潘红平 黄春梅 李广锋 朱旭瑶 徐岩 王琼 杨素芳
(1.广西大学动物科技学院/广西大学野生动物研究所,南宁 530005; 2.广西盛凯投资有限公司,南宁 530004)
穿山甲属于脊索动物门,脊椎动物亚门,哺乳纲,鳞甲目,穿山甲科,穿山甲属,现存穿山甲仅8种。鳞甲目为单型目,且为单科单属,组成的物种少,其灭绝的危险程度比其它任何同级(目)分类阶元都要大,依据国际上分类阶元优先保护的原则,穿山甲应当予以优先保护[1,2]。一旦这8种穿山甲全部灭绝,哺乳纲动物将会永远丧失一个目的分支,带来无可挽回的物种多样性和遗传多样性的巨大损失!穿山甲体外覆有角质鳞甲,鳞片间杂有稀疏硬毛。不具齿。吻尖、舌发达,前爪长,适应于挖掘蚁穴、舐食蚁类等昆虫[3]。穿山甲多生长于热带及亚热带地区。分布在东南亚、中国及非洲,在中国主要分布在长江以南地区,包括广西、广东、云南等省区。中华穿山甲(Manispentadactyla)主要分布在中国和东南亚地区,马来穿山甲(Manisjavanica)主要分布在越南、老挝、柬埔寨、缅甸、泰国、马来西亚、印度尼西亚、菲律宾等东南亚各国,我国云南南部也有分布[4]。
穿山甲性凉味咸,能消肿溃痈,搜风活络,通经下乳。主治疮痈肿毒,风寒湿痹,月经停闭,乳汁不能杀虫,行血,攻坚散瘀,能经治痹[5]。外用可止血其肉质不仅味道鲜美,口感细腻,更可助弱抚正,行血健体。历来被视为滋补上品。另外,现在一些医学研究甚至还认为,穿山甲具有防癌和预防心血疾病的功效,因此人们大量使用穿山甲。鉴于其传统药用、食用市场需求巨大,供需矛盾十分突出,长期以来形成了乱捕滥杀的恶性局面。同时由于杂木林被砍伐,以人工杉木林、速生桉所取代,再加上土地的开发、旅游者增多和环境污染,使得穿山甲栖息地大量丧失,生态环境受到严重破坏,穿山甲面临威胁,资源急速枯竭,已造成全球野生穿山甲种群数量急剧下降[6],几乎绝了迹。穿山甲列为我国二级保护动物名录,明文严禁滥杀和贸易,受到国家重点保护;在2014年,世界自然保护联盟(IUCN )红色名录将中华穿山甲马来穿山甲和从濒危级(EN)提升为极度濒危级(CR);2016 年10 月,在第 17 届《濒危野生动植物种国际贸易公约》(CITES)缔约方大会上,各缔约国通过了将所有 8 种穿山甲从附录Ⅱ提升至附录Ⅰ的决议,自2017年1月起穿山甲国际商业贸易被全面禁止。
穿山甲的救护、疾病防治、驯养繁殖是当今的世界性难题。徐聪等对中华穿山甲人工饲养常见疾病治疗和预防进行了研究[7],邓斌等穿山甲人工驯养繁殖技术进行了初步研究[8],高天柱对长尾穿山甲仿生态圈养行为保育进行了研究[9]。近年来,我们参与了穿山甲的救护、疾病防治、驯养繁殖的工作,取得了初步进展。下面就穿山甲的救护过程中一起穿山甲肠炎病的诊治进行总结。
马来穿山甲(Manisjavanica):来自广西壮族自治区林业厅所属的广西珍稀濒危野生动物救护研究中心。
生化培养箱:购自杭州汇尔仪器设备有限公司(型号为SPX-1500)。
超净工作台:购自苏净集团苏州安泰空气技术有限公司(SW-CJ-2F)。
营养琼脂:购自广东环凯微生物技术有限公司。
药敏试纸:购自杭州天和微生物试剂有限公司。药敏试纸敏感性判断标准见表1。
患病穿山甲精神不振,常趴伏于屋角,不活动,食欲减退、不进食或是拒食,消瘦,频繁作拉大便的姿势。肚腹部膨胀,主要是胃内容物滞于胃中发酵膨胀而产生大量气体,胃部逐渐膨大、呼吸急促。用手按肚腹有胀满且柔软感,手敲有鼓音,肛门周围粘有粪便。患病中期前只表现为排稀粪,粪便多而稀或呈水样、淡黄、青绿、腥臭并带胶冻样黏液及脓样物,或带红色血丝。眼结膜发红或发绀,呼吸急促、困难、口唇苍白。
死亡的穿山甲为雌性,体重为3.70kg。经过解剖发现,病死穿山甲的胃、十二指肠、大肠均充满气体和粘液状液体,肠粘膜充血,直肠内容物呈水样、青绿、腥臭并有胶冻样粘液;肝脏暗红色,有血斑;肺部有出血点;心脏、胆囊、脾脏、肾脏、膀胱、卵巢和子宫等均无明显病变。
表1 药敏试纸敏感性判断标准表
图1 患病的穿山甲
图2 患病穿山甲的粪便
图3 死亡的穿山甲
无菌取样,用消毒小剪刀在肠上剪一小口,将接种环从小口插入2cm,前后刮动数次,取出肠的内容物,培养皿靠近酒精灯,将接种环上的内容物按照“连续划线法”涂布到培养基上。同样,在肝脏上剪一小口,将接种环从小口插入1cm,取出内容物,涂布到培养基上。置于培养箱,37℃培养24h。革兰氏染色,镜检。
图4 穿山甲胃肠充血
图5 穿山甲肠胃充气
无菌操作台上,挑取菌落接种于肉汤中,置于培养箱,37℃培养24h,肉汤浑浊。取菌液均匀涂布于普通平板上,贴上药敏试纸,每个培养皿贴5片药敏试纸。置于培养箱,37℃培养8h,测量抑菌圈直径。
在平板上长出灰白色、半透明、边缘整齐、圆形、隆起的菌落,镜检为革兰氏阴性。
从穿山甲肝脏、肠2个部位分离出来的菌株对20种试验药物的敏感性存在一定差异,都高度敏感的药物有环丙沙星、阿米卡星、舒普深(头孢哌酮钠/舒巴坦钠)等3种,都不敏感的药物有利福平、头孢克肟2种。药敏试验结果见表2。
表2 穿山甲药敏试验结果
根据临床症状、剖检情况、镜检和药敏试验结果,判定本批次的穿山甲患有严重的细菌性肠炎。根据上述结果,对本批次存活的其它患病穿山甲进行治疗。
用药:环丙沙星+法莫替丁+口服补液盐。
用量:按每1kg穿山甲体重计算。环丙沙星为,10mg/kg。法莫替丁为,3mg/kg。
用法:称量穿山甲体重,按每1kg穿山甲使用环丙沙星10mg兑温开水,溶解冷却后灌服,间隔2.5小时灌服法莫替丁(消化道疾病常用药),每天一次,连续给药3d,口服补液盐散(葡萄糖11g、氯化钠1.75g、氯化钾0.75g、碳酸氢钠1.25g)兑500ml冷开水灌服,每天4~6次,连续3d。停药后用干酵母片兑水灌服,一天两次,连续2d。一星期后穿山甲病情好转。
有关穿山甲疾病防治的研究和文献不多,陶立等对一起穿山甲疫情的病原分析,从2只病死穿山甲肺中各分离到1株优势菌株,2株分离菌株均为摩氏摩根菌,摩氏摩根菌主要引发穿山甲的肺炎病,对新霉素、壮观霉素、阿米卡星高度敏感[10]。徐聪等对中华穿山甲饲养过程中出现的消化道腹泻、呼吸道感染、体内寄生虫感染等问题进行了研究,通过治疗得到明显的改善,活动能力增强,其中治疗穿山甲消化道疾病的方法是每天在饲料中添加蒙脱石散半袋 (1.5g)用水泡开 、诺氟沙星(300 mg)、益生菌一袋,用药治疗7d后穿山甲精神状态有所好转 可以自主觅食,表现活跃[7]。药敏试验结果显示,诺氟沙星对肝脏部位的病菌高度敏感,而对肠部位的病菌低度敏感,与徐聪的研究有相似地方。试验组采用对肝脏、肠2个部位分离出来的菌株都高度敏感的环丙沙星进行治疗,取得良好的效果,同时由于患病穿山甲腹泻引起脱水,须给患病穿山甲灌服口服补液盐,以免患病穿山甲过度脱水死亡。
本批次的穿山甲的肠炎是由致病性细菌及其产生的毒素引起的一种急性、爆发性的肠道疾病,各个年龄阶段的穿山甲均可发病。在南方阴雨潮湿的天气,细菌容易繁殖导致疫病爆发,所以要保持穿山甲救护和驯养室内空气清新,注意通风换气,并做好穿山甲笼舍和喂食饮水器具的卫生消毒工作。发现本病应及时隔离,避免交叉感染。由于抗菌素的滥用致使产生很多耐药菌株,因此在治疗之前,要通过药敏试验筛选出高敏药物,以便有针对性的用药。
患病穿山甲多数食欲减退、不进食或是拒食,同时为了保证药物剂量,在用药时一般采用灌服的方法。在灌服时要注意小心操作,最好2个人配合操作,一个人负责保定(抓牢)穿山甲,另外一个负责插管推药,插管要轻柔,不要插得太深,以免弄伤穿山甲的口腔。穿山甲的爪很锋利,尾巴也很有力,操作时要带上皮手套,同时用小毛巾被包住穿山甲。
从患肠炎的穿山甲肝脏、肠2个部位分离出来的致病菌株为革兰氏阴性,对环丙沙星、阿米卡星、舒普深高度敏感。可用环丙沙星、法莫替丁、口服补液盐联合用药治疗,效果良好。