HPLC-MS/MS法测量苯醚甲环唑与咯菌腈含量

何 钰， 林绍霞， 陈迎丽， 王 睿， 杨鸿波

(贵州省分析测试研究院，贵州 贵阳 550002)

引 言

苯醚甲环唑(difenoconazole)由瑞士Ciba-Geigy(现先正达)公司开发，其机理为内吸性，抑制真菌细胞壁生长，因而具有很强的杀菌活性，杀菌范围也很广泛[1]。咯菌腈(fludioxonil)是一种安全高效低毒的新型杀菌剂，其作用机理主要通过抑制真菌细胞内与葡萄糖磷酰化有关的反应，菌丝体的生长遭到限制，从而消灭致病菌，尤其对灰葡萄孢菌作用明显，属于非内吸性苯基吡咯类杀菌剂，可以应用于农业生产中的大部分真菌病害的防治工作[2]。

在近几年的相关报道中，苯醚甲环唑与咯菌腈的分析方法主要为高效液相色谱(HPLC)法[3]，而采用高效液相色谱-串联质谱法对苯醚甲环唑与咯菌腈混配剂的分析方法则未见报道。本文使用反相高效液相色谱-三重四级杆质谱仪，通过色谱及质谱条件的优化分离苯醚甲环唑与咯菌腈，并对混合制剂中的苯醚甲环唑与咯菌腈进行定量分析。以建立简单方便、快捷准确的含量分析方法，并具有良好分离、灵敏度高等特点，为完善产品质量体系建设提供支持。

1 实验部分

1.1 试剂和溶液

甲醇(色谱纯)；超纯水(电阻率18.2 MΩ·cm，25 ℃)； 甲酸(色谱纯)；苯醚甲环唑标准样品(质量分数98.7%)；咯菌腈标准样品(质量分数99.0%)。 标准品均由农业部提供。

1.2 仪器

Agilent 1290-6470A超高压高效液相色谱-三重四级杆色谱仪；Masshunter色谱质谱定量定性处理软件；明澈超纯水制备系统；色谱柱： Agilent Eclipse Plus-C18，50 mm×2.1 mm、1.8 μm。

1.3 仪器操作条件

1.3.1 液相色谱操作条件

流动相：22%水溶液(含0.1%甲酸)+78%甲醇；流量0.2 mL/min；柱温35 ℃；进样体积1 μL；保留时间：咯菌腈1.2 min，苯醚甲环唑2.2 min。

1.3.2 MSD操作条件

离子源：ESI源(带Agilent Jet Steam技术)；离子源参数：干燥气，N2；干燥气温度，250 ℃；干燥气流速，5 L/min；鞘气：N2；鞘气温度：250 ℃；鞘气流速：11 L/min；监测模式：MRM。监测离子参数见第49页表1。

表1 MRM监测离子参数

以上仪器操作条件作为基础条件，在实际操作中可依据其他仪器的相应特点，恰当调整仪器的操作条件参数，以便获取最优分离及响应值。咯菌腈和苯醚甲环唑标准样品的典型定量离子对色谱图及定性离子对色谱图如图1、图2所示。

1.4 测定步骤

1.4.1 标样溶液的配制

称取咯菌腈和苯醚甲环唑的标准样品各0.01 g(精确至0.000 1 g)，用甲醇溶解并稀释定容至100 mL，得到咯菌腈和苯醚甲环唑的标准样品储备液。

图2 苯醚甲环唑典型定量离子对(406.1->251.0)色谱图及定性离子对色谱图

1.4.2 校正曲线系列溶液配制

取1.4.1配制的标准储备液适量，混合，用50%甲醇溶液稀释定容，得到混合标准母液，再吸取适量该混合标准母液，稀释后得到一系列浓度梯度的混合标准工作溶液。

1.4.3 试样溶液的配制

称取试样4.8%苯醚甲环唑咯菌腈种子处理悬浮剂约0.03 g(精确至0.000 1 g)，以甲醇为溶剂，溶解并稀释试样至100 mL，超声1 min后摇匀备用。

1.4.4 测定

将仪器调整至1.3所设置的操作条件参数下，待仪器平衡足够时间，基线跑平，对同一标准样品进行测定，待相邻2次进样所产生的目标物对应峰面积的相对变化小于2.0%后，进行样品测定。

1.4.5 计算

对标样与试样中咯菌腈或苯醚甲环唑峰面积进行测量。以外标法定量。

2 结果与讨论

2.1 分析方法的线性相关性实验

取1.4.2配制的混合标准工作溶液，按1.3仪器操作条件进行分析测定， 以目标物浓度为横坐标，目标物对应峰面积为纵坐标作图，并进行线性方程拟合，所得结果列于表2。从表2可以看到，咯菌腈与苯醚甲环唑的线性方程相关系数非常接近于1，表明咯菌腈和苯醚甲环唑分别在测试质量浓度范围内其浓度与响应值之间具有良好的线性关系。

表2 分析方法的线性方程、相关系数(r2)、检出限(LOD)及定量下限(LOQ)结果

2.2 分析方法的精密度实验

在1.3仪器操作条件下，对试样进行分析测定，做6个平行，进行精密度实验。测得咯菌腈和苯醚甲环唑的标准偏差分别为0.16和0.32，变异系数为1.41%和1.45%(见表3)。

表3 分析方法的精密度实验结果

2.3 分析方法的准确度实验

分析方法的准确度以加标回收率评价。称取试样4.8%苯醚甲环唑咯菌腈种子处理悬浮剂配制得到试样溶液，加入一定量的咯菌腈和苯醚甲环唑标准样品，做5个平行。在1.3.1仪器操作条件下进行分析，测得咯菌腈的平均回收率为75.64%，苯醚甲环唑的平均回收率为110.51%， 如表4所示。

表4 分析方法准确度实验结果

3 结论

本实验以液相色谱-串联质谱法建立了苯醚甲环唑与咯菌腈的有效分析方法。结果显示，在测试浓度范围内苯醚甲环唑和咯菌腈的具有良好浓度与响应之间线性关系，方法重复性好、检出限低、准确度高，同时,方法操作简单，运行时间短，可应用于产品质量高通量检测，为水体、土壤中苯醚甲环唑和咯菌腈痕量分析提供参考。