当归调经养血合剂提取工艺研究

彭永政

【摘 要】 目的：优选当归调经养血合剂的提取工艺。方法：以马钱苷的含量和提取液的相对密度为指标，采用正交实验法考察加水量，提取时间，提取次数，获得当归调经养血合剂的优选提取工艺。结果：最佳提取工艺为加水8倍，煎煮2次，每次1.5小时。结论：优选的提取工艺合理可行，可作为当归调经养血合剂的提取工艺。

【关键词】 当归；调经；养血；工艺

【中图分类号】R944.1 【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2018）11-0022-04

Abstract：Objective To optimize the extraction process of Angelica regulating menstruation and nourishing mixture.Methods Using the content of loganin and the relative density of the extract as an index， the orthogonal experiment was used to investigate the optimum extraction conditions of water， extraction time and extraction times.Results The best extraction process is to add water 8 times， boiling 2 times， each time for 1.5 hours.Conclusion The optimal extraction process is reasonable and feasible， and it can be used as an extraction process for the nourishing mixture of Angelica sinensis.

Keywords：Angelica； Tiaojing； Nourishing； Technology

當归调经养血合剂为我院妇科常用的临床经验方，由山茱萸[1]等13味中药组成，具有补血，益气、填精功效、治气血衰弱，肾精不足所致月经后期、月经过少、闭经、痛经、更年期综合症、不孕等症。马钱苷为方中主药山茱萸的主要有效成分，具有调节免疫、抗炎、降血糖等多种功效[2]。本研究采用正交实验法，以水煎提取液中马钱苷的含量和相对密度为考察指标，对当归调经养血合剂的水提取工艺进行优选，为其进一步的研究奠定基础。

1 仪器与材料

1.1 仪器 岛津公司LC-20AD高效液相色谱仪（LabSolutions色谱工作）站；SB25-12DTD型数控超声清洗器（上海新芝生物科技股份有限公司）；AB 135-S十万分之一电子天平（梅特勒-托利多）；AB204-N型万分之一天平（梅特勒-托利多）；超纯水机（北京历元电子仪器）。

1.2 材料 马钱苷对照品（批号110640-201606，中国食品药品检定研究院）；乙腈（色谱纯，批号：1307184A，默克股份两合公司）；甲醇（色谱纯，批号：1301095A，默克股份两合公司）；所用试剂水均为超纯水。

2 方法与结果

2.1 正交试验设计 根据预试验及生产实践，当归调经养血合剂提取工艺采用水煎煮提取的方式，影响水提效果的主要因素为加水量（A），提取时间（B）、提取次数（C）[3-4]。 选用L9（34）正交设计试验。见表1。

2.2 样品提取液的制备 按处方比例称取9份混合中药饮片，按拟定的正交试验方案进行水煎煮提取。每份加水后均浸泡1 h，所得煎煮液浓缩至100 mL，相当于每1 mL含生药0.77 g。

2.3 相对密度 按《中国药典》2015年版第四部通则0601相对密度测定法测定。

2.4 马钱苷含量测定[5-7]

2.4.1 色谱条件 ZORBAX SB-C18 色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-水（10∶90）；流速：1.0 mL/min；检测波长：240 nm；柱温；25 ℃；进样量：10μL。马钱苷对照品，当归调经养血合剂样品和缺山茱萸的阴性对照样品的HPLC色谱。如图1所示。

2.4.2 对照品溶液的制备 精密称取马钱苷对照品6.64 mg，置100 mL容量瓶中，用70%甲醇定容至刻度，摇匀，即得对照品储备溶液（质量浓度为0.0664 mg/mL）。精密量取3 mL对照品储备溶液，置10 mL容量瓶中，用70%甲醇定容至刻度，摇匀，即得对照品溶液（质量浓度为0.0199 mg/mL）。

2.4.3 供试品溶液的制备 分别精密吸取“2.2”项下浓缩液各5 mL，置于50 mL容量瓶中，用70%甲醇定容至刻度，摇匀，经0.45μm滤膜过滤，取过滤液为供试品溶液。

2.4.4 线性关系考察 精密吸取对照品储备溶液1、2、3、4、5、6 mL分别置于10 mL量瓶中，用70%甲醇定容至刻度，摇匀，配制成0.0066、0.0133、0.0199、0.0265、0.0332、0.0398 mg/mL的系列溶液，分别吸取上述溶液各10 μL，进行进样测定，以纵坐标（Y）为峰面积，以横坐标（X）为质量浓度（mg/mL）进行线性回归，得线性方程为Y=21905X-0.9030，相关系数r=0.9999。线性范围在0.0066～0.0398 mg/mL，呈良好的线性关系。

2.4.5 精密度试验 精密吸取同一对照品溶液，重复进样6次，每次进样10μL，按上述色谱条件测定，以峰面积计算，RSD值为0.23%（n=6）。结果表明仪器的精密度良好。

2.4.6 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液，分别放置0、1、2、4、8、24 h后，按上述色谱条件测定色谱峰面积，RSD值为1.13%（n=6），结果显示在24 h内供试品溶液稳定性相对良好。

2.4.7 重复性试验 精密量取同批次样品各6份，按“2.4.3”供试品溶液的制备方法制备6份供试品溶液，测定并计算马钱苷含量，结果含量的RSD值为0.01%（n=6），结果表明该方法具有良好的重复性。

2.4.8 加样回收率试验 精密量取已知含量的同一批供试品溶液6份，分别加入相当于各对照品溶液80%、100%和120%的量，在“2.4.1”色谱条件下检测马钱苷的回收率分别为99.13%、100.45%、100.93%，平均回收率为100.21 %；RSD值为3.68 %（n=6），該方法回收率良好。见表2。

2.5 结果与分析

2.5.1 水煎提取正交试验结果 根据L9（34）正交试验，以马钱苷含量和水提取液相对密度为主要考核指标，设定权重系数分别为0.6、0.4，综合评分=（相对密度/最大相对密度）×0.4×100+（马钱苷含量/最大马钱苷含量）×0.6×100。研究选择提取次数、加水量、提取时间为主要考察因素，由表3可见其影响顺序为C（提取次数）>A（加水量）>B（提取时间），水平影响次序为A3>A2>A1，B3>B2>B1，C2>C3>C1，故最佳提取工艺为A3B3C2。再经方差分析结果（表4）可知提取次数（C）和加水量（A）对提取效果影响显著，为主要因素，提取时间（B）对提取效果无明显影响，为次要因素。考虑节约成本，将B3调整为B2。调整最优的提取工艺为A3B2C2，即8倍的加水量，煎煮2次，每次煎煮1.5 h。

2.6 验证试验 称取与正交试验等量饮片3份，按优选的提取工艺提取，测得相对密度的RSD为0.08%，马钱苷含量RSD为0.81%，表明优选的工艺稳定可行。见表5。

3 讨论

有研究曾以方中君药当归中的阿魏酸作为含量测定指标成分，发现阿魏酸含量测定的方法学验证中专属性不强，阴性对照液相色谱图的干扰成分除了来自川芎的阿魏酸成分干扰，还来自其它药材的阿魏酸成分干扰[9-10]。故没有选择当归中的阿魏酸为提取工艺指标，而选择臣药山茱萸中的马钱苷作为提取工艺的指标。

山茱萸主要成分有环烯醚萜类化合物，而马钱苷是山茱萸补益肝肾的主要药效物质，且其水溶性和热稳定性相对良好，故研究选择马钱苷含量作为提取工艺主要的评价指标进行综合评分。另外方中饮片成分水溶性强，出膏率大，故选择能反映出膏率大小的相对密度作为评价指标之一，并在综合加权评分赋予相对密度40%的比重。此外，综合分析本组研究情况，精密度试验、稳定性试验、重复性试验、加样回收率试验和验证试验等结果均良好，正交试验的方差分析结果也准确可靠，达到了优选出当归调经养血合剂的最佳提取工艺的目的。当归调经养血合剂中山茱萸主要成分马钱苷的最佳提取工艺为8倍的加水量，煎煮2次，每次煎煮1.5 h，可作为后续相关提取研究的基础和参考。

实验未对提取液的最佳pH条件进行分析，仅以马钱苷作为指标成分和相对密度进行优选，研究仍存在一定局限性。但本次工艺研究最大的意义在于采用水溶液为提取溶剂，既能最大限度地节约成本，同时也能高效提取马钱苷，适合工业化生产。

参考文献

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