛痰、抗病毒等药效作用，可用作川射干药材及其制品的质量控制指标[6].

目前，中药材质量评价方法主要以化学有效成分含量为指标，但有研究发现，现行标准中用于含量测定的药材细粉并不能完全代表药材整体成分的真实数据[7].对此，刘涛等[8]提出用药材真实含量结合有效成分临床利用量来评价药材的质量.中药成分临床利用量，是指药材成分在临床应用时，药材中的化学成分可被临床使用时利用的量，此质量评价方法符合中医药临床应用特点，是体现中药特色的一种中药质量评价方法.基于此，本研究利用射干苷的临床利用量对川射干药材的质量进行再评价研究，拟为川射干及其他中药材品质评价提供一种新思路.

1 仪器与材料

1.1 仪 器

实验所用仪器包括：P-230Ⅱ型高效液相色谱仪(大连依利特分析仪器有限公司)；BS-6KH型电子天平(上海友声衡器有限公司)；FA-2004型分析电子天平(上海良平仪器仪表有限公司)；101-1-S型电热鼓风干燥箱(成都雅源科技有限公司)；KQ-100E型超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司)；DL-1型电子万用炉(北京永光明医疗仪器有限公司)；HH-6型数显电子恒温水浴锅(常州国华电器有限公司)；PHS-3C型精密PH计(上海日岛科学仪器有限公司).

1.2 材 料

实验所用材料包括：川射干药材(批号，170102、170108、170114、170123、170127、170206、170211、170221、170325、170331，简称为S1、S2、S3、S4、S5、S6、S7、S8、S9、S10)，购自四川逢春制药有限公司，经成都大学刘涛研究员鉴定为鸢尾科植物鸢尾的干燥根茎；射干苷对照品(批号，wkq16070103，HPLC≥98%)，购自四川维克奇生物科技有限公司；甲醇为色谱纯，水为怡宝纯净水，其余试剂均为分析纯.

2 方法与结果

2.1 川射干中射干苷含量测定

2.1.1 色谱条件.

实验的色谱条件为：色谱柱为Global Chromatography C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相为甲醇—0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液(用磷酸调节pH值至3.0)(32∶68)；流速为1.0 mL/min；柱温为30 ℃；检测波长为265 nm.

2.1.2 对照品溶液的制备.

取射干苷对照品适量，精密称定，加70%乙醇制成124.8 μg/mL的对照品溶液.

2.1.3 供试品溶液的制备.

1)供试品溶液1.取本品粉末(过3号筛)约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇25 mL，密塞，称定重量，超声处理1 h，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液1 mL,置50 mL量瓶中，加70%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得.

2)供试品溶液2.取本品未过3号筛药材约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%乙醇25 mL，密塞，称定重量，超声处理1 h，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液1 mL，置50 mL量瓶中，加70%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得.

3)供试品溶液3.取部分提取液于5 000 r/min下离心10 min，量取上层离心液2.5 mL于50 mL容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀，即得.

2.1.4 线性范围.

分别精密量取射干苷对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL，置于10 mL容量瓶中，加70%乙醇稀释至刻度，摇匀，按“2.1.1”项下色谱条件，分别进样10 μL，测定峰面积，以峰面积为纵坐标(Y)，射干苷质量浓度为横坐标(X)，绘制标准曲线，得回归方程，Y=45451X+31.877，R=0.9990.结明表明，射干苷进样量在0.0624～0.3744 μg范围内与峰面积线性关系良好.

2.1.5 精密度.

精密吸取射干苷对照品10 μL，重复进样6次，按“2.1.1”项下色谱条件测定峰面积.结果显示，RSD值为0.81%，表明仪器精密度良好.

2.1.6 重复性.

按“2.1.3”项下供试品溶液3制备供试品，平行6份，以“2.1.1”项下色谱条件测定射干苷峰面积.结果显示，RSD为2.55%，表明本方法重复性良好.

2.1.7 稳定性.

按“2.1.3”项下供试品溶液3制备供试品，以“2.1.1”项下色谱条件分别在供试品制备好后0、2、4、6、8、12、18、24 h进样测定射干苷峰面积.结果显示，RSD为0.89%，表明在24 h内供试品稳定性良好.

2.2 川射干提取工艺优选

2.2.1 单因素实验.

取川射干50 g，平行2份，置于圆底烧瓶中，均加入10倍量水，分别在不浸泡[9]和浸泡至透心后，提取1 h，滤过，冷却后测量体积.取部分提取液于5 000 r/min下离心10 min，量取上层离心液2.5 mL于50 mL容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀，测定射干苷含量，结果见表1.

表1 单因素实验结果

2.2.2 正交试验.

1)因素及水平的选择.以水为提取溶媒，选取溶媒用量(A)、提取次数(B)与提取时间(C)为考察因素，以提取液中射干苷的量为考察指标，采用L9(34)正交试验.其因素水平表如表2所示.

表2 因素水平表

2)试验设计及结果.分别取9组川射干药材，每组100 g，按正交试验设计进行实验，测定提取液体积，按“2.1.1”项下色谱条件及“2.2.1”项下步骤进行含量测定，以川射干中射干苷的量与提取液中固含物(7∶3)为指标，采用加权评分法进行评分，结果如表3所示，方差分析如表4所示.

表3 正交试验设计表

注：综合评分=(射干苷量/最大射干苷量)×70+(固含物重/最大固含物重)×30

表4 方差分析表

由表4可得，水的用量(A)、提取次数(B)和提取时间(C)均对实验结果有极显著性影响，且影响大小依次为C>B>A.据此结果，选择最佳提取工艺为A2B2C3，即用8倍量水，提取2次，每次2 h.

3)验证实验.根据正交试验所得最佳提取工艺，以每份100 g川射干对其进行3组平行验证实验，所得川射干射干苷的含量分别为323.93 mg、353.50 mg及283.82 mg，固含物的量分别为11.89736 g、11.21472 g、11.57785 g，以川射干中射干苷含量与提取液中固含物(7∶3)作为指标计算RSD为1.61%.结果表明，正交试验所得最佳工艺稳定可行.

2.3 不同批次川射干中射干苷真实含量及临床利用量测定

2.3.1 不同批次川射干中射干苷真实含量测定.

按“2.1.3”项下方法制备供试品，以“2.1.1”中色谱条件分别测定10批川射干的真实含量(测定过3号筛的川射干粉末与未过的部分药材的射干苷含量，然后根据两部分的比例计算出川射干中射干苷的含量，即为药材的真实含量)，结果如表5所示.

表5 不同批次川射干中射干苷真实含量测定结果

表5数据表明，川射干药材真实含量最高的是第10批，真实含量为3.48%，最低的是第2批，其真实含量为1.23%；过筛粉末含量均高于其药材真实含量.

2.3.2 不同批次川射干中射干苷临床利用量测定.

分别取不同批次川射干药材100 g，浸泡至透心，按最佳提取工艺提取，得提取液，冷却后备用，取部分提取液于5 000 r/min下离心10 min，量取上层离心液2.5 mL于50 mL容量瓶中，加水定容至刻度，摇匀.测定川射干中射干苷含量以及临床利用量，结果如表6所示.

表6 不同批次川射干中射干苷临床利用量测定结果

注:临床利用量=100 g×药材真实含量×真实含量转移率

表6数据表明，第10批川射干药材临床利用量最低，为152.076 mg/100 g；第4批川射干药材临床利用量最高，为422.823 mg/100 g.10批药材真实含量差距不大，但由于其真实含量提取转移率相差较大，使得10批药材临床利用量不同.

同时，本研究利用数据处理软件“IBM SPSS statistics”中双变量相关“pearson”对10个批次(S1～S10)的川射干按《中国药典》测定含量和真实含量并与临床利用量进行相似度分析.经计算，含量与真实含量和临床利用量相关系数大小分别为-0.287(微弱负相关)、-0.539(显著负相关).

3 结 语

目前，临床应用上使用最广泛的溶媒为水，为研究川射干的临床利用量，本研究选取水作为提取溶媒.射干苷属异黄酮类，其水溶性差[10]，难以在水中完全溶解，因此，其提取转移率较低，但提取转移率低也可能与药材炮制方式有关.

《中国药典》2015版四部关于药材与饮片定量检测项中均规定过筛，并取过筛后粉末以其中某一化学成分量为指标进行定量测定来判断药材是否合格.研究发现，取通过不同药筛的细粉测定，其成分含量有一定变化[11]，而未过筛的药材与过筛后的药粉指标成分量相差较大，如栀子和木蝴蝶[7].则取过筛后的细粉进行定量测定所得的结果并不能完全代表药材整体成分的真实量，故本研究按文献[8]中的方法测定真实含量来代表药材整体成分的含量.通常，药材的含量测定是采用有机溶剂把药材中的化学成分提取出来加以测定的，临床利用量是采用水作为溶媒将化学成分提取出来并测定的.由本实验结果可知，由于提取溶媒的极性差异导致川射干中射干苷的临床利用量多少与药材中射干苷含量及真实含量高低呈负相关，而临床利用量是表征药物中化学成分在被患者服用时药材可被利用的量，更能体现药物临床价值，对该值的研究和测定可为中药品质评价提供一种新思路.