骨肉瘤中cyclinD1和p53蛋白的表达及其意义

宇洪浩,原 泉,王 欢,安春厚,林新宏

(中国医科大学附属盛京医院 第二骨科脊柱外科，辽宁 沈阳110004)

骨肉瘤是原发恶性骨肿瘤，青少年多见，男性略多于女性，临床表现为疼痛、肿块、功能障碍、病理性骨折、贫血等，多采取手术切除结合放化疗治疗，但复发率和转移率均较高，预后差，死亡率高[1]，早期诊断及治疗具有重要意义。骨肉瘤发生机制可能与多种基因同时改变有关，cyclinD1蛋白能够调节细胞周期，p53蛋白调节靶基因的转录，抑制细胞增殖，两种蛋白在骨肉瘤细胞增殖、迁移过程中发挥着积极的不可替代的作用。本文采用免疫组化法检测血清cyclinD1与p53表达水平，分析其与骨肉瘤病理相关性，以便指导临床诊断，改善患者预后。

1 资料与方法

1.1临床资料选择2017年5月-10月来我院治疗的48例为脊柱骨肉瘤患者作为观察组，所有患者术前未进行任何治疗，男27例，女21例；年龄36-67岁，平均(55.29±6.14)岁，骨肉瘤均经病理证实。选择同期手术切除脊柱骨样瘤组织的患者48例作为对照组，其中男26例，女22例，年龄38-66岁，平均(54.39±7.25)岁。 骨样瘤组织均经术后病理证实。

1.2方法生理盐水清洗标本组织，用锡箔纸包裹，在液氮中冷冻10 min，再装入EP管中，保存-70℃。兔抗人cyclinD1多克隆抗体由北京万域美澜科技有限公司生产，鼠抗人p53单克隆抗体由武汉华美生物工程有限公司生产，SP试剂盒由上海嵘崴达实业有限公司生产。 按试剂盒说明书操作。

1.3结果判定[3]由两名病理科医师采用双盲法阅片。p53阳性表达为棕黄色颗粒，在细胞核和细胞浆聚集。CyclinD1阳性表达为棕褐色颗粒，细胞核内聚集。染色阳性细胞比例评分:0%-5%计为0分，6%-25% 计为1分，26%-50%计为2分，51%-75% 计为3分，大于75%计为4分；将“+”、“++”、“+++”均视为阳性，根据相加总分进行结果判定。

2 结果

2.1表达水平比较观察组cyclinD1阳性率高于对照组(83.33%vs16.67%)，p53蛋白阳性率低于对照组(31.25%vs68.75%)(P均<0.05)。见表1。

2.2表达水平与病理相关性骨肉瘤组织中cyclinD1呈高表达，p53呈低表达，二者均具有相关性(P<0.05)。见表2。

表1 两组患者组织中cyclinD1、p53表达量比较%]

表2 cyclinD1、p53蛋白表达与骨肉瘤相关性%]

3 讨论

CyclinD1是一类蛋白家族，调节细胞周期，其表达水平可随细胞周期变化，参与干细胞的自我更新，促进细胞周期的进程，能够与基因特异性结合，调节多种基因表达，同时还能促进细胞的增殖[4]，对细胞发生突变、异常增殖及浸润转移具有重要意义[5]。CyclinD是G1期的主要调控蛋白，在G1期其数量恒定，cyclinD1的过量表达导致G1期缩短，同时细胞对血清的需求减少，促癌基因被激活，抑癌基因失活，导致癌细胞增殖增加、凋亡减少，从而导致恶性病变并进一步进展，目前已被确定为原癌基因[6]，检测到在乳腺癌、食管癌、肝细胞癌、胃肠癌、甲状旁腺癌等组织内均有cyclinD1的过度表达[7]。其过度表达使抑癌基因Rb的功能失活，对细胞周期的负性调节失控，细胞无节制性生长。在骨肉瘤中cyclinD1出现高表达提示其与骨肉瘤细胞的过度增殖密切相关，G1期cyclinD1的去调控与骨肉瘤的形成和发生有关[8]，表达越高预后越差。p53蛋白能够修复DNA，保证DNA稳定遗传；调节细胞周期，抑制细胞增殖；调节靶基因的转录，参与癌细胞的衰老、凋亡。p53蛋白调控靶细胞，这类非侵入性相关基因起到抑癌基因的作用，p53蛋白水平升高，DNA细胞在G1期阻滞不前，不能继续生长，故p53具有抑制细胞异常增殖、促进细胞凋亡的作用，p53水平降低，促进了细胞突变、异常增殖，促进骨肉瘤的发生[9]。提示血清中存在肿瘤特异性cyclinD1和p53两种蛋白，可检测二者的表达水平，作为骨肉瘤的诊断指标，指导临床治疗。

本研究发现观察组cyclinD1蛋白表达水平明显增高，p53明显降低，这表明二者参与了癌细胞的分裂、生长和迁移，导致癌细胞无限制的增殖，调节转录因子，抑制基因的转录[10]，增强细胞运动能力，造成骨肉瘤细胞浸润性生长，引起癌细胞向淋巴、血液等远处侵袭，并向细胞间质外转移[11]。研究还发现骨肉瘤与cyclin D1高表达及p53低表达具有相关性，提示二者在骨肉瘤细胞的生成、增殖、侵袭有促进作用，高表达的cyclin D1在骨肉瘤的发生发展中起着不可缺少的调控作用，提示检测cyclinD1及p53蛋白可做为高风险肿瘤的标志物，有效评估患者的预后，二者联合可提高检出率。