ApoM基因rs805296多态性与冠心病相关性的Meta分析

马如超 吴晶晶 朱晓芸 闫波

冠状动脉粥样硬化性心脏病（coronary heart disease，CHD）是冠状动脉粥样硬化引起管腔狭窄或闭塞，导致心肌缺血缺氧或坏死的一类心脏病，简称冠心病［1］。近年来全基因组关联分析（genome-wide association study，GWAS）分析发现CHD与基因异常表达密切相关［3］。ApoM基因是一种脂质代谢相关基因，其主要通过影响高密度相关载脂蛋白表达调节血脂水平，增加CHD的发病风险［4］。ApoM基因的多态位点rs805296（又名T-778C）与CHD发病风险的研究较多，但结果不一［5-12］。 本文对相关rs805296的病例-对照研究进行Meta分析，探讨其与CHD的相关性。

资料与方法

1.检索策略 计算机检索 PubMed、EMbase、The Cochrane Library、中国知网学术总库、维普数据库和万方数据库，查找关于ApoM基因rs805296多态性与CHD相关的病例对照研究，检索时限为建库至2018年3月。检索采用主题词和自由词相结合的方式进行。中文检索词包括冠心病、多态性、单核苷酸多态性、SNP、rs805296、T-778C；英文检索词包括 Single Nucleotide Polymorphisms、Polymorphism，Single Nucleotide、Nucleotide Polymorphism，Single、Nucleotide Polymorphisms， Single、 Polymorphisms，Single Nucleotide、 Single Nucleotide Polymorphisms、SNPs、mutation、 variants、 variant、atherogenesis、atherosclerosis、atherosclerosis、myocardial Infarction、infarction，myocardial、 infarctions，myocardial、 myocardial infarctions、 cardiovascular stroke、 cardiovascular strokes、 stroke，cardiovascular、 strokes，cardiovascular、heart attack、heart attacks、 myocardial infarct、infarct，myocardial、infarcts，myocardial、 myocardial infarcts、coronary diseases、diseases，coronary、coronary heart disease、coronary heart diseases、disease，coronary heart、diseases，coronary heart、heart disease，coronary、heart diseases，coronary、Apolipoproteins M。 以PubMed为例，具体检索策略见图1。

2.纳入与排除标准 ①研究类型：病例-对照研究。②研究对象：病例组为经临床诊断明确的CHD患者；对照组为非CHD者。③暴露因素：ApoM基因rs805296多态性。④结局指标：CHD发病风险。⑤文献纳入与排除标准：纳入标准：①研究类型均为病例对照试验；②研究对象资料完整，病例组为诊断明确的CHD患者，对照组无CHD病史；③各研究均研究ApoM基因rs805296多态性。排除标准：①病例组诊断不明确，对照组无代表性；②无法获取相关有效数据的文献或原始数据不完整；③综述、病例报道、评论、信件及重复发表文献；④研究未报告结果。

3.文献筛选、资料提取及质量评价 由2位研究者根据纳入与排除标准独立筛选文献、提取资料，如果不能达成统一意见则与第三名研究者讨论决定。资料提取内容包括：①作者信息、发表年份；②研究类型；③人群的基本特征；④基因检测方法；⑤病例组与对照组中基因频率及基因型分布情况；⑥哈迪-温伯格平衡（Hardy-Weinberg equilibrium，HWE）。

（2）采用 NOS 量表（Newcastle-Ottawa Scale）评价纳入研究的偏倚风险［13］，其通过研究对象的选择、组间可比性及暴露因素3个方面共8个条目对纳入研究进行评分，满分为9分，0～4分为低质量研究，4～6分为中等质量研究，6～9分为高质量研究［14］。

4.统计学分析 基于遗传模型进行Meta分析：①等位基因模型Cvs．T；②显性模型（CC+CT）vs．TT；③隐性模型 CCvs．（CT+TT）；④杂合子模型TCvs．TT；⑤纯合子模型CCvs．TT。效应量分析选用比值比（Odds ratios，OR）及95%CI作为二分类指标统计量。通过Q检验和I2进行异质性分析，当结果一致性良好或异质性低时，采用固定效应模型，反之则采用随机效应模型［15］。发表偏倚采用Egger＇s检验进行判断。以P＜0.05为差异有统计学意义［16］。其中敏感性分析和发表性偏倚采用 Stata 12.0软件，其余分析均采用RevMan5.3。

结 果

1.文献检索结果 如图 1所示，共纳入8项［5-12］研究，6 篇中文，2 篇英文，病例组1 675 例，对照组1 735例。检索流程图如图1。

2.质量评价 纳入的研究参考NOS标准进行质量评价，结果显示：各个研究样本量充足，CHD诊断明确，对纳入的研究基线特征均进行合理的检验，病例组与对照组可比性良好，对照组符合H-W平衡，纳入研究的文献质量良好。纳入研究的基本特征及偏倚风险评价结果见表1。

3.Meta分析结果（1）整体分析：采用 Rev-Man5.3软件对纳入的研究进行合并效应量后提示：ApoM基因rs805296多态性在等位基因模型（Cvs．T：OR＝1.76，95%CI：1.50 ～2.06，P＝0.00，图 2）、显性模型（CC+CTvs．TT：OR＝1.85，95%CI：1.56～2.20，P＝0.00，图3）、隐性模型［CCvs．CT+TT：OR＝1.92，95%CI：1.08 ～3.40，P＝0.03，图 4）、杂合子模型［TCvs．TT：OR＝ 1.83，95%CI：1.53 ～2.19，P＝0.00，图5）、纯合子模型（CCvs．TT：OR＝2.15，95%CI：1.21 ～3.81，P＝0.009 ，图6）中，该多态性与CHD存在相关性。

图1 PubMed检索策略

表1 纳入研究的基线特征（±s）

表1 纳入研究的基线特征（±s）

纳入研究 方法 研究人数（病例/对照）年龄/岁 性别（男/女） 基因型（病例/对照）病例 对照 病例 对照 TT TC CC HWE平衡NOS评分王馨等［5］（2013） PCR-RFLP 46/60 51 ±6 53 ±9 37/9 49/11 29/51 16/9 1/0 是 5马莉萍等［6］（2011） PCR-RFLP 46/56 51.4±5.3 51.7±6.5 / / 28/47 17/9 1/0 是 5张效林等［7］（2012） PCR-RFLP 675/636 56.4±9.9 55.8±10.4 372/303 354/282 530/556 135/74 10/6 是 6张效林等［8］（2013） PCR-RFLP 238/236 57.3±8.6 56.2±9.4 138/100 136/100 176/230 58/31 4/2 是 6黄健等［9］（2013） PCR-RFLP 220/195 63.8 ±11.1 57.9 ±10.1 122/98 92/103 145/150 66/41 9/4 是 6焦国庆等［10］（2008） PCR-RFLP 118/225 61.8±11.4 60.4 ±12.7 89/29 152/73 86/194 29/31 3/0 是 8 Zheng Lu等［12］（2014） PCR 测序 206/209 61.86 ±9.2 60.39 ±9.06 165/41 157/52 165/170 39/35 2/4 是 7 Zheng Lu 等［11］ （2009） RTPCR 126/118 62.5 ±9.4 63.0 ±10.8 98/28 88/30 99/100 25/18 2/0 是 7

图2 ApoM基因rs805296多态性与冠心病相关性Meta分析（C vs．T）

图3 ApoM基因rs805296多态性与冠心病相关性Meta分析（CC+CT vs．TT）

图4 ApoM基因rs805296多态性与冠心病相关性Meta分析（CC vs．CT+TT）

图5 ApoM基因rs805296多态性与冠心病相关性Meta分析（TC vs．TT）

图6 ApoM基因rs805296多态性与冠心病相关性Meta分析（CC vs．TT）

图7 ApoM基因rs805296多态性与冠心病相关性的敏感性分析（C vs．T）；图8 ApoM基因rs805296多态性与冠心病相关性的漏斗图（C vs．T）

（2）敏感性分析：采用 Stata12.0软件，对异质性较大的遗传模型进行敏感性分析，按质量评价标准将纳入的文献逐步剔除后重新采用固定效应模型和随机效应模型进行分析，提示与之前结果相似，证明本研究的结果稳定、可靠。见图7。

（3）发表偏倚分析：采用Egger回归法验证 Meta分析是否存在发表性偏倚，结果提示：CHD在所有比较模型中均无发表性偏倚（P＞0.05），结果属实可信（图8，表2）。

表2 发表偏倚检验结果

讨 论

随着对CHD危险因素、发病机制的逐步认识，CHD的诊疗取得了一定的成果，但CHD的发病率、病死率仍在逐年增加［17］。GWAS分析发现，CHD与遗传易感性存在着明显的相关性［3］，其中脂质代谢基因对CHD的发生发展起重要作用［18］，因而CHD遗传关联研究已成为CHD研究的一个新方向。ApoM是一种高密度脂蛋白相关载脂蛋白，参与胆固醇的逆向转运［19］。ApoM的表达受其基因的调控，目前已有多项研究表明ApoM基因与糖尿病、CHD、血脂异常、风湿性关节炎等疾病有关［20，21］。ApoM基因位于6号染色体，其过表达可增加血浆HDL-C水平，促进前β-HDL生成，从而预防动脉粥样硬化的发生发展［22］。ApoM基因的表达调控受其上游的作用原件如启动子、增强子、沉默子等影响，多项研究发现ApoM基因启动区rs805296多态性与CHD存在相关性。因而本文共纳入8篇符合标准的相关文献，分析两者的相关性，分析后发现在五种模型中的C等位基因是CHD发病的危险因素，可能是该多态位点影响了ApoM基因的表达调控，进而影响了HDL-C的转运，促进CHD发生发展。

本研究的局限性：本研究纳入的研究均为病例对照研究，论据的论证强度可能不足；本文纳入的研究样本量相对较小，可能缺乏代表性，引起假阳性结果；本文的纳入的研究均为中国汉族人群，不能代表其他民族人群，代表性可能不强；CHD的调控并非单一基因作用的结果，本文仅纳入ApoM基因单个核苷酸多态性，未考虑其他相关基因的影响；CHD的发病是环境跟基因共同作用的结果，本文只考虑基因作用的影响，未考虑其他环境因素的影响。

综上所述，本研究结果初步推定ApoM基因rs805296多态性与CHD的发病有关，其C等位基因是CHD潜在危险因素，未来需要进一步开展大样本、多中心、多民族的的高质量研究来进一步佐证其在CHD发病中的作用。