超薄液基细胞技术在胸腹水癌细胞检测中的应用价值

闫敢，李明，周蓓蓓

盱眙县人民医院病理科，江苏盱眙 211700

正常情况下，人体胸腹腔脏器间存在少量液体发挥润滑作用，但受疾病因素影响，胸腹腔液体增多或脏层膜吸收液体速率下降，即可导致胸腹腔液体积存，形成胸腹水[1]。依据病因不同，胸腹水可分为良性和恶性两种，不同病理类型的胸腹水临床治疗及预后存在差异，因此，准确鉴别胸腹水性质，对临床制定治疗方案、评价疗效具有重要指导意义[2]。薄层液基细胞学检测（TCT）是近年妇科临床广泛应用的细胞学诊断技术，标本满意度高，但在非妇科领域的应用尚存在争议。胸腹水脱落细胞具有确诊意义，为薄层液基细胞学检测的应用提供了可能[3]。文章现以2017年1月—2018年1月该院605份胸腹水标本为例，对薄层液基细胞技术诊断胸腹水癌细胞的临床效果进行分析探讨，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

以该院临床科室送检的605份可疑恶性胸腹水标本为研究对象。纳入标准：①同时以液基细胞涂片和传统涂片进行细胞组织学检查的胸腹水标本；②阳性病例有内窥镜、穿刺活检或手术病理对照；③患者知情同意；④伦理委员会批准同意。排除标准：标本对应临床及病理资料不全。胸腹水标本类型：胸水标本377例，腹水标本228例。标本来源：主要来自肿瘤科、呼吸科、消化科、胸外科、妇科具有胸腹水症状的患者。

1.2 方法

1.2.1 标本采集与处理 全部患者均基于超声引导技术行腹腔或胸腔穿刺，负压吸引抽取胸腹水标本。标本保存于专用清洁容器内，一般标本量在200 mL以上。为防止细胞变性凝结或细菌破坏溶解，样本获取后加入EDTA抗凝，即刻送检实验室。实验室收到标本后，立即采集细胞，进行细胞学检查。

1.2.2 液基薄层涂片细胞学检查 实验室内，将新鲜的胸腹水充分振荡，取15 mL标本置于试管中，上机离心5 min，离心速率2 000 r/min。去上清液，加入约细胞团体积3倍的液基细胞保存液（备案号:鄂孝械备 20140008 号/执行标准:YZB/鄂孝 0231-2010），充分振荡混匀。从试管中吸取适量细胞悬液，于载玻片偏右侧端垂直滴1～2滴，以推片用30°夹角将玻片上检液向左推，完成涂片制备，涂片直径约为1.5 cm。待涂片自然干燥后，95%乙醇固定30 min，以保持细胞自然形态，随后常规HE染色，中性树胶封固，显微镜下观察。

1.2.3 传涂片细胞学检查 实验室内，将新鲜的胸腹水充分振荡，取20 mL标本置于离心管内，上机离心10 min，离心速率2 000 r/min。去上清液，取沉淀物直接涂抹于干净载玻片上，95%乙醇固定后HE染色，常规光镜诊断。

1.3 观察指标与评价标准

由同一组细胞学专家对两种涂片进行镜下观察，对比观察两种涂片胸腹水癌细胞的检出情况。结果判定采用三级诊断法，具体如下：①阳性表达（确诊恶性）：10%以上靶细胞可见棕褐色或黄褐色颗粒，定位清晰；②阴性表达（确诊良性）：细胞完全不着色；③可疑阳性（可疑恶性）：细胞着色，但效果未至阳性表达，介于两者之间。

1.4 统计方法

以SPSS 17.0统计学软件进行数据分析，计数资料以率（%）表示，行 χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

统计结果显示，605份胸腹水标本液基薄层涂片细胞学检查检出癌细胞96份，检出率15.86%，传统涂片细胞学检查检出癌细胞77份，检出率12.73%，比较差异有统计学意义，见表1。胸腹水液基薄层涂片与传统涂片阳性表达见图1、图2。

表1 两种标本涂片胸腹水癌细胞检出情况比较[n（%）]

图1 胸腹水液基薄层涂片镜下阳性表达

图2 胸腹水传统涂片镜下阳性表达

3 讨论

超薄液基细胞技术是一种改良细胞学制片技术，能通过技术处理去除涂片上的杂质，直接制成清晰可观的薄层涂片，使观察更容易，既往广泛用于宫颈病变临床筛查中，普遍获得比传统涂片理想的诊断效果[4]。

近年来，薄层液基细胞技术开始用于尿液、痰液、胸腹水等非妇科领域脱落细胞的临床诊断中，在疾病定性诊断中发挥了重要作用[5]。既往，临床诊断胸腹水采用传统涂片，其应用虽具有排列方式及背景的优势，但样本内常混以大量炎性渗出物、红细胞及粘液等，且标本薄厚不一，镜下观察细胞多层重叠严重，阳性细胞常被覆盖，导致结构不清，在很大程度增加了阅片的困难度，影响诊断准确性[6-7]。液基薄层涂片操作简单、快捷，细胞收集率高，一次标本收集可制成多张涂片，重复性高[8]，而且试剂盒中固定液能去除标本中红细胞碎片及其他杂质成分，经HE染色后，无红细胞干扰，背景清晰，细胞结构完整，染色鲜艳，能有效克服传统涂片细胞不均、偶然性强的不足，有助于单个细胞镜下观察，提高诊断准确率[9]。该次临床研究结果显示，液基薄层涂片细胞学检查癌细胞检出率（15.86%）高于传统涂片（12.73%），与文献报道的液基薄层涂片恶性胸腹水检出率（14.76%）高于普通涂片（10.82%）的研究结论一致[10]，肯定了薄层涂片用于胸腹水定性诊断中的作用优势。

但值得注意的是，液基薄层涂片对肿瘤细胞较少或存在反应性间皮细胞等疑难病例较难确诊，虽然可行免疫细胞化学染色，但非特异性着色较多，阳性区域不易确定[11]。另外，液基薄层涂片制作过程中振荡、离心、混匀等步骤会破坏原有癌细胞团的细胞排列方式，故在肝腹水癌细胞原发部位推断方面存在一定局限性[12]。由此可见，两种涂片各有优势及不足，建议临床检测胸腹水癌细胞时，两种同时制片，对于液基薄层涂片阳性表达而传统涂片未见典型癌细胞者，则重留标本，复查传统涂片，以进一步明确诊断。

综上所述，超薄液基细胞技术是检测胸腹水癌细胞的有效手段，薄层涂片能获得优于传统涂片的诊断效果，但仍有不足，建议联合应用以提高癌细胞检出率，更好的为临床提供指导。