冯穗芬
【摘 要】 目的: 建立益气活血通络颗粒中葛根素的含量测定方法。方法: 色谱柱:Eclipse XDB-C18(250mm×4.6mm,5μm);流动相为甲醇-水(25∶75);检测波长:250nm;流速:1.0mL/min;柱温:25℃;进样量:10μL。结果:葛根素进样量在0.1210~1.2096μg范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.9999) ,平均加样回收率为101.24%,RSD为1.34%。结论: 该法简单方便,精密度高,准确可靠,可用于该制剂的质量控制。
【关键词】 益气活血通络颗粒;葛根素;含量测定;高效液相色谱法
【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517(2018)05-0017-03
Abstract:Objective To establish a method for determination of puerarin in Yiqihuoxue granules by HPLC. Methods The samples were analyzed on a Eclipse XDB-C18(250mm×4.6mm,5μm)column and the mobile phase consisted of methanol-water solution (25∶75) at a flow rate of 1.0mL·min-1, the detection wavelength was set at 250nm, the sample size was 10μL and the column temperature was 25℃. Results Puerarin showed a good linear relationship within the range of 0.1210~1.2096μg (r=0.9999) ,the average recovery was 10124%,and RSD was 1.34%.Conclusions The method is simple and convenient with high precision and accuracy,and can be used in the quality control of the preparation.
Keywords:Yiqihuoxue Granules; Puerarin; Content Determination; HPLC
益气活血通络颗粒是我院研制的纯中药制剂,由葛根、黄芪、桂枝、羌活、赤芍、炙甘草等十味中药以水煎煮提取制备而成,具有舒筋活络、解痉止痛的功效,临床上用于治疗颈椎病、肩周炎、肌筋膜炎等疾病。葛根为方中君药,黄芪、桂枝为方中臣药,现代药理研究表明,葛根异黄酮是葛根中的主要有效成分,其中葛根素占主體[1],桂枝具有明显的镇痛解痉作用[2]。本研究参照2015版《中国药典》及文献方法[3-6],采用高效液相色谱法对制剂中的有效成分葛根素进行含量测定研究,为控制制剂质量提供实验依据。
1 仪器与材料
1.1 仪器 1200系列高效液相色谱仪(美国安捷伦公司);XS205 型电子分析天平(瑞士Mettler Toledo公司)。
1.2 材料 益气活血通络颗粒(规格: 每袋装8g,批号: 20170401、20170506、20170615) 由医院制剂室提供,葛根素(批号:110752-200912,中国药品生物制品检定所),甲醇为色谱纯,水为重蒸馏水,其余试剂为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱: Eclipse XDB-C18(250mm×4.6mm,5μm);流动相:甲醇-水(25∶75);检测波长:250nm;流速:1.0mL/min;柱温:25℃;进样量:10μL,理论板数按葛根素峰计算应不低于4000,葛根素与其他成分分离度符合要求。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照品溶液的制备 取葛根素对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1mL含120.96μg的对照品溶液,备用。
2.2.2 供试品溶液的制备 取本品适量,研细,取细粉约1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入30%乙醇50mL,密塞,称定重量,超声处理( 250W,40kHz) 30min,取出,放冷,再称定重量,用30%乙醇补足减失的重量,摇匀,取上清液,滤过,取续滤液,即得。
2.2.3 阴性样品溶液的制备 精密吸取不含葛根的阴性样品,按照供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液,即得。
2.3 专属性试验 在2.1项下色谱条件下,分别取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液各10μL进样,记录色谱图;葛根素保留时间为15.20min,理论塔板数为5660,主峰与杂质峰的分离度大于1.5,阴性对照在葛根素色谱峰位置处无峰干扰。如图1所示。
2.4 线性关系 考察分别精密吸取1、2、4、6、8、10mL葛根素对照品母液至10mL容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,分别进样10μL,记录色谱图;得到峰面积(Y)与进样量(X)的关系为Y=1.6233X-60.6190,r=0.9999,表明葛根素在0.1210~1.2096μg 进样量范围内线性关系良好。
2.5 精密度试验 取对照品溶液,精密量取10μL,连续测定6次,结果峰面积的RSD为0.51% (n= 6) 。
2.6 稳定性试验 精密吸取供试品(批号:20170401) 溶液10μL,分别在0、2、4、8、12h进样测定一次,结果峰面积的RSD 为1.44% (n=6) ,结果表明,供试品溶液在12h内基本稳定。