HPLC法测定维药西帕依麦孜彼子口服液中栀子苷含量

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喀什地区食品药品检验所，新疆 喀什 844000

西帕依麦孜彼子口服液，收载于《中华人民共和国卫生部药品标准》(维吾尔药分册)，标准编号:WS3-BW-0122-98，具有增强机体营养力、摄住力及排泄力，清浊利尿的功效[1]。用于前列腺炎和前列腺增生所致小便频数、余沥不尽、腰膝酸软、头晕目眩、寐差耳鸣、早泄梦遗等。西帕依麦孜彼子口服液为传统维药合剂，现行质量标准过于落后，仅有鉴别项和检查项，未确定主要成分含量测定指标，难以保证制剂质量的均一、稳定。本研究参照相关文献[2-6]，首次采用高效液相色谱法[7-11](HPLC法)，对西帕依麦孜彼子口服液中栀子苷的含量进行了测定，为维药西帕依麦孜彼子口服液的质量标准研究奠定基础。

1 仪器与试药

岛津LC-2030C 3D高效液相色谱仪(岛津公司)；Sepax HP-C18(250mm×4.6mm，5μm；填料：十八烷基硅烷键合硅胶)。

西帕依麦孜彼子口服液，规格：10 mL，批号：170328、160838、160439，由新疆齐康哈博维药股份有限公司生产。对照品栀子苷(批号110749-201316，含量97.5%，中国食品药品检定研究院)，乙腈为色谱纯，供货商：赛默飞世尔科技(中国)有限公司，水为超纯化水，其它试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Sepax HP-C18；流动相：乙腈-0.1%磷酸(14∶86)；流速：1 mL·min-1检测波长：238 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品储备液：精密称取栀子苷对照品11.32 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇适量，超声至充分溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，制成含栀子苷0.1132 mg·mL-1)的对照品储备液。

2.2.2 对照品溶液：精密量取栀子苷对照品储备液2 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，得栀子苷的质量浓度为22.64 μg/mL的对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液：精密量取西帕依麦孜彼子口服液0.5 mL，置25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，经0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2.2.4 空白溶液：取制备供试品溶液的溶剂，同供试品溶液步骤方法制备，即得。

2.3 方法学考察 专属性实验：精密吸取2.2项下的空白溶液、对照品溶液、供试品溶液各10μL，按上述色谱条件测定，记录HPLC图谱如图1所示。

线性关系考察：分别精密量取2.2.1项下栀子苷对照品储备液各1.0、2.0、5.0、10.0、25.0 mL，分别置50 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制得栀子苷浓度分别为2.26、4.53、11.32、22.64、56.60 μg/mL的系列标准曲线溶液。按拟定色谱条件进行测定，计算峰面积积分值。以栀子苷质量浓度(X，μg/mL)为横坐标、峰面积积分值(Y)为纵坐标进行线性回归，得回归方程，栀子苷为Y=14199.00X-855.28，r=0.99999(n=5)。结果表明，栀子苷质量浓度在2.26～56.60 μg/mL范围内与峰面积积分值线性关系良好。

精密度试验：取2.2.2项下对照品溶液，按拟定色谱条件进行测定，连续进样6次，记录峰面积。结果栀子苷峰面积的RSD为0.11%(n=6)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取2.2.3项下的同一供试品(批号为160838)溶液，置室温下，分别于0、2、4、8、12、24 h按拟定色谱条件进行测定，记录峰面积。结果栀子苷峰面积的RSD为1.14%(n=6)，表明供试品溶液在室温下24 h内稳定。

重复性试验：取西帕依麦孜彼子口服液(批号为160838)，按供试品溶液制备项下的方法制备6份供试品溶液，按拟定色谱条件进行测定，记录栀子苷峰面积。结果栀子苷峰面积的RSD为0.30%(n=6)，表明方法重复性良好。结果见表1。

加样回收试验：精密量取已知含量的西帕依麦孜彼子口服液(批号为160838)0.25 mL 9份，置25 mL量瓶中，分别加入浓度为113.20 μg/mL栀子苷对照品2、2.5、3 mL各三份，按供试品溶液制备方法制备9份待测溶液，按拟定色谱条件进行测定，记录溶液中栀子苷峰面积，并计算加样回收率。结果见表2。

表1 重复性试验结果

表2 加样回收试验结果 (n=9)

2.4 样品含量测定 用3批西帕依麦孜彼子口服液，按2.2.2项下的方法制备供试品溶液，按拟定色谱条件进行测定，记录峰面积，并用栀子苷回归方程计算含量。结果见表3。

表3 样品含量测定结果

3 讨论

本实验选用不同比例的流动相系统，乙腈-0.1%磷酸(10∶90、12∶88、14∶86、15∶85、16∶84、18∶82、20∶80)。结果表明，流动相为乙腈-0.1%磷酸(14∶86)时柱效高，分离效果好。

实验中比较了纯水、30%甲醇、50%甲醇、70%甲醇、甲醇为提取溶媒，结果表明甲醇提取效率最高，因此选用甲醇作为提取溶剂。

西帕依麦孜彼子口服液临床应用广泛，但其质量标准落后，本研究根据制剂组成，选择有效成分栀子苷作为测试指标，对西帕依麦孜彼子口服液的质量进行控制。本方法操作简单，线性关系良好，稳定性、重现性好，加样回收率符合要求，为西帕依麦孜彼子口服液的质量控制提供了良好的依据。