汪筱雪 韦继光 杨振德 罗辑 吴耀军 杨秀好 罗基同 谢代祖
摘要:【目的】明确广西西北部核桃真菌性病害种类,并筛选可有效防治核桃炭疽病的药剂,为核桃病害防治提供科学依据。【方法】在广西西北部的河池市金城江区、环江县、凤山县和百色市乐业县等核桃种植区,于核桃病害发生期开展真菌性病害种类和危害程度调查,计算其发病率及病情指数。测定43%戊唑醇、45%咪鲜胺、25%嘧菌酯、25%吡唑醚菌酯和40%苯醚甲环唑等5种杀菌剂对核桃炭疽病菌的室内毒力,计算抑制中浓度(EC50);选取效果较优的3种杀菌剂进行核桃炭疽病田间防治试验,测定不同杀菌剂的防治效果。【结果】调查区核桃真菌性病害主要有核桃根腐病、核桃枝枯病、核桃茎点霉黑斑病和核桃炭疽病4种,病原菌分别为腐皮镰刀菌(Fusarium solani)、胡桃楸拟茎点霉(Phomopsis juglandina)、茎点霉属(Phoma sp.)真菌和胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides),其中以核桃炭疽病发病最严重。杀菌剂室内毒力测定结果显示,5种杀菌剂对核桃炭疽病菌的抑菌效果为:25%吡唑醚菌酯>45%咪鲜胺>40%苯醚甲环唑>25%嘧菌酯>43%戊唑醇;田间防治试验结果显示,25%吡唑醚菌酯、45%咪鲜胺和40%苯醚甲环唑对核桃炭疽病的田间防治效果分别为82.23%、80.26%和75.98%。【结论】核桃炭疽病是目前广西西北部核桃的主要真菌性病害。25%吡唑醚菌酯可作为防治核桃炭疽病的药剂使用,同时建议在地势较高、排水良好且通风状况好的地点种植核桃,以防止病害发生。
关键词: 核桃;真菌病害;炭疽病;杀菌剂;防治效果;广西西北部
中图分类号: S432.4 文献标志码:A 文章编号:2095-1191(2018)08-1531-10
0 引言
【研究意义】核桃(Juglans regia)又称胡桃,是胡桃科核桃属多年生落叶乔木(孙俊等,2012),被誉为世界四大干果之一,具有非常高的营养价值和经济价值。核桃在我国栽培历史悠久,因其适应范围广、抗逆性强,且核桃果实产量可观,因此成为我国第一大干果树种,同时是我国极受欢迎的药用植物和经济树种(王红霞等,2007;高智辉等,2009;杜慧平等,2017)。广西核桃主要在凤山、乐业和凌云县等西北部地区栽培,这些地方环境较恶劣,多石山,土壤贫瘠,是广西典型的石漠化地区,许多作物无法栽培存活。20世纪90年代核桃产业被引进广西,主要用于增加农民收入及治理石漠化环境问题。目前广西种植的核桃品种有凤优1号、凤优2号、云新核桃、云南漾濞大泡核桃、美国山核桃和山东辽河1号等,但随着核桃种植面积的扩大,核桃病害的发生也日益严重,病害严重的甚至导致核桃树整株死亡或核桃苗圃整片死亡,已严重影响了核桃产量,因此,对核桃病害进行深入调查及防治方法研究迫在眉睫。【前人研究进展】Pollegioni等(2012)报道核桃褐斑病的病原菌为核桃日规壳,其无性世代为核桃盘二孢。王安民等(2013)报道核桃溃疡病病原菌为腔孢纲球壳孢目的群生小穴壳菌。Zheng等(2015)报道核桃根腐病的病原菌为腐皮镰刀菌。国内早期报道核桃枝枯病的病原菌多为矩圆黑盘孢菌所致的枝枯病(胡国良等,1992;李会钦,2012;张力元,2017),而戚佩坤等(2007)、孙俊(2013)、李星月等(2017)报道其病原菌为拟茎点霉,尹万瑞和朱天辉(2016)报道其病原菌为新壳梭孢。刘晓云等(1995)在陕西留坝、杨凌等地的核桃上曾分离得到尖孢炭疽菌;何兴文等(2003)、曲文文等(2011)、黄雄等(2016)、王清海等(2016)鉴定的核桃炭疽病病原菌也为胶孢炭疽菌;Zhu等(2015)分离鉴定得到广西核桃炭疽病病原菌为松针炭疽菌(Colletotrichum fioriniae)。在核桃炭疽病防治方面,肖育贵等(2010)的研究结果表明,世高和晴菌唑对核桃炭疽病病原菌生长的抑制作用较好,林间防治效果可达85%以上。刘霞等(2013)研究表明,28 ℃时咪鲜胺、戊唑醇和三唑酮对核桃炭疽病病原菌胶孢炭疽菌菌丝毒力最强,而异菌脲、代森锰锌和咪鲜胺对其孢子的毒力最强。王凡等(2015)测定了9种杀菌剂对核桃炭疽病菌的抑制作用,结果表明以40%咪鲜胺水乳剂对胶孢炭疽菌的抑菌作用最强。黄雄等(2016)的室内防治试验结果表明,25%咪鲜胺500倍液、50%福美双500倍液、70%甲基硫菌灵500倍液和100%链霉素3000倍液对核桃炭疽菌的防治效果最佳。【本研究切入点】广西核桃产业发展迅速,已成为桂西北部分农民的重要经济收入来源,为广西农民收入增长及环境治理提供了强有效的支持。但目前已报道的文献多为核桃种植或栽培等方面的研究(蒋桂雄等,2010;张武贵等,2012;曾纪维,2014),对核桃病害方面的研究报道较少,缺乏针对广西西北部核桃病虫害调查及防治等方面的研究。【拟解决的关键问题】为明确广西西北部核桃真菌性病害的发生情况,在广西河池市的凤山县、环江县、金城江区和百色市乐业县等核桃种植区开展核桃真菌性病害种类调查,对其病原菌进行形态学及分子生物学鉴定,并进行核桃炭疽病防治药剂室内筛选及田间防治试验,筛选出可有效防治核桃炭疽病的药剂,为核桃病害防治提供科学依据。
1 材料与方法
1. 1 调查地点
于2015~2017年进行核桃真菌性病害种类调查,调查地点主要集中在广西西北部的河池市金城江区、环江县、凤山县和百色市乐业县,调研多个核桃示范基地,分别是河池市凤山县金牙乡示范基地、环江县水源镇核桃示范基地、金城江区侧岭乡良种繁育基地、金城江区水任收费站核桃示范基地、金城江区大山塘示范基地、金城江区齐美村才贵屯核桃示范基地、金城江區三才村内文屯核桃种植地及乐业县央林大槽等苗圃。
1. 2 试验材料
此次调查的核桃品种主要有凤优1号、凤优2号、云新核桃、云南漾濞大泡核桃、美国山核桃、山东辽河1号和香玲核桃等。采集感病植株的叶片、枝条和果实,带回实验室作进一步试验。
主要仪器设备:电热恒温鼓风干燥箱(DHZT-9240A型,太仓精宏仪器设备有限公司),全自动立式电热压力蒸汽灭菌锅(YXQ-LS-SⅡ型,上海博讯实业有限公司),光照培养箱(LRH-400-G型,韶关市泰宏医疗器械有限公司),生物光学显微镜(OLYMPUS CX21,日本东京奥林巴斯公司),PCR仪[天根生化科技(北京)有限公司],电泳槽(DYCZ-24A型,北京六一仪器厂),凝胶成像系统(购自Bio-Rad公司),DNA提取试剂盒[新型植物基因组DNA提取试剂盒(NuClean PlantGen DNA Kit),康为世纪生物科技有限公司]。
1. 3 病害田间调查方法
选择天气回暖、高温、高湿时节,即核桃病害发病高峰期开展核桃苗圃真菌性病害调查及采样工作。采用線路踏查法进行核桃病害种类调查,具体方法:调查人员在同一树种苗圃间行走观察植株,记载病害发生的种类、严重程度,采集带有典型症状的样本,归类存放,带回实验室后进行分离鉴定。病害发生严重程度调查根据同一树种苗圃田块形状选择调查方法及采样,当田块较大、较规则时,可采用五点取样法,每个点为边长约2 m的正方形;当田块为长条形时,可采用三点法,即两头选两个点、中间选择一个点;对于不规则的林场,可采取随机抽样调查采样。病害严重度分级标准(表1)参照方中达(1998)的方法。
1. 4 病原菌分离及鉴定
1. 4. 1 病原菌分离纯化 选取新鲜的带有典型病斑的核桃叶片或根茎,用解剖刀取病健交界处5 mm×5 mm大小的组织块,先用75%酒精浸润10 s,再用0.1%升汞溶液消毒30 s,最后用灭菌水冲洗3次,待组织块晾干后,将其转入PDA培养基中,置于25 ℃的培养箱中培养,待组织上长出的菌落产孢后进行单孢稀释纯化。
1. 4. 2 病原菌致病性测定 病原菌致病性测定的寄主植物为云南漾濞大泡核桃。将已纯化的病原菌用5 mm打孔器打取大小一致的菌丝块,分别同时进行野外植株接种和室内离体接种。设针刺法和无伤口接种两种处理,以空白琼脂块处理为空白对照。每处理均设3次重复。室内离体接种各处理使用有机玻璃罩罩住后置于温室内保湿,野外植株接种后使用无菌保鲜袋套袋进行保湿,此后每天观察并记录发病情况,待出现症状后,根据柯赫氏法则对发病部位进行病原再分离,若仍能得到相同的菌,即确定其为病原菌。
1. 4. 3 病原菌形态学鉴定及rDNA-ITS序列测定
病原菌形态学鉴定:将纯化后的病原菌菌种在适宜的温度条件下进行活化培养并逐日观察记录病原菌的培养性状,如菌落大小、颜色、形状等。采用插片法在光学显微镜下观测病原菌的菌丝、产孢梗和孢子等的大小及形态特征。观察病原菌孢子等的形态结构时,使用奥林巴斯CX21型生物光学显微镜,先于10倍物镜视野下观察,后使用40倍物镜观察其孢子等的具体形态特征;形态学鉴定方法参照相关文献(魏景超,1982;周茂繁,1989;许志刚,2002)。
病原菌rDNA-ITS序列测定:将纯化后的病原菌接种至PDA培养基上,待其生长6~8 d后刮取菌丝提取DNA。将所提DNA进行PCR扩增,扩增引物为ITS4:5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3';ITS1:5'- TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3'(周颖,2016)。PCR反应体系25.0 μL,其中包括2×Taq MasterMix 12.5 μL,上、下游引物各1.0 μL,DNA模板3.0 μL,RNase-Free Water补足至25.0 μL。扩增程序:94 ℃预变性5 min;94 ℃ 30 s,55 ℃ 30 s,72 ℃ 30 s,进行30个循环;72 ℃延伸7 min。扩增产物用琼脂糖凝胶电泳,将成像条带清晰明亮的PCR产物委托生工生物工程(上海)股份有限公司和康为世纪生物科技有限公司纯化回收后测序。对测定的结果,采用www.ncbi.nlm.nih.gov网站中的BLAST比对程序进行比对分析,查找同源性最高的病原菌序列。根据病原菌分子序列对比结果,使用MEGA 7.0、DNAMAN及BioEdit v7.0.5进行分析,明确其分类地位。
1. 5 防治药剂筛选试验
1. 5. 1 供试药剂 供试剂信息见表2。
1. 5. 2 室内药剂筛选试验 以43%戊唑醇、45%咪鲜胺、25%嘧菌酯、25%吡唑醚菌酯和40%苯醚甲环唑为供试药剂,以在PDA培养基上经分离纯化的病原菌为供试材料。将供试药剂按计算好的量加入PDA培养基,配置不同浓度药剂培养基,向每个培养皿内倒入10 mL培养基,以不加药剂的PDA培养基为对照,各处理重复3次。将斜面保存的菌种于无菌的PDA培养基中进行活化培养,培养6 d后于菌落边缘处用5 mm打孔器打取大小一致的菌丝块,将菌丝块接种至已凝固的药剂培养基及空白对照培养基正中央,封口膜封口,于25 ℃恒温条件下培养,每3 d测量一次菌落直径,直至空白对照组菌落占培养皿的80%。用垂直十字交叉法测量所得各处理的菌落直径,计算菌落生长抑制率,并求出毒力回归方程、相关系数和抑制中浓度(EC50)。
1. 5. 3 田间防治试验 在金城江区齐美村才贵屯核桃示范基地进行田间防治试验。选择2~3年生核桃苗为施药对象,药剂选择45%咪鲜胺1000倍、25%吡唑醚菌酯1000倍和40%苯醚甲环唑1000倍液,以清水处理为对照(CK)。因试验地为坡地,核桃种植不规则,因此采取小区随机设计,每一片集中地区随机设4个小区,每小区对应一种药剂及清水对照,确保同一片集中地区内每种处理核桃株数一致,每处理4次重复。每隔15 d喷药1次,共喷3次,最后一次施药后15 d调查其发病率及病情指数。
1. 6 统计分析
采用Excel 2010对试验数据进行整理,使用SPSS 21.0进行数据统计分析。
2 结果与分析
2. 1 核桃真菌性病害种类调查结果
2. 1. 1 核桃根腐病 危害核桃植株根部,根部腐烂导致病株叶片出现退绿、黄化和萎蔫等症状,严重时导致整株死亡,淹水后容易发病(图1)。此病只在金城江区三才村内文屯种植地、金城江区大山塘示范基地(山地种植)、凤山县金牙乡示范基地和乐业县央林大槽发生,多数只有1~2株发病。除金城江区三才村内文屯种植地外,其他调查点核桃根腐病发病率均低于5.00%以下;金城江区三才村内文屯种植地核桃根腐病发病率高达53.85%,因该地地处山内盆地,地势较低,接连阴雨造成大面积淹水,导致根腐病发生严重。
分离得到一株优势菌株HTGF-1,分离率为64%。将该菌进行纯培养后,取5 mm菌丝块接种于健康的核桃根系,利用柯赫氏法则确定HTGF-1菌株为核桃根腐病病原菌。
病原菌在PDA培养基上培养,初期为白色絮状菌丝,后期菌落背面产生黑色色素。其病原菌有两种形态的分生孢子,小型分生孢子呈卵形,无隔或只有1个分隔,大小为10.05±2.50 μm×7.6±0.50 μm;大型分生孢子呈镰刀形,有1~3个隔,两端钝圆,大小为43.35±6.30 μm×5.4±0.20 μm(图2)。根据其分生孢子的镰刀状初步判定为镰刀菌属真菌,经rDNA-ITS序列测定后,与GenBank中的Fusarium solani (KJ528277.1)同源性达99%,进而确定核桃根腐病病原菌为腐皮镰刀菌(F. solani)。
2. 1. 2 核桃枝枯病 主要危害小枝,尤以1~2年生枝条为主,开始时病原菌多从顶梢幼嫩的断枝进行侵染,随后逐渐向下侵染直至主干。侵染初期时枝条呈暗灰褐色,稍凹陷,病健交界处的健康组织常稍隆起,后逐渐变为浅红褐色,最后变为深灰色。病部皮层坏死、干缩,很快扩展绕枝条一周,造成枝枯,其上叶片逐渐变黄脱落。病死枯枝上散生很多黑色小颗粒,直径0.2~0.3 mm,为其病原菌的分生孢子器,湿度大时,分生孢子器上会重新分泌出分生孢子堆(图3)。调查结果显示,核桃枝枯病病害级数1~4级不等,发病严重的全株80.00%感染致使植株死亡。在金城江区三才村内文屯、金城江区大山塘示范基地、环江县水源镇核桃示范基地、乐业县央林大槽等地发病率为25.00%~40.00%,其中乐业县央林大槽发病率最高,为37.50%。
将感病组织带回实验室后对发病部位进行切片观察,发现病原菌分生孢子器扁球形,单腔,保湿培养一段时间后会从其上溢出分生孢子。取感病部位进行分离,得到一株优势菌株ZK6-4。将ZK6-4菌株接种于健康枝条后感病,并从感病部位分离得到该菌株,确定其为核桃枝枯病病原菌。
病原菌在PDA培养基上培养,菌丝初为白色,后期颜色逐渐加深变为浅褐色絮状菌落,分生孢子器为黑色埋生在基质中。病原菌的分生孢子有两种不同形态,α型分生孢子无色,单孢,长椭圆形或近纺锤形,两端钝圆,大小为9.05±3.50 μm×3.2±0.10 μm;β型分生孢子无色,单孢,线性,直或一端稍弯,大小为32.30±8.40 μm×1.0 μm(图4)。经rDNA-ITS序列测定,并进行同源性比对,发现ZK6-4菌株与Phomopsis juglandina(KU837233.1)菌株同源性最高,达100%,因此鉴定核桃枝枯病病原菌为胡桃楸拟茎点霉(P. juglandina)。
2. 1. 3 核桃莖点霉黑斑病 主要危害叶片、茎和果实。在叶片上形成褐色至黑色圆形或不规则病斑,严重时连接成片,导致病叶萎缩畸形;在茎上形成长条形黑褐色病斑,稍凹陷,蔓延后会围绕枝条一圈致其枯死;在果实表面出现黑色小病斑,后逐渐扩大并呈不规则的下陷斑,最终导致果实坏死脱落(图5)。在凤山和乐业等有果实地区发病率为40.00%,金城江区大山塘示范基地、金城江区水任收费站核桃示范基地、金城江区侧岭乡良种繁育基地和环江县水源镇核桃示范基地等发病率为10.00%~15.00%,核桃果实感染核桃茎点霉黑斑病后80.00%以上的果实腐烂死亡,但只为害青皮部分,核桃枝干及叶片感染核桃茎点霉黑斑病的死亡率只有23.00%。
采集感病果实及枝条带回实验室进行分离,获得2株优势菌株HT3-1和HT4-2,分离率分别为23.3%和19.7%。将所得菌株纯化后取5 mm菌丝块接种至健康核桃果实上,根据柯赫氏法则判定2株菌株均为该病的病原菌。
病原菌在PDA培养基上初为白色,后菌落中央渐呈褐色至黑色。分生孢子器散生或聚生,梨形,有一个乳突状孔口;分生孢子无色,单孢,为圆筒形或近圆筒形,大小为6.25±1.20 μm×2.34±0.10 μm(图6)。经rDNA-ITS序列测定,与GenBank中的茎点霉属(Phoma sp.)多个种如Phoma sp.(FJ827141)、P. herbarum(N903924)、P. bellidis(JF502444)和P. glomera-ta(FJ481024)等的同源性均在95%以上,因此鉴定HT3-1和HT4-2菌株为茎点霉属(Phoma sp.)真菌。
2. 1. 4 核桃炭疽病 是广西西北部最主要的核桃真菌病害,此病危害叶片、枝条和果实,以叶片发病较严重,枝条及果实次之。果实上的病斑黑色,圆形或近圆形,叶片上的病斑褐色至黑色,不规则,后期中间灰白形成穿孔,有时呈长条形(图7)。发病枝条形成不规则或长条形或圆形凹陷的黑褐色病斑,严重时连接成片导致枝条坏死。发病后期,果实坏死形成僵果脱落,叶片呈焦枯状,新梢枯萎,湿度大时,病斑上小黑点溢出橙色分生孢子团。
对感染核桃炭疽病的叶片、枝条和果实的感病部位进行分离,得到5株菌株:TA3-4、TB5-2、TB5-3、TA3-1和TB3-1,经回接试验后再分离确定5株菌株均为核桃炭疽病病原菌。
病原菌在PDA培养基上培养,菌丝初为白色,后逐渐变成深灰色、黑灰色甚至黑色,培养基正反面颜色不一,反面颜色深于正面。培养后期会在菌丝表面形成橘红色点状孢子堆,后孢子堆变黑,孢子溢出极易萌发。分生孢子无色,单胞,圆柱形,两端钝圆或一端略尖或中间微凹陷,以圆柱形两头钝圆为主,大小为11.05±2.50 μm×5.6±0.20 μm(图8)。经rDNA-ITS序列测定,与GenBank中的Colletotrichum gloeosporioides的几个序列高度相似,如与序列号KC172072.1的C. gloeosporioides同源性为99%,与序列号GQ407097.1的C. gloeosporioides同源性为99%,与序列号MF554888.1的C. gloeosporioides同源性为97%,与序列号MF554879.1的C. gloeospo-rioides同源性为96%,因此可将核桃炭疽病病原菌鉴定为胶孢炭疽菌(C. gloeosporioides)。
2. 2 核桃炭疽病发生情况调查结果
对各地多个核桃品种的炭疽病发生情况进行调查,结果(表3)表明,核桃炭疽病在广西西北部普遍发生,发病率在20.00%~100.00%,其中凤山县金牙乡示范基地、乐业县央林大槽和金城江区大山塘示范基地的发病率均高达90.00%以上,最高可达100.00%;其病情指数在5.00~89.67,以乐业县央林大槽和金城江区齐美村才贵屯示范基地发病严重,病情指数分别为89.67和62.05。不同品种的发病严重程度差异明显,以香玲核桃发病最严重,其病情指数高达89.67,铁核桃的病情指数只有5.00和10.00,发病最轻,凤优1号、云南漾濞大泡、美国山核桃、云新核桃和山东辽河1号等5个品种病情指数相近。
2. 3 核桃炭疽病室内药剂筛选及田间防治试验结果
2. 3. 1 室内药剂筛选 选择核桃炭疽病菌中分离率最高的3株菌株TA3-4、TB5-2和TB5-3进行室内药剂筛选。结果(表4)显示,5种杀菌剂对TA3-4和TB5-2菌株的抑制效果接近,EC50最小为0.0561和0.0605 mg/L,对TB5-3菌株的抑制效果略有差异,EC50最小为0.4674。5种杀菌剂抑菌效果由强至弱总体排序为:25%吡唑醚菌酯>45%咪鲜胺>40%苯醚甲环唑>25%嘧菌酯>43%戊唑醇。
2. 3. 2 田间防治试验结果 根据室内筛选结果,选择杀菌效果较优的3种杀菌剂(25%吡唑醚菌酯、45%咪鲜胺和40%苯醚甲环唑)进行田间防治试验,结果(表5)表明,3种杀菌剂对核桃炭疽病的田间防效均在75.00%以上,其中,25%吡唑醚菌酯的抑菌效果最佳,对核桃炭疽病的防治效果达82.23%;45%咪鲜胺次之,防治效果为80.26%;40%苯醚甲环唑最弱,防治效果为75.98%。与对照相比,3种杀菌剂均在一定程度上降低了核桃炭疽病的发病率,具体排序为45%咪鲜胺>25%吡唑醚菌酯>40%苯醚甲环唑,与各药剂防治效果的排序略有不同,在抑制核桃炭疽病的发生方面,45%咪鲜胺的效果最佳。综合考虑,以25%吡唑醚菌酯对核桃炭疽病的防治效果最佳。
3 讨论
3. 1 核桃真菌性病害的病原
本研究对广西西北部核桃真菌性病害种类及发病情况进行调查,发现该地域核桃真菌性病害主要有核桃根腐病、核桃枝枯病、核桃茎点霉黑斑病和核桃炭疽病。其中,核桃根腐病的病原菌为腐皮镰刀菌(F. solani),与Zheng等(2015)的研究结果一致,而与胡云飞和郭新峰(2011)报道其病原菌为尖孢镰刀菌(F. oxysporum)及瓜果腐霉(Pythium aphanidermatum)存在差异;核桃枝枯病病原菌为胡桃楸拟茎点霉(P. juglandina),与孙俊(2013)的研究结果一致,而与胡国良等(1992)、张力元(2017)报道其病原菌为矩圆黑盘孢菌(Melanconium oblongum)、李星月等(2017)报道其病原菌为拟茎点霉(P. capsici)存在差异;核桃茎点霉黑斑病病原菌为茎点霉属(Phoma sp.)真菌,与熊婉(2013)的研究结果一致,该病害目前除广西西北部外,仅在湖北宜昌发现并报道过;核桃炭疽病病原菌为胶孢炭疽菌(C. gloeosporioides),與曲文文等(2011)、黄雄等(2016)、王清海等(2016)的研究结果一致,而Zhu等(2015)报道核桃炭疽病病原菌为C. fioriniae,该菌可能是稀有菌株,本次调查未找到该菌。本研究鉴定所得病原菌与前人研究结果存在一定差异,可能是因为调查地点、环境气候及核桃品种的不同导致侵染核桃的病原菌不同,后续应针对广西西北部地理环境特点对病害发生规律进行深入研究。
3. 2 核桃病害的防治
刘霞等(2013)、王清海等(2016)测定了不同药剂对核桃炭疽病菌的抑制效果,发现咪鲜胺是核桃炭疽病较理想的防治药剂。本研究开展了核桃炭疽病菌室内药剂筛选和田间防效试验,发现吡唑醚菌酯是较理想的核桃炭疽病防治药剂,其在广西西北部的防治效果较优于咪鲜胺。由调查所得数据可知,应避免在地势低洼、排水不畅处种植核桃,以避免核桃根部浸水腐烂导致死亡,且在苗圃中栽种核桃时应注意树与树之间的距离,保证林间通风能有效预防病害发生。化学防治虽然有效,但病原菌经农药刺激后会产生抗药性,因此在后续试验中应加强物理防治及生物防治的研究,找寻可持续发展的核桃病害防治方法。
4 结论
本研究对广西西北部核桃真菌性病害种类及发病情况进行调查,发现该地域核桃真菌性病害主要有核桃根腐病、核桃枝枯病、核桃茎点霉黑斑病和核桃炭疽病4种,确定其病原菌分别为腐皮镰刀菌(F. solani)、胡桃楸拟茎点霉(P. juglandina)、茎点霉属(Phoma sp.)真菌和胶孢炭疽菌(C.gloeosporioides),其中核桃炭疽病为主要病害。针对核桃炭疽病的防治,筛选出25%吡唑醚菌酯的效果最佳,可用于广西西北部核桃炭疽病防治。今后,应加强对核桃苗圃的规范管理,选择地势较高、排水良好且通风状况好的地点种植核桃,以防止病害发生。
参考文献:
杜慧平,赵瑞芬,燕照玲. 2017. 核桃青皮活性物质提取方法及其抑菌作用研究进展[J]. 河南农业科学,46(9):1-5.[Du H P,Zhao R F,Yan Z L. 2017. Research progress on extraction methods and antibacterial effect of active substances from walnut green husks[J]. Journal of Henan Agricultural Sciences,46(9):1-5.]
方中达. 1998. 植病研究方法[M]. 第3版. 北京:中国农业出版社. [Fang Z D. 1998. Research Methods in Plant Pathology[M]. The 3rd Edition. Beijing: China Agriculture Press.]
高智辉,瞿梅枝,王云果,唐光辉,宋晓斌. 2009. 核桃病害标准化综合防治方法[J]. 陕西林业科技,(4):58-62. [ Gao Z H,Qu M Z,Wang Y G,Tang G H,Song X B. 2009. Standardized integrated control of walnut diseases[J]. Shaanxi Forest Science and Technology,(4):58-62.]
何兴文,林孝伦,蒲永兰,颜华,吴猛耐. 2003. 危害重庆市核桃主产区的两种主要病害——核桃褐斑病、炭疽病[J]. 植物医生,16(2):28-29. [He X W, Lin X L, Pu Y L, Yan H, Wu M N. 2003. Two kinds of diseases that harms walnut main producing area in Chongqing—Marssonina juglandis Magn and Colletotrichum gloeosporioides[J]. Plant Doctor,16(2): 28-29.]
胡国良,李文彪,马良进. 1992. 山核桃枝枯病观察与研究[J]. 浙江林业科技,12(1):18-22. [Hu G L, Li W B, Ma L J. 1992. Observation and research on Carya cathayensis Sarg.[J]. Journal of Zhejiang Forestry Science and Technology,12(1): 18-22.]
胡云飛,郭新峰. 2011. 宁国山核桃根腐病的发生与防治[J]. 安徽林业科技,38(1):62-63. [Hu Y F, Guo X F. 2011. Occurrence and prevention of Carya cathayensis root rot in Ningguo[J]. Anhui Forestry Science and Technology, 38(1): 62-63.]
黄雄,王琳莹,肖千文,蒲光兰,何汶椿. 2016. 核桃炭疽病病原鉴定及抑菌药剂筛选[J]. 中国农业大学学报,21(12):41-48. [Huang X, Wang L Y, Xiao Q W, Pu G L, He W C. 2016. Pathogen identification of walnut anthracnose and fungicide screening[J]. Jorunal of China Agricultural University, 21(12): 41-48.]
蒋桂雄,谢素平,赖家业. 2010. 广西凤山县核桃果实特征研究[J].经济林研究,28(4):55-60. [Jiang G X, Xie S P, Lai J Y. 2010. Nut characters in Juglans regia at Fengshan County of Guangxi[J]. Nonwood Forest Research, 28(4): 55-60.]
李会钦. 2012. 核桃枝枯病防治技术[J]. 现代农村科技,(18):29. [Li H Q. 2012. Prevention and control techno-logy of walnut twig bight[J]. Modern Rural Technology, (18): 29.]
李星月,何朋俊,朱天辉,潘宗英. 2017. 核桃枯枝病新病原及生物学特性[J]. 微生物学通报,44(6):1339-1348. [Li X Y, He P J, Zhu T H, Pan Z Y. 2017. Characterization of a new pathogen in walnut twig blight[J]. Microbiology China, 44(6): 1339-1348.]
刘霞,杨克强,朱玉凤,尹燕飞. 2013. 8种杀菌剂对核桃炭疽病病原菌胶孢炭疽菌的室内毒力[J]. 农药学学报,15(4):412-420. [Liu X, Yang K Q, Zhu Y F, Yin Y F. 2013. Laboratory toxicity of eight fungicides against Colletotrichum gloeosporioides causing walnut anthracnose[J]. Chinese Journal of Pesticide Science, 15(4): 412-420.]
刘晓云,景耀,杨俊秀. 1995. 陕西省木本植物炭疽菌分类研究[J]. 西北林学院学报,10(3):29-30. [Liu X Y, Jing Y, Yang J X. 1995. A study on Colletotrichum classification of wooden plant in Shaanxi Province[J]. Journal of Northwest Forestry College, 10(3): 29-30.]
戚佩坤,姜子德,向梅梅. 2007. 中国真菌志拟茎点霉属(第三十四卷)[M]. 北京:科学出版社. [Qi P K, Jiang Z D, Xiang M M. 2007. Flora Fungorum Sinicorum: Phomopsis(Vol. 34)[M]. Beijing: Science Press.]
曲文文,杨克强,刘会香,王钧毅. 2011. 山东省核桃主要病害及其综合防治[J]. 植物保护,37(2):136-140. [Qu W W,Yang K Q,Liu H X,Wang J Y. 2011. Main diseases of walnut and integrated management in Shandong[J]. Plant Protection,37(2):136-140.]
孙俊. 2013. 辽宁新病害核桃枝枯病病原鉴定[J]. 果树学报,30(4):669-671. [Sun J. 2013. Identification of walnut twig blight in Liaoning Province[J]. Journal of Fruit Science, 30(4): 669-671.]
孙俊,王道明,赵宝军,孙阳,刘志恒. 2012. 核桃的营养价值及辽宁地区核桃病害的研究进展[J]. 辽宁林业科技,(3):34-37. [Sun J, Wang D M, Zhao B J, Sun Y, Liu Z H. 2012. The nutritional value of walnut and the research progress of walnut disease in Liaoning[J]. Liao-ning Forestry Science and Technology, (3): 34-37.]
王安民,梁英,张治有. 2013. 核桃溃疡病病原菌鉴定及药效筛选防治研究[J]. 林业实用技术,(12):33-25. [Wang A M, Liang Y, Zhang Z Y. 2013. Identification of pathogen of walnut canker and drug efficacy screening[J]. Practical Forestry Technology,(12): 33-35.]
王凡,胡奎,江蕙,陈然,李黎,方洋,李俊凯. 2015. 9种杀菌剂对核桃炭疽病病菌的抑制作用及联合毒力[J]. 江苏农业科学,43(6):127-129. [Wang F,Hu K,Jiang H,Chen R,Li L,Fang Y,Li J K. 2015. Inhibitory effect and joint toxicity of nine fungicides against Colletotrichum gloeosporioides causing walnut anthracnose[J]. Jiangsu Agricultural Sciences,43(6):127-129.]
王红霞,张志华,玄立春. 2007. 我国核桃种质资源及育种研究进展[J]. 河北林果研究,22(4):387-392. [Wang H X, Zhang Z H, Xuan L C. 2007. Review of researches on breeding and germplasm resource of walnut in China[J]. Hebei Journal of Forestry and Orchard Research,22(4):387-392.]
王清海,劉幸红,范昆,段春华,牛赡光,吴小芹. 2016. 核桃炭疽病病原菌鉴定及生物学特性[J]. 山东农业大学学报(自然科学版),47(1):9-14. [Wang Q H, Liu X H, Fan K,Duan C H,Niu S G,Wu X Q. 2016. Identification and characteristics of pathogen from Colletotrichum gloeosporioides[J]. Journal of Shandong Agricultural University (Natural Science Edition), 47(1): 9-14.]
魏景超. 1982. 真菌鉴定手册[M]. 上海:上海科技出版社.[ Wei J C. 1982. Fungal Identification Manual[M]. Shanghai: Shanghai Scientific & Technical Publishers.]
肖育贵,周建华,肖银波. 2010. 秦巴山核桃炭疽病病原菌生物学特性及防治技术的研究[J]. 四川林业科技,31(1):54-57. [Xiao Y G, Zhou J H, Xiao Y B. 2010. Research on the biologic featutes of pathogenic bacteria of walnut anthracnose and its control techniques in the Qinba Mountain[J]. Journal of Sichuan Forestry Science and Techno-logy, 31(1): 54-57.]
熊婉. 2013. 核桃茎点霉黑斑病病原学及防治技术研究[D].武汉:华中农业大学. [Xiong W. 2013. Etiology and control of walnut(Juglans regia) leaf spot caused by Phoma herbicola[D]. Wuhan: Huazhong Agricultural University.]
许志刚. 2002. 普通植物病理学[M]. 北京:中国农业出版社.[Xu Z G. 2002. General Phytopathology[M]. Beijing: China Agriculture Press.]
尹万瑞,朱天辉. 2016. 核桃枝枯病病原菌生物学特性及药剂防治[J]. 东北林业大学学报,44(7):98-101. [Yin W R, Zhu T H. 2016. Biological characteristics of walnut branch rot pathogen and its chemical prevention[J]. Journal of Northeast Forestry University, 44(7): 98-101.]
曾纪维. 2014. 河池市核桃种质资源调查与选优评价[D]. 南宁:广西大学. [Zeng J W. 2014. Inwestigate on germplasm resources and evaluate the superior trees of walnut in Hechi[D]. Nanning: Guangxi University.]
张力元. 2017. 陕西省核桃几种病虫害调查及田间防效研究[D]. 杨凌:西北农林科技大学. [Zhang L Y. 2017. Investigation of several diseases and pests of walnut in Shaanxi Province and field control research[D]. Yangling: Northwest A & F University.]
张武贵,石海明,谢伟东,赖家业,覃雨丝,贺佳君,卢清琼. 2012. 8个泡核桃品种在广西凤山县的栽培试验初报[J]. 经济林研究,30(2):103-108. [Zhang W G, Shi H M,Xie W D,Lai J Y,Qin Y S,He J J,Lu Q Q. 2012. Cultivation experiment of eight varieties of Juglans sigillata in Fengshan County of Guanxi[J]. Nonwood Forest Research, 30(2): 103-108.]
周茂繁. 1989. 植物病原真菌属分类图索[M]. 上海:上海科学技术出版社. [Zhou M F. 1989. Classified and Illustrated Genera of Plant Pathogenic Fungi[M]. Shanghai: Shanghai Scientific & Technical Publishers.]
周颖. 2016. 广西田七真菌性病害的病原、发生规律及防治研究[D]. 南宁:广西大学. [Zhou Y. 2016. The investigation of pathogens,occurrence regularity and control of panax notoginseng fungal diseases in Guangxi[D]. Nanning: Guangxi University.]
Pollegioni P, Van der Linden G, Belisario A,Gras M,Anselmi N,Olimpieri I,Luongo L,Santini A,Turco E,Scarascia Mugnozza G,Malvolti M E. 2012. Mechanisms go-verning the responses to anthracnose pathogen in Juglans spp.[J]. Journal of Biotechnology, 159(4): 251-256.
Zheng L,Peng Y,Zhang J,Ma W J,Li S J,Zhu T H. 2015. First report of Fusarium solani causing root rot of Juglans sigllata Dode in China[J]. Plant Disease,99(1): 159.
Zhu Y Z, Liao W J, Zou D X, Wu Y J. 2015. First report of leaf spot disease on walnut caused by Colletotrichum fioriniae in China[J]. Plant Disease, 99(2): 289.
(責任编辑 麻小燕)