HPLC法测定头孢氨苄胶囊含量的测量不确定度评定

孙立乾

【摘要】目的：对HPLC法测定头孢氨苄胶囊含量的测量不确定度进行分析和评定。方法：取适量头孢氨苄制成溶液，将其作为本次研究对照品；与此同时，取适量头孢氨苄胶囊（巢湖中辰药业有限公司，国药准字：H34021123）制成溶液，将其作为本次研究观察品。样本制备完成后，建立HPLC法测定数学模型，根据数学模型寻找影响不确定度的因素并对相关不确定度分量进行评定。结果：通过对各分量的相对标准不确定度进行分析后可以得出，HPLC法测定头孢氨苄胶囊含量的合成不确定度以及扩展不确定度（P=95%，K=2）。结论：本次研究所建立的不确定度计算方法在测定HPLC法判断头孢氨苄胶囊含量的不确定度的效果方面有较高使用价值，值得推广。

【关键词】HPLC法；头孢氨苄胶囊；不确定度；评定

[中图分类号]R1 [文献标识码]A [文章编号]2096-5249（2018）02-131-02

头孢氨苄胶囊属于抗生素复方制剂的一种，常被临床用于耐青霉素的葡萄球菌、链球菌等感染的治疗[1]。在对头孢氨节胶囊的质量和临床治疗效果进行评价时，对其含量的测定是前提和关键，大量研究叼证实，头孢氨苄胶囊含量测定准确性的高低，不仅将直接影响到药品质量的评定，同时还将直接关系到患者用药安全性的高低。基于此，本文以相关文献为参考，对HPLC法测定头孢氨苄胶囊含量过程中的相关不确定因素进行了分析和合成，以评定其含量的不确定度。现报告如下。

1 方法

制备对照品溶液：将适量（24-25mg）的头孢氨苄（中国药品生物制品检定所提供，批号：1300408-200209，纯度：94.2%）放置在容量为25mL的量瓶中，静置片刻后，将适量流动相（水-3.86%醋酸钠溶液一甲醇一4%醋酸溶液，比例分别为742：15：240：3）加入量瓶之中，然后对量瓶内液体进行超声处理，时长控制在5-8min之间，至液体溶解且全部混合均匀即可；将溶解完成的量瓶于室温内放置保存，与此同时，在其中加入适量流动相至液体稀释至刻度，摇匀；从量瓶中精密量取10mL溶液至容量为50mL的量瓶之中，继续加入适量流动相稀释至刻度，摇匀，制备完成。

制备观察品溶液：取20粒头孢氨苄胶囊（巢湖中辰药业有限公司，国药准字：H34021123，规格：0.125g），将胶囊研磨成细粉，精密称取适量（110-125mg）置入容量为100mL的量瓶中，在其中加入适量流动相并对其进行超声处理，处理时长控制在5-8min之间，至量瓶内物质全部溶解即可；将溶解完成的量瓶于室温内保存，放置片刻后，再在其中加入适量流动相，将量瓶内液体稀释至刻度，摇匀，滤过；与量瓶内精密量取10mL液体并将其放于50mL的量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，制备完成。

样品制备完成后，对其进行测定，选择LC-10Atvp型高效液相色谱仪（日本岛津）、AB135-S电子天平、SPD-10Atvp型紫外检测器；试剂方面，除甲醇为色谱纯以外，其他试剂均为分析纯；此外，检测流速为：1.0ml/min，检测波长为254nm，进样量为20ml。

精密吸取20ml对照品溶液和20ml观察组品溶液，将其分别注入液相色谱仪之中，然后按照相关操作说明进行测定。然后按照以下公式对观察品和对照品的头孢氨苄含量进行测

式中：Y=测得的氨苄胶囊标示百百分含量；A样=供试品峰面积，A对=对照品峰面积，w对=对照品重量（mg）；W样：观察品重量（mg）；W样：观察品平均装量（mg）；f对：对照品稀释倍数（ML）；f样=观察品稀释倍数（mL）；标示量=0.125g。

2 结果

2.1 不确定度分析

首先，称量的相对标准不确定度。天平称量重复性不确定度，本次研究所用电子天平（d=0.01mg）的鉴定证书所允许的重复性误差为±0.02mg，按矩形分布，可用以下公式进行表示，即：

W=0.02/√3=0.08±10-2mg

其次，在纯度的标准不确定度方面，本次研究的对照组品属于B类不确定度，其纯度为94.2%由于现阶段尚无其他的关于样品不确定度的说明，因此假定其分散区间的半宽度0.25%，按均匀分布换算，设定u（s）=0.25%/√3=0.14%，此时，样品的相对标准不确定度为：

最后，在稀释引起的相对标准不确定度方面，在对对照品和观察品进行配置的过程之中，使用到了2个10mL级别为A级的单标移液管以及2个25mL级别为A级的量瓶和2个50mL级别为A级的量瓶。通过计算，有上述装备和配置引起的相对标准不确定度，可用以下公式进行表示：

2.2 各相对标准不确定度分布情况

通过对各相对标准不确定度的分布情况进行统计后，可以得到下图（图1）。

3 讨论

头孢氮节胶囊属于抗生素类复方制剂的一种，相关资料中，在对头孢氨苄胶囊进行含量测定时，其设置的检测波长为235nm，选择的流动相为0.02mol·L-1磷酸溶液（用20%氢氧化钠调节pH值至3.0±0.05）-乙腈（88：12）。但近年来，随着临床研究的不断深入，越来越多的实践结果显示，该测定方法在测试头孢氨苄胶囊头孢氨苄含量时存在较多问题，在液相色谱仪记录的色谱图中，头孢氨苄与甲氧苄啶两种成份的峰形较差，最终检测结果的重复性和准确性与实际情况有着较大出入[4-5]。

鉴于此，本文对HPLC法测定头孢氨苄胶囊含量的测量不确定度采用了全新公式进行评定，研究数据显示，头孢氨苄胶囊含量测定的扩展不确定度为1.8%，研究结果证实了该公式测定HPLC法测定头孢氨苄胶囊含量的测量不确定度的有效性，其结果的分散程度符合HPLC法对准确度的要求，有着较高的准确性与可靠性。此外，笔者认为为进一步提升HPLC法测量头孢氨苄胶囊含量的精准度，在使用外标法时，可酌情增加测定次数并选择定容体积较大的样品、适当增加对照品取样量，以有效减小各步骤的不确定度分量，提高测定结果的准确性和可信度。

参考文献：

[1]王伟.W2[-6-氧-（3-脱氧柠檬酸单醋-4）]-β-环糊精HPLC手性流动相添加剂法拆分头孢类杭生素[D].中南民族大学，2013.

[2]陶辉，李文君，陈卫等.SPE-HPLC法测定水中4种头孢类杭生素[C].//饮用水安全控制技术会议暨中国土木工程学会水工业分会给水委员会第13届年会论文集2013：502-509.

[3]陈庆辉.高效液相色谱法快速测定头孢氨苄片的含量[J].海峡药学，2014，（8）：59-62.

[4]王立东，聂彦彦.头孢氨苄甲氧节苄颗粒含量测定方法研究[J].中国科技投资，2017，（28）：345.

[5]贾萌萌，李杰，何曉梦等.液相-质谱联用法同时测定人血浆中阿莫西林及克拉维酸钾的浓度[J].中国医院药学杂志，2014，34（9）：715-719.