氯沙坦联合前列腺素E1与ACEI类药物对糖尿病肾病大鼠的药效学差异比较

陈璐　张鑫淼　李更晓

[摘要] 目的 构建大鼠糖尿病肾病模型，对比氯沙坦联合前列腺素E1与ACEI类药物对模型大鼠的药效学差异。方法 大鼠静脉注射链脲佐菌素联合食物诱导糖尿病肾病大鼠模型，按其给药方式分为空白组、模型对照组、卡托普利组、氯沙坦组、前列腺素E1组、氯沙坦联合前列腺素E1组，造模成功后连续用药4周，观察其血糖（Glu）、糖化血红蛋白（HbA1c）、血胰岛素（FINS）、血尿素氮（BUN）、血肌酐（Scr）、血胆固醇（CH）、血甘油三酯（TG）、尿量（Vol）、尿肌酐（Cr）、尿蛋白（Pro）、肾指数（RI）、肾小球直径和面积。 结果 与空白组相比，模型对照组Glu、HbA1c、BUN、Scr、CH、TG、Vol、Pro、FINS、RI明显上升（P<0.01），Cr明显降低（P<0.01）。各给药组较模型对照组Glu、FINS、HbA1c、BUN、Scr、CH、TG、Vol、Pro、RI降低，Cr升高，肾小球直径、面积、肾指数明显改善（P<0.05）。 结论 氯沙坦与前列腺E1联合应用较单独使用ACEI类药物药效更突出，对糖尿病肾病的临床治疗有重要的指导作用。

[关键词] 糖尿病肾病；联合用药；氯沙坦；前列腺素E1

[中图分类号] R587.2；R692 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2018）12-0035-04

Comparison of pharmacodynamic differences between losartan combined with prostaglandin E1 and ACEI drugs in diabetic nephropathy rats

CHEN Lu ZHANG Xinmiao LI Gengxiao YU Hang WANG Kuo TONG Lei

Mudanjiang Medical College， Mudanjiang 157011， China

[Abstract] Objective To establish a rat model of diabetic nephropathy and compare the pharmacodynamic differences between ACEIs and losartan combined with prostaglandin E1 in model rats. Methods Rats with diabetic nephropathy were induced by intravenous injection of streptozotocin combined with food and were divided into blank group， model group， captopril group， losartan group， prostaglandin E1 group and combination group according to their administration methods. After the model was successfully administered for 4 weeks， blood glucose（Glu）， HbA1c， FINS， BUN， Scr， blood cholesterol， blood triglyceride（TG）， urine volume（Vol）， urine creatinine（Cr）， urine protein（Pro）， kidney index（RI）， glomerular diameter and area were observed. Results Compared with those of the blank group， the Glu， HbA1c， BUN， Scr， CH， TG， Vol， Pro， FINS and RI in the model group increased significantly（P<0.01）， and Cr decreased significantly（P<0.01）. Compared with those of the model group， the Glu， FINS， HbA1c， BUN， Scr， CH， TG， Vol， Pro and RI decreased， and Cr increased in the administration groups， and glomerular diameter， area， and kidney index in the administration groups improved significantly（P<0.05）. Conclusion The combination of losartan and prostate E1 is more effective than ACEI alone， and the former play an important guidance role in the clinical treatment of diabetic nephropathy.

[Key words] Diabetic nephropathy； Combination medication； Losartan； Prostaglandin E1

糖尿病腎病（diabetic nephropathy，DN）是糖尿病导致微血管病变的典型表现之一，不良饮食习惯、控制血糖不良、血压血脂异常升高等因素会加剧肾脏损害，直至肾衰竭[1]。在现阶段临床上主要应用ACEI类药物治疗该疾病，在1981年卡托普利的应用得到批准后，药物发展迅速，在治疗DN上取得显著的疗效[2]。本实验选取典型代表药卡托普利进行实验，该药物可以改善微血管血流，扩张肾血管，达到治疗目的，已被广泛应用，但临床证实该类药物具有刺激性干咳的副作用，多数患者都无法承受。氯沙坦为AT1受体拮抗剂的代表药，与ACEI比较具有作用专一的特点。PGE1是人体内存在的一种生物活性物质，具备能够分布在受损血管的特性，改变其血液流变学，可以扩张血管，并且对血小板的聚集起到抑制。本实验运用药理学实验方法，观察联合用药与单独用药的药效差异，并揭示其对糖尿病肾病肾脏功能的改善作用。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物及试剂

健康SD大鼠72只，雌雄各半，体型匀称，雄性大鼠体重约（350±50）g，雌性大鼠体重约（230±40）g，约10周龄，购于长沙市天勤生物技术有限公司。饲养条件：由牡丹江医学院动物实验研究中心饲养，许可证编号为scxk（湘）2014-0010，实验方案经本单位实验动物伦理委员会批准，实验动物饲养及實验操作符合实验动物伦理学要求。实验颗粒鼠饲料由江苏省协同医药生物工程有限责任公司提供，苏饲证（2014）01008。高脂高糖饲料[3]选自北京博泰宏达生物技术有限公司；尿蛋白定量试剂盒由上海晶抗生物工程有限公司提供，批号JKSJ-1820；肌酐试剂盒由北京博迈斯科技有限公司提供，批号K625-100；葡萄糖液体试剂盒由北京普利莱基因技术有限公司提供，批号E1010；胆固醇试剂盒由上海市协和梅迪克斯医疗器械有限公司提供，批号58236；胰岛素试剂盒由上海晨易生物科技有限公司提供。

1.2 实验药物

卡托普利片（卡托普利）由浙江南洋药业有限公司提供；科素亚（氯沙坦）由美国默沙东制药厂提供；前列地尔（前列腺素）由杭州志聚生物技术有限公司提供，链脲佐菌素（STZ）Sigma S-1290。

1.3 实验设备

全自动生化仪采用广州东唐电子科技有限公司DOTOP型；紫外分光光度计采用上海元析有限公司UV759S型；离心机采用北京时代北利离心机有限公司DT5-2型。

1.4 动物分组及病理模型的建立

健康SD大鼠72只随机分为6组，每组12只，分别为空白组、模型对照组、卡托普利组、氯沙坦组、前列腺素E1组、氯沙坦联合前列腺素E1组。空白组采用正常颗粒饲料，动物饮用纯净水喂养，模型对照组以高脂高糖饲料配12%果糖水饲喂6周后，经尾静脉以60 mg/kg剂量注射STZ一次[4-7]，其他各给药组采取相同方法诱导。通过检测大鼠血糖变化、肾功能变化与肾组织病理学改变验证糖尿病肾病模型是否构建成功，未成功者退出模型组。

1.5 实验动物的给药及指标检测

空白组注射10 mL/kg的0.9%的NaCl qd，卡托普利组给予10 mg/（kg·d）的卡托普利 qd，氯沙坦组给予80 mg/（kg·d）qd，前列腺素E1组给予20 μg的前列地尔 qd，氯沙坦联合前列腺素E1组给予氯沙坦80 mg/（kg·d）加前列地尔20 μg qd，上午9时给药，连续静脉注射4周，实验结束前，收集24 h尿液进行称量，用离心机2200 r/min，离心10 min，去沉淀，在-20℃保存待测，之后称大鼠体重量。使用戊巴比妥钠对大鼠进行腹腔麻醉，取腹主动脉血[8]，离心取血清检测特征性生化指标。取左侧肾脏测其质量，随后剥离被膜，用17%的福尔马林液固定，常规制片后使用光镜测量肾小球的直径和面积并计算肾脏指数RI（RI=左肾质量/大鼠体质量×100）。

1.6 统计学分析

所得数据均录入SPSS19.0统计软件进行单因素方差分析，组间比较采用LSD法，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 氯沙坦联合前列腺素E1对糖尿病肾病大鼠Glu、HbA1c、FINS影响

六组血糖之间比较差异具有统计学意义（F=4.380，P<0.01），六组糖化血红蛋白之间比较差异具有统计学意义（F=12.195，P<0.01），六组血胰岛素之间比较差异具有统计学意义（F=5.682，P<0.01）。

糖尿病肾病模型对照组Glu、HbA1c、FINS值与空白组相比明显升高（P<0.01），氯沙坦联合前列腺素E1组与模型对照组Glu、HbA1c、FINS值相比明显降低（P<0.05或P<0.01），卡托普利组、氯沙坦组、前列腺素E1组Glu、HbA1c、FINS与模型对照组相比亦均有降低，差异有统计学意义（P<0.05或P<0.01），但对于Glu、HbA1c、FINS的降低氯沙坦联合前列腺素E1组与卡托普利组比较更为明显，其差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.2 氯沙坦联合前列腺素E1对糖尿病肾病大鼠肾功能的影响

六组之间血清尿素氮比较差异具有统计学意义（F=7.696，P<0.01），六组血清肌酐之间比较差异具有统计学意义（F=3.585，P<0.01），六组血清胆固醇之间比较差异具有统计学意义（F=14.850，P<0.01），六组甘油三酯之间比较差异具有统计学意义（F=15.516，P<0.01）。

糖尿病肾病模型对照组BUN、Scr、CH、TG与空白组相比明显升高（P<0.01），表明大鼠肾功能受损，各给药组血清中BUN含量相对于模型对照组降低，有统计学意义（P<0.01或P<0.05），各给药组血清中Scr、TG含量相对于模型对照组降低有统计学意义（P<0.01或P<0.05），而氯沙坦联合前列腺素E1组相对于卡托普利组对于Scr、CH的降低亦有统计学意义（P<0.05），除氯沙坦联合前列腺素E1组外其他各给药组血清中CH含量相对于模型对照组无统计学意义（P>0.05），提示通过联合给药相对于单独应用卡托普利对于降低血清中CH及Scr含量有明显效果。见表2。

2.3 氯沙坦联合前列腺素E1对糖尿病肾病大鼠肾脏滤过功能的影响

六组尿量之间比较差异具有统计学意义（F=20.826，P<0.01），六组尿肌酐之间比较差异具有统计学意义（F=11.428，P<0.01），六组尿蛋白之间比较差异具有统计学意义（F=5.461，P<0.01）。

糖尿病肾病模型对照组与空白组相比尿量（Vol）、尿蛋白（Pro）水平增加有统计学意义（P<0.01），尿肌酐（Cr）水平降低有统计学意义（P<0.01），表明肾滤过功能受损，肌酐清除功能下降。各给药组与模型对照组相比尿量的减少及尿肌酐含量的升高有统计学意义（P<0.01或P<0.05），各给药组尿蛋白含量相对于模型对照组降低有统计学意义（P<0.01或P<0.05）；其中氯沙坦联合前列腺素E1组相对于卡托普利组对于尿肌酐含量的升高有统计学意义（P<0.01），而氯沙坦联合前列腺素E1组相对于卡托普利组对于尿蛋白含量的降低有统计学意义（P<0.01），提示通过联合用药对于DN大鼠肾滤过功能指标的改善较单独应用卡托普利效果显著，见表3。

2.4 氯沙坦联合前列腺素E1对糖尿病肾病大鼠肾脏组织形态的影响

六组肾指数之间比较差异具有统计学意义（F=11.593，P<0.05），六组肾小球面积之间比较差异具有统计学意义（F=13.192，P<0.05），六组肾小球直径之间比较差异具有统计学意义（F=8.439，P<0.05）。

糖尿病肾病模型对照组与空白组相比，肾小球直径、肾小球面积及肾指数均有增大（P<0.01），可见肾脏出现改变，多数肾小球直径显著增大，并伴有基底膜增厚、系膜细胞增生等表现，各给药组与模型对照组相比，肾脏病变及指标均有一定改善，而氯沙坦联合前列腺素E1组较卡托普利组对肾脏形态各项指标改善作用较为显著（P<0.05）。见表4。

3 讨论

在本研究中，大鼠在实验前均经严格挑选，为健康大鼠，避免血压血脂等干扰因素对实验结果的影响。经造模后，对实验指标进行测定，结果显示尿素氮和血肌酐升高，尿蛋白滤过率明显升高，说明大鼠糖尿病肾病模型的构建是成功的，该模型可用于比较ACEI类药物与氯沙坦联合前列腺素E1的药效差异[9-13]。

对于糖尿病肾病的患者使用ACEI药物是国内外都比较常用的方法之一，但经临床用药的实践证明，ACEI存在起效慢、血管神经水肿、刺激性干咳、高血钾等一系列不可避免的副作用[14]。

氯沙坦对肾脏疾病具有很好的治疗效果，对血压有很好的降低作用，對蛋白尿的降低也具有显著的改善作用，前列地尔可以阻止血管收缩，改善并增加其病变的肾血液流量，进而改善肾小球的微环境，改善肾小球的滤过率，降低尿中排泄的蛋白含量[15，16]。

在本实验中，通过实验数据的分析和总结发现，氯沙坦与前列腺素E1二者联合应用对DN大鼠Glu、Scr、CH、Cr、Pro等多个指标改善作用优于单独应用卡托普利，此实验结果为氯沙坦联合前列腺素E1对于糖尿病肾病的临床治疗提供了一定的实验依据。

[参考文献]

[1] 马兴杰，杨丽霞. 糖尿病肾病蛋白尿形成机制[J].重庆医学，2011，40（20）：2064-2067.

[2] Breyer A，Hunsicker LG，Bain RP，et al. Angiotensim converting emgrme inhibitor in disbetienephrapathy[J].Kidney Int，1994，45（suppl）：S156.

[3] 郭啸华，刘志红，李恒，等.高糖高脂饮食诱导的2型糖尿病大鼠模型及其肾病特点[J].中国糖尿病杂志，2002，10（5）：290-294.

[4] 丁鹤林，徐明彤，陈黎红. 洛沙坦降低糖尿病大鼠肾组织膜3型基质金属蛋白酶mRNA的表达[J]. 中华内分泌杂志，2002，18（4）：264-267.

[5] 杨亦彬，张翥，苏克亮. 链脲佐菌素诱导大鼠糖尿病肾病模型方法学讨论[J]. 华西医学，2005，20（2）：299-300.

[6] 李伟，张红，股松楼. 不同剂量链脲佐菌素诱导SD大鼠糖尿病肾病模型的研究[J].徐州医学院学报，2006， 26（1）：52-55.

[7] Wang Y，Li Q，Sun SZ，et al.Effect of benazcpril on renal function and kidney espression of matrix metalloproteinasc 2 and tissue inhibitor of metalloproteinasc 2 in diabetic rats[J]. ChinMed J，2006，119（10）：814-821.

[8] 宋清斌，车兆义，邹悦.实验大鼠采血方法的选择[J].中国组织工程研究与临床康复，2008，12（50）：9990-9991.

[9] 梁琳琅，刘国良. 糖尿病性蛋白尿电荷选择性研究[J].中国内分泌代谢杂志，1996，12（3）：138-139.

[10] 陆娅梅. 尿微量蛋白测定对2型糖尿病的临床价值探讨[J].当代医学，2010，16（1）：73.

[11] 刘健，王琴，车霞静，等.2型糖尿病患者非糖尿病肾脏疾病的患病率分析[J].中华内分泌代谢杂志，2010，26（6）：460-464.

[12] 陈宇，周永华，韩晓骏，等.2型糖尿病患者血清胆红素水平与糖尿病肾病关系的研究[J].临床荟萃，2011，26（4）：292-295.

[13] Junod A，Lambert AE，Orci L，et al.Studies on diabetogenic action of streptozotocin[J].Proc Soc Exp Biol Med，1967，126（1）：201-205.

[14] 周进. ACEI治疗糖尿病肾病的研究进展[J]. 深圳中西医结合杂志，2014，24（10）：179-180.

[15] 邓思平，梁一江，黄汉光. 缬沙坦和前列地尔联合治疗糖尿病肾病的疗效观察[J].国际医药卫生导报，2011， 17（7）：22-25.

[16] 张国艳，张浩，牛效清. 前列地尔联合贝那普利治疗糖尿病肾病蛋白尿的疗效[J]. 当代医学，2012，18（4）：145-146.

（收稿日期：2017-12-19）