p75NTR对胃癌转移的抑制机制研究

刘 郁，于 亮，段绍斌

(新疆医科大学附属中医医院，新疆 乌鲁木齐830000)

p75NTR全称神经生长因子受体p75是由399个氨基酸组成的I 型细胞跨膜糖蛋白。朱晓婷,赵郁,王轶楠等人[1]认为P75NTR在中枢神经系统的神经元和免疫系统的中性粒细胞、T淋巴细胞和B淋巴细胞等广泛的分布可通过免疫途径对胃癌细胞的繁殖与扩散产生一定的抑制作用。虽然很多学者从不同角度论述了p75NTR对胃癌转移有一定的抑制能力，但实验数据的支撑还很不足，因此急需建立较大的数据库，并利用统计学对这些数据进行分析。本文目的在于通过制备组织样本和建立胃癌细胞系来研究p75NTR在胃癌组织中的表达以及其对胃癌细胞侵袭和转移的抑制能力，探讨p75NTR对胃癌转移抑制的机制。

1 材料与方法

1.1材料

a.组织样本：选取我院2015年至2016年收治的胃癌患者80例，将其分为两组，其中一组为无转移胃癌患者，另一组为有转移胃癌患者，两组患者均为40例。所有患者均经病理诊断确诊为无转移胃癌和有转移胃癌，每位患者各取一份病理组织。

b.胃癌细胞系：利用本院胃癌患者活检组织进行体外细胞培养，获得细胞系。

1.2主要试剂与仪器

a.SP试剂盒和DAB显色试剂盒：北京中山公司；b.RPMI1640培养基：Invitrogen公司；c.ECL Western blot检测试剂盒：Amersham公司；d.超净工作台：赛默飞世尔科技有限公司；e.CO2培养箱：上海乔跃电子科技有限公司；f.核酸蛋白检测仪：上海嘉鹏科技有限公司；g.光学显微镜：Nikon；h.电转移仪：Bio-Rad公司

1.3方法

首先进行细胞培养：取胃癌患者的活检组织，剪碎后于RPMI1640培养基中进行培养，3 d传代一次，隔天换液一次。其次制备组织标本：取患者胃癌组织于福尔马林溶液中保存48 h后取出，石蜡包埋，切片，HE染色，DAB显色，染色评分[2]。最后进行western blog检测：利用Amersham公司的ECL Western blot检测试剂盒对胃癌组织中的p75NTR的表达进行检测，计算其表达率。

1.4统计学方法

2 结果

2.1p75NTR在胃癌组织中的表达及胃癌组织的染色评分p75NTR在无转移胃癌中的表达率为75%，染色评分为(1.25±0.32)；p75NTR在有转移胃癌中的表达率为17.5%，染色评分为(0.51±0.11)，见表1、图1。

表1 p75NTR在胃癌组织中的表达及胃癌组织的染色评分

由表1可知，发生转移的胃癌组织中p75NTR表达率和染色评分均显著低于未发生转移的胃癌组织，差异均有统计学意义(P<0.05)。

2.2胃癌细胞是否转染p75NTR的侵袭率和转移率比较转染p75NTR的胃癌细胞侵袭入细胞外基质的侵袭率为13.5%，胃癌细胞的迁移率为23.6%；未转染p75NTR的胃癌细胞侵袭入细胞外基质的侵袭率为35.8%，胃癌细胞的迁移率为57.3%，见表2。

由表可知，转染p75NTR的胃癌细胞侵袭入细胞外基质的侵袭率和转移率均显著低于未转染p75NTR的胃癌细胞，差异均有统计学意义。

a 癌旁组织；b和c 无转移的胃癌原发灶；d 有转移的胃癌原发灶；e 淋巴结转移灶；f 阴性对照

表2 胃癌细胞是否转染p75NTR的侵袭率和转移率比较

3 讨论

胃癌在发展到一定程度后就会发生转移，在胃癌早期多数患者的症状不典型，而且胃癌病程较短，有相当一部分胃癌病人在确诊之时已有明显的胃癌转移症状，并很快出现恶病质[3]。胃癌的转移途径有很多种，不同患者情况不同，胃癌的转移途径也会不一样。肝脏和腹腔、左侧锁骨上淋巴结都是最多见的胃癌的转移途径，胃癌发生腹腔广泛转移可出现腹水，肝脏转移时可出现肝肿大及相关的症状[4]。研究显示，胃癌的淋巴结转移是胃癌转移的重要途径，而且发生较早。淋巴结转移占胃癌转移的70%，胃下部癌肿常转移至幽门下、胃下及腹腔动脉旁等淋巴结，而上部癌肿常转移至胰旁、贲门旁、胃上等淋巴结[5,6]。

近年来，越来越多的研究证实了，p75NTR对于部分肿瘤的发展有抑制作用，被认为是一种潜在的肿瘤抑制剂[7]。相关报道称，p75NTR对前列腺癌的生长和增殖有显著的抑制作用；然而又有学者研究发现，p75NTR对黑色素瘤细胞的脑转移又有促进作用[8,9]。两项报道的结论之间存在着显著的矛盾，这也提示我们p75NTR发挥的作用并不是固定的，而可能因环境与肿瘤的不同而发挥着不同的作用[10,11]。本文先通过western blot检测了p75NTR在有转移胃癌组织和无转移胃癌组织中的表达，探讨了p75NTR的表达与胃癌组织发生转移的相关性，又通过显微镜观察了有无p75NTR存在的情况下，胃癌细胞侵袭入细胞外基质的能力和其转移运动能力[12]。结果显示,p75NTR在无转移胃癌中的表达率为75%，染色评分为1.25±0.32；p75NTR在有转移胃癌中的表达率为17.5%，染色评分为0.51±0.11。转染p75NTR的胃癌细胞侵袭入细胞外基质的侵袭率为13.5%，胃癌细胞的迁移率为23.6%；未转染p75NTR的胃癌细胞侵袭入细胞外基质的侵袭率为35.8%，胃癌细胞的迁移率为57.3%。研究表明p75NTR通过一定的作用机制抑制了胃癌组织的转移。

综上,p75NTR在有转移胃癌组织中的表达显著低于无转移胃癌组织，且能明显抑制胃癌细胞的侵袭能力和转移能力，对于临床上利用靶向治疗转移胃癌有一定的参考意义。