抗核抗体和抗心磷脂抗体在梅毒患者的检测及临床意义

周建伟 ，孔翠 ，蔡淑静 ，张昭才 ，杨永军 ，申爱华

（1.济宁医学院附属医院，山东 济宁 272000；2.济宁市皮肤病防治院，山东 济宁 272000）

梅毒是由苍白螺旋体（TP）感染所致的一种慢性性传播疾病，可通过血液、胎盘及性传播，并可侵犯全身多个器官，临床表现复杂多样。近年来，梅毒感染人数在我国呈逐年上升趋势。TP对人体的致病机制尚不完全清楚。近年来，有报道认为TP感染后可诱发自身免疫应答[1-2]。本文通过检测梅毒患者血清中抗核抗体（ANA）和抗心磷脂抗体（ACA），探讨TP患者自身免疫应答状态，为梅毒发病机制研究提供实验室依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2013年1月—2014年12月本院皮肤性病门诊确诊的梅毒患者200例为研究对象，梅毒血清学证实试验血清梅毒螺旋体明胶颗粒凝集（TPPA）检测呈阳性，男136例，女64例，年龄 21～72岁，平均（32.5±9.2）岁。另选健康对照组200例，均为本院健康体检者新鲜血清标本，男148例，女 54例，年龄 20～65岁，平均（30.6±8.4）岁，TPPA呈阴性。所有参与者均排除乙型肝炎、丙型肝炎、艾滋病病毒等病原体感染，无肿瘤性疾病及6个月内未服用免疫抑制或增强药物。

1.2 试剂与仪器

1.2.1 试剂 TPPA试剂盒购自MP生物医学亚太私人有限公司，甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）诊断试剂盒购自上海荣盛生物药业有限公司，ANA间接免疫荧光（IIF）法检测试剂、ACA酶联免疫吸附试验（ELISA）盒购自江苏HOB生物科技有限公司。

1.2.2 仪器 奥林巴斯BX51荧光显微镜，芬兰雷勃MK3酶标仪。

1.3 方法 取患者和健康体检者血清标本进行TRUST、ANA、ACA检测。TRUST采用环状卡片法将血清对倍稀释到1∶32进行检测；ANA采用IIF法，基质为Hep-2细胞，将血清以缓冲液分别按1∶100、1∶320、1∶1 000、1∶3 200 稀释，实验步骤参照相关报道进行[3]。以荧光显微镜观察结果，≥1∶100视为阳性；ACA采用ELISA法测定IgG和IgM；具体操作严格按照各试剂盒说明书进行。

1.4 统计学处理 采用SPSS 15.0统计软件，以χ2检验对资料进行统计分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 ACA阳性率和ANA阳性率及其核型分布如表1所示，梅毒患者ANA阳性率为22.5%，与健康对照组阳性率2.5%比较差异有统计学意义（P<0.01）。ACA-IgM的阳性率为29.5%，ACA-IgG的阳性率为12.5%。与健康对照组阳性率（4.5%）比较，差异有统计学意义（P<0.01）。

例（%）表1 梅毒患者ANA和ACA的阳性率

2.2 ANA核型分布 45例ANA阳性标本中，染色体型最高，阳性率为7.0%；其次为胞浆颗粒型（6.5%）；再次为核颗粒型（5.0%），见表2。ANA阳性以低滴度阳性为主，1∶100滴度的阳性例数为33例，占总阳性例数的73.3%，其次为10例1∶320滴度，比例为22.2%；1∶1000滴度的阳性仅为2例，比例约为4.5%。

表2 200例ANA阳性老年梅毒感染患者核型分布 例

2.3 ACA和ANA阳性率与TRUST滴度的相关性200例梅毒患者中，TRUST试验阳性为79例，阳性率为39.5%。ANA阳性率与TRUST滴度的相关系数仅为0.393（P>0.05）；ACA-IgM阳性率与TRUST滴度的相关系数为0.762（P<0.05）；ACA-IgG阳性率与TRUST滴度的相关系数为0.417（P>0.05），见表3。

表3 梅毒患者ANA和ACA阳性率与TRUST滴度相关性 例（%）

3 讨论

至今，TP感染人体后的致病机制仍不甚明确。近年来研究发现，TP感染可引起免疫系统紊乱从而导致免疫损伤[4]。有学者报道，机体在TP的感染刺激下导致器官组织损伤，释放自身免疫原性成分，诱导机体对自身成分发生免疫应答，产生自身抗体，从而引起自身免疫病，造成组织或器官损伤[5]。

本研究中，TPPA阳性的梅毒患者ANA的阳性率为22.5%，显著高于健康对照组的健康体检者（P<0.01）。这提示梅毒患者产生自身抗体的概率显著高于健康对照组的健康体检者[6]。TP感染人体后确实可以刺激免疫系统产生免疫应答，造成自身免疫。在朱浩稳等[5]的报道中，ANA阳性率约为30.4%，数据略有差异，究其原因，一方面可能是不同检验者判读结果的误差造成的，不同检验者即使对同一标本判读仍会有误差，况且两研究是不同的研究者检测不同的标本；另一方面可能与执行的ANA判定标准不同有关，本实验采用的是100-320-1 000判定标准，而后者采用的则是40-80-160的报告系统[7]。在本研究进一步的分析中，发现在ANA阳性标本中，染色体型最高，其次为胞浆颗粒型，再次为核颗粒型。ANA阳性以低滴度（1∶100）阳性为主，中等滴度（1∶320）所占比例较低，高滴度阳性者（>1∶320）很是罕见。这可能提示TP刺激机体引起的免疫应答较弱，机体的免疫损伤可能是由于这种较弱的自身免疫应答的长期作用造成的。与蔡淑静等[8]的报道相比较，虽然各核型高低顺序基本一致，但所占百分比明显略低，这可能与研究对象、结果判断标准的不同有关。

ACA可分为两大类，第一类为β-糖蛋白Ⅰ依赖性ACA，该类ACA和抗原性心磷脂的结合需要β2-糖蛋白Ⅰ的参与，主要采用ELISA法检测；第二类为非β-糖蛋白Ⅰ依赖性ACA或反应素性，常用TRUST试验来检测。本研究结果显示，ACA-IgM在梅毒患者中的阳性率高为27.0%，ACA-IgG为12.5%。虽然两数值均显著高于健康对照（P<0.01），但与其他文献比较[5]，显著偏低，这可能与本文献将ACA-IgM和Ig-G分开统计有关，也可能受试剂敏感度及参考范围的影响。TRUST试验结果显示，其阳性例数约占TPPA阳性例数的1/3。TRUST试验阳性率与ANA阳性率进行相关性分析，相关系数仅为0.393，说明TRUST试验检测的非特异性ACA与抗核抗体的产生不具备明显的相关关系。TRUST试验主要用于活动性梅毒的确定或梅毒分期，对早起梅毒具有一定的诊断意义。而ANA的产生是一个慢性的过程，梅毒患者的多器官损伤或疾病的多样化多是由于抗核抗体对宿主组织器官长期免疫损伤的结果[5]。因此，二者并无明确的相关性。TRUST试验阳性结果与ACA-IgM有较高的相关关系，相关系数高达0.762，提示二者具较为密切的相关关系，ACA-IgM可能在梅毒感染分期和疗效观察方面具有一定的作用[9]。

综上所述，TP感染机体后容易引起自身免疫反应。ANA检测有助于临床评估梅毒患者自身免疫反应损伤，ACA检测连同TRUST试验结果则有益于观察疗效。因此，临床将ANA和ACA作为梅毒患者的实验室常规检测指标具有一定的实用性和必要性。