结肠癌FOLFOX辅助化疗方案对组织中TS、P53表达的影响

李宗山，李忠辉，张晋冀

(1.迁西县人民医院 外二科，河北 迁西064300；2.华北理工大学附属医院 肿瘤外科)

结肠癌作为胃肠道常见恶性肿瘤之一，发病率占胃肠道肿瘤的第3位。由于结肠癌早期症状并不明显，确诊时大部分患者已进入结肠癌中晚期，严重威胁生命健康和生活质量[1,2]。结肠癌发病机制涉及多种因素，所以在目前治疗方案也在不断完善并呈现个体化现象。FOLFOX方案是目前治疗结肠癌术后化疗的常用方案，其他还有XELOX、CapOX、生物靶向治疗以及单药辅助化疗等方案。本研究在对选取的64例结肠癌患者进行化疗前后体内的TS及P53表达的检测、研究，进一步探讨化疗期间体内肿瘤相关表达物的变化意义。

1 材料与方法

1.1一般资料

选取2015年1月至2017年3月间在我院行结肠癌根治术患者64例,其中男性38例，女性26例，年龄33-69岁，中位年龄45岁，术前均常规检查，均无其他病症，手术统一采用结肠癌根治术，术后待切口基本愈合，进食普食，无相关并发症，患者基本情况良好后化疗。术后病理诊断为Ⅱ、Ⅲ期结肠癌。患者基本情况见表1。

1.2方法

检测64名患者在辅助化疗前体内TS及P53表达情况，选用S-P免疫组化试剂盒，采购自福建迈新公司，TS、P53抗体(稀释比例：1∶100)采购自Santa Cruz生物公司。按照使用说明检测TS及P53表达情况并记录数值。对患者同意进行FOLFOX4辅助化疗方案(奥沙利铂130 mg/m2，静脉滴注，d1；亚叶酸钙200 mg/m2，静脉滴注，d1-d2；5-氟尿嘧啶，静脉推注，d1-d2；5-氟尿嘧啶600 mg/m2，静脉持续滴注，d1-d2)。每2周为1个疗程。在进行到第3疗程后，再次以同样方式检测患者体内TS、P53表达变化情况并同样记录相关数据。

1.3免疫组织化学染色的判定

由于TS及P53免疫组化染色着色部位位于细胞核及细胞质，其阳性染色呈现的棕黄色沉着颗粒。

表1 实验对象临床构成情况

故在光镜(400倍视野)下计算1000个肿瘤细胞阳性细胞数。规定为不表达或阳性细胞数<10%为阴性；视野中阳性细胞数≥10%为染色阳性。细胞染色计算及判定均由2名未参加本研究的病理科专业医师进行独立操作，结果不一致时由2人协商决定。

1.4统计学方法

应用统计学软件SPSS 19.0对本研究实验数据进行统计学分析，对辅助化疗前后肿瘤分子标记物TS、P53在表达水平上的变化情况，应用卡方检验进行评价。规定检验水准α=0.05。

2 结果

辅助化疗前患者TS表达阴性24例，阳性40例，而经3周期化疗后表达阴性36例，阳性28例，比较辅助化疗前后TS表达变化数据，差异具有统计学意义(P<0.05)。P53的表达在化疗前阴性27例，阳性37例，而经3周期化疗后表达阴性41例，阳性23例，比较辅助化疗前后P53表达变化数据，差异具有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 NAC前后P53表达变化情况

注：该组数据表明：TS和P53表达水平在NAC前后发生变化，表明NAC对TS和P53表达水平具有影响。

3 讨论

在历经多年对于结肠癌辅助化疗的研究和探索后，目前相关报道辅助化疗可显著改善临床Ⅱ、Ⅲ期患者预后，结肠癌患者的3年无病生存率由从前单纯手术治疗的44%-52%提高至接受辅助化疗后的70%-75%。其中1990年Moertel等人[3]首次提出氟尿嘧啶/左旋咪唑应用1年能够显著提高Ⅲ期结肠癌患者无病生存期(DFS)和总生存期(OS)。但对不同病情患者使用相同化疗方案是否正确目前仍存在异议。ASCO认为对于那些出现肠梗阻、肠穿孔、肿瘤分化程度低、浸润程度较严重以及出现某器官血管癌栓的患者可以考虑进行辅助化疗，采用FOLFOX方案，但这种情况下患者长期无病生存获益低于5%，并且辅助化疗会带来一系列毒副反应，反而降低了患者的生活质量[4]。

TS是胸苷酸合成的限速酶， TS在DNA合成与修复、细胞增殖与分化中有十分重要的作用,也是肿瘤化疗药5-氟尿嘧啶和甲氨蝶呤等重要靶酶。5-氟尿嘧啶进入体内后被活化成氟尿嘧啶脱氧核苷酸(FdUMP)，FdUMP替代dUMP与TS及CH2FH4形成不易解离的三联复合物从而抑制TS不能合成dTMP，也就不能合成肿瘤细胞DNA，从而发挥抗肿瘤的药理生物学效果。Temmink等人[5]挑选了对5-氟尿嘧啶继发性耐药的人类结肠癌细胞株H630-RI、H630-R10和H630-R与其父系H630细胞株进行比对试验后发现各耐药细胞株对5-氟尿嘧啶耐药性明显增加，说明TS表达水平的增加导致肿瘤组织对5-氟尿嘧啶敏感性降低，TS的过度阳性表达增加机体对5-氟尿嘧啶的耐药风险。

P53是一种肿瘤抑制基因。在所有恶性肿瘤中，50%以上会出现该基因的突变。Muller等人研究发现[6]若P53基因突变后，由于其空间构象发生改变，失去了对细胞生长、凋亡和DNA 修复的调控作用，P53基因由抑癌基因转变为癌基因，并引起蛋白水平过度表达。P53与肿瘤相关性的研究一直是医学界热点，对于P53表达水平与结肠癌辅助化疗效果的研究目前较为一致，日本学者Yamaguchi等人研究发现[7]在100例结肠癌患者中，P53表达阳性患者的复发率明显高于其阴性表达者(23.8% vs 5.9%，P<0.05)，并且2年生存率明显低于阴性表达者(61.8% vs 96.7%，P<0.05)。而Zaanan等人[8]对诊断为Ⅲ期的结肠癌患者接受FOLFOX化疗方案的试验中发现P53表达能预测奥沙利铂在该类患者治疗中的疗效。

综上所述，本研究对于在结肠癌患者辅助化疗前后检测体内TS、P53的表达情况，经统计计算后发现TS、P53表达水平发生明显变化，其前后表达变化数值均具有统计学意义。在辅助化疗后患者体内TS、P53发生变化，而其阳性表达水平的增高不单单会导致肿瘤细胞对化疗药物的耐药产生，影响近期治疗效果，更重要的是此类改变会导致肿瘤的复发率升高，严重影响患者生活质量和生存时间。所以，在化疗中期检测患者体内TS、P53的表达情况，适时、适当的调整化疗方案。