浅谈食品检测中高效液相色谱法的应用

白琴

摘要：食品安全关乎人民生命安全，为了提升食品检测的水平，就要有效、合理地应用高效液相色谱法。此种方式是通过分离分子量大以及沸点高的化合物进行检测。本文主要对食品检测中高效液相色谱法的应用进行了论述分析。

关键词：食品检测;高效液相色谱法;防腐剂

通过高效液相色谱法进行食品检测是一种有效的技术手段。高效液相色谱法分为流动相以及固定相两种，在一般状况之下液体是流动相，多数的检测样品均为液体状态。在食品中应用的防腐剂主要有苯甲酸、山梨酸、丙酸钙、脱氢乙酸等，通过高效液相色谱的方式可以了解这些防腐剂的具体应用数量以及范围是否符合国家标准要求。

一、高效液相色谱法概述分析

高效液相色谱检测方式法也称为“高压液相色谱”、“高速液相色谱”以及“高分离度液相色谱”等。随着科技技术的不断发展，快速检测食品领域快速发展，高效液相色谱法更是得到充分利用。高效液相色谱法的基础就是液相柱层析，后来在优化创新中逐渐完善。相对于液相柱层析方式来说，高效液相色谱方式主要把颗粒直径在5m-10m的高效层析柱作为主要的填充剂，在高压输液泵以及自动进样器等仪器设备的配合下应用，此种技术手段在实践中可以对多种试样进行检测分析，可以在根本上保持液相色谱的应用广泛性，深受各个行业的认可。

二、材料与方法

仪器设备。安捷伦高效液相色谱仪、自动凝胶净化仪、旋转蒸发仪、涡旋振荡器、离心机等设备。

试剂与材料。主要有苯甲酸（ben-zoic acid，BA） 、山梨酸（sorbic acid，SA）、对羟基苯甲酸甲酯（methy1paraben，MP）、脱氢乙酸（DHA）、β-苯丙烯醛、对羟基苯甲酸异丙酯（尼泊金异丙酯，Isopropy1 paraben）、对羟基苯甲酸丙酯（尼泊金丙酯）、4-羟基苯甲酸异丁酯（IBP）、苄基4-羟基苯甲酸酯（BPB）、苯基苯（biphen-yl）、对羟基苯甲酸庚酯（Heptyl Paraben，HP）、对羟基苯甲酸乙酯（ethyl paraben，EP）等。

其中乙酸试剂、C₂H₃N试剂、C₆H₁₄试剂、甲醇试剂均为色谱纯;水为Milli- Q超纯水;而NaCl、H₃PO₄等均为分析纯。

标准液配制主要就是应用0.05000g防腐剂标准品，再将乙醇定容到50mL，就会获得1000mg/L单标储备液，将标准液配置在0℃-4℃的温度中存储，重视避光处理。要基于防腐剂的具体响应状态，合理地进行配置，科学配制不同分析物浓度不等的混标。

饱和NaCl（pH=2）：称取400.0gNaCl放置在一升的烧杯中，再加入一升的水;超声20分钟，然后再将上清液放置在另一个一升的烧杯之中，利用磷酸调整酸碱度为2。

样品前处理。对于液态样品直接混合，对于非均匀的液态一半固态的样品通过组织均浆机将样品处理之后打碎，充分搅拌，保证混合的均匀性。对于一些奶酪等通过50℃60℃的温度加热熔融，搅拌。然后提取1.00g的样品进行处理，将提取的样品放置在50mL的离心管中，再添加5mL的饱和NaCl溶液，其PH为2。在上述操作完成之后，再进行涡旋振荡1min。完成之后，把样品放在饱和NaCl水溶液中，观察样品，在样品充分分散的状态之下，再添加10mL的C₆H₁₄以及C₂H₃N，将其振荡15min。再通过1000r/min离心5min，将C₂H₃N层放置在10mL的离心管之中，将7mL的C₆H₁₄放在两一个10mL的离心管之中，通过氮气将C₆H₁₄吹干处理。然后，将7mL的环己烷一乙酸乙酯根据1：1v/v的比例进行处理，待充分溶解之后再进行GPC，对其进行净化处理，然后在1625min内收集流出物，在26-30min冲洗凝胶渗透色谱柱，将温度在35℃状态之下的液体进行旋转蒸发处理，待液体到快干的状态之下，再通过5mL的C₂H₃N提取液对其进行溶液处理，待其充分溶解之后，利用0.22m滤膜对其处理控制，通过液相色谱对其进行分析^[1]。

超高效液相色谱条件。色谱柱：为Waters ACQUITY UPLCTMBEH C18柱（150mm×2.lmm，1.7 μm）。柱温：为30'C，保证样品室的温度为4℃。在进样中其体积为10μL。流动相A就是2mmol的乙酸铵水溶液，在实验中通过乙酸进行处理，酸碱度为4.0。流动相B为C₂H₃N，其具体的流速为0.2mL/min。

在试验中，通过采用梯度的洗脱方式进行处理，在0min-2 min的区间内为20%B;而在2min-5min的区间中为20%B-40%B;在5min-10min的区间内为40% B;在10min-12min的区间中为40%B-60%B;在12min-14min的区间内为60%B;在14min-20min的区间内为60%B-85%B;在20min-22min的区间内为85%B;在20min-22.5min的区间内为85%B-20%B;在22.5min-25min的区间内为20%B。通过检测获得其波长为280nm。

三、实验结果分析

优化萃取溶剂。在试验中发现多数的分析物在乙醇溶剂、C₂H₃N溶剂以及乙醚溶剂溶解性良好，其中苯甲酸以及山梨酸溶液具有微溶于水的特征。其中含有长链烃的苯基苯以及β-苯丙烯醛等物質则在弱极性溶剂中溶解。在研究中为了去除水溶性以及油溶性的杂质再进行对比分析，通过对比分析可以发现，在对C₆H₁₄—C₂H₃N液分配提取的过程中，出现了两相间的分配状况。而通过5mg/L的混合标准溶液配置，通过用酸碱度为2的5mL的饱和NaC₁溶液、SmLC₂H₃N，5mL C₆H₁₄、5mLC₂H₃N涡旋震荡10min之后，再进行化合物含量测定分析，通过C₂H₃N-饱和NaCl溶液分配处理，产生的化合物在C₂H₃N相上分配，而C₂H₃N-C₆H₁₄溶液在分配的过程中，仅仅β-苯丙烯醛、苯基苯及对羟基苯甲酸庚酯的1/3数量在C₆H₁₄相中分配，而剩下化合物主要分配在C₂H₃N相上。

对此，在研究中通过饱和NaCl-C₂H₃N -C₆H₁₄三相液进行分配萃取，在除β-苯丙烯醛以及苯基苯、对羟基苯甲酸庚酯之外其他的化合物是可以将其萃取到C2H3N层之中的，而水溶性杂质多数都保存在饱和NaCl层中，而C₆H₁₄层中主要是通过凝胶渗透色谱的方式凈化存在的油溶性杂质，再对C₆H₁₄层以及C₂H₃N层中存在的分析物进行合并处理。

防腐剂的凝胶渗透色谱净化。在萃取处理中，C₆H₁₄溶液进行液液萃取的过程中，萃取率相对较低。要想提升其整体的回收率，可以通过凝胶渗透色谱净化的方式对C₆H₁₄提取液进行处理，这样可以去除大分子的干扰物。

方法的线性实验以及定量限。通过配制混合标准溶液处理，其具体的防腐剂质量浓度数值为0.04mg/L-80.0mg/L。基于目标组分的峰面积Y以及对应的质量浓度绘制标准曲线，相关系数（r）要高于0.99，这些防腐剂的分离状态良好^[2]。

方法的准确度和精密度。对食品进行回收实验分析，分别在线性范围低、中以及高三种不同的添加水平中进行实验分析。在每个添加水平中要对其进行测定分析，获得目标分析物的回收率为63.4% - 99.5%，而其相对标准偏差（RSD）数值的范围则在0.49% - 16.3%。

四、讨论分析

在测定过程中，试剂的温度、色谱柱的温度以及室温状态下的保留时间均在不同程度上影响液相色谱的效果，在处理过程中，要保持室温的温度性，加强对试剂温度的控制，这样才可以提升实验精准性。通过保温项，设定稳定合理的柱温，保障温度的恒定性，可以避免柱温波动导致保留时间变动，无法对其进行精准定性。

在测定过程中流动相是直接影响因素，在实践中要对其进行每天配置，如果无法每天配置要通过冷柜进行存储，加强对酸碱度的控制，保障平稳性。而在流动相中要保障有机溶剂以及缓冲盐的比例，进而提升精准度。

参考文献：

[1]杨献珍.浅谈食品检测中高效液相色谱法的应用[J].食品安全导刊，2018（18）：83.

[2]卢潇鲲.探讨高效液相色谱法在食品检测中的应用[J].食品安全导刊，2016（03）：86.