单用TCT、HPV-DNA及两者联合检测在宫颈病变诊断中效果对比

李明风

(恩平市妇幼保健院检验科，广东 恩平 529400)

宫颈癌作为一种女性较为常见的生殖道恶性肿瘤之一[1]，具有癌前病变期较长的特点，且可逆转。宫颈癌的癌前病变表现为宫颈上皮内瘤样病变(CIN)，对CIN的早期诊断能够有效预防并降低宫颈癌病发[2]。宫颈细胞学检测、阴道镜检及高危型人乳头瘤病毒(HPV)-DNA检测是市场常用的检测方法。高危型HPV可使细胞恶性增生，与女性肿瘤的形成有关。荧光定量PCR可有效检测HPV，且特异性强、灵敏度高。目前，我国采用细胞学-阴道镜检-组织学检查进行诊断。本次研究，恩平市妇幼保健院采用联合检测的方法，与液基图片细胞学(TCT)检测、HPV-NDA检测作比较，分析诊断结果，报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取2015年1月至2017年3月在本院接受治疗的40例宫颈病变患者作为研究对象。患者年龄20～60岁，平均(39.2±2.8)岁。所有患者均符合以下条件：1)有性生活史；2)无物理治疗史；3)未进行过子宫切除手术或宫颈手术；4)未妊娠或产后1个月及以上；5)经TCT检查后结果异常。

1.2 检测方法

对所有患者均进行TCT检测、HPV-DNA检测及两者联合检测。

1)TCT检测：检测前，3 d内不进行阴道冲洗放药，且24 h内进行性生活，同时要避开月经期。将宫颈内外的脱落细胞采用专用的取材器取置于盛有特殊固定缓冲液的容器中，送入细胞室后，用自动制片机进行处理。振荡混匀后解聚细胞团，固定液经高精度过滤膜过滤，使宫颈上皮细胞与其他细胞碎片、黏液及血液等杂质分离，得到纯净的宫颈上皮细胞。将得到的宫颈上皮细胞收集到可调控细胞重叠密度的过滤器，转移至玻片并固定染色。

2)HPV-DNA检测：将无菌棉拭子擦掉宫颈口表面黏液，插入采样刷均匀用力旋转3周停留10 s后取出，将其置于无菌试管中，折断多余部分保留采样刷。用PCR结合荧光偏振检测对标本中的HR-HPV进行检测。按试剂盒手册进行操作，将200 μL细胞悬液置于微量离心(EP)管离心13 000 r·min-1(10 min)，弃去离心后的上清液，吸取50 μL细胞处理液于微量离心管中振荡使其和沉淀充分混合后，将EP管置于100 ℃加热器中10 min，将加热后的EP管迅速放入4 ℃冰箱冷却，然后再次离心13 000 r·min-1(10 min)，吸取2 μL所得上清液与配制的酶、引物及23 μL混合。

3)宫颈搔刮术或阴道镜下活检术：由专业医师操作对所有患者进行阴道镜检查，并对病灶进行镜下活检，镜下病灶不明显在转化区3、6、9、12 4点取材，颈管病变者进行宫颈管搔刮。将所有标本送至病理科阅片，阅片结果根据宫颈病变及程度分为：无宫颈上皮内瘤变(NILM)、CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ和浸润癌。实验涉及到的仪器及试剂：梯度PCR仪(上海启步生物科技有限公司，型号：BSW-2T)，HPV分型偏振检测试剂盒(广东凯谱生物科技股份有限公司)，HPV-DNA检测仪(成都爱生科技有限公司)。电子阴道镜(深圳金科威公司，型号：SLC22000)

1.3 观察指标

比较三种方法与组织学诊断结果的符合率。比较其相互之间的灵敏度和特异度。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 TCT单独检测的组织学诊断结果

TCT检测后，有25例诊断为ACS-US之上，其中有21例组织学诊断结果为阳性(阳性包括CA、CINⅠ、CINⅡ及CINⅢ)。TCT检测与组织学诊断符合率为84.00%。具体数据见表1。

表1 TCT单独检测的组织学诊断结果例

2.2 HPV-DNA单独检测的组织学诊断结果

HPV-DNA检测后，有21例诊断为ACS-US之上，其中有16例组织学诊断结果为阳性(阳性包括CA、CINⅠ、CINⅡ及CINⅢ)。TCT检测与组织学诊断符合率为76.19%。具体数据见表2。

表2 HPV-DNA单独检测的组织学诊断结果例

2.3 联合检测的组织学诊断结果

联合检测后，有20例诊断为ACS-US之上，其中有18例组织学诊断结果为阳性(阳性包括CA、CINⅠ、CINⅡ及CINⅢ)。联合检测与组织学诊断符合率为90.00%。其与TCT单独检测结果比较差异具有统计学意义(P<0.05)，与HPV-DNA单独检测结果比较差异也具有统计学意义(P<0.05)。

2.4 三种检测方法的灵敏度和特异度比较

TCT检测的特异度为74.8%，灵敏度为92.6%；HPV-DNA检测的特异度为75.4%，灵敏度为82.9%；联合检测的特异度为88.7%，灵敏度为96.5%。联合检测的特异度、灵敏度与单独TCT或HPV-DNA检测比较，差异具有统计学意义(P<0.05)。

3 讨论

调查显示[3]，宫颈癌癌前病变期较长，且早期宫颈癌的治疗效果较好，生存率可达90%。其癌前病变表现为宫颈上皮内瘤样病变，CIN的早期诊断能够有效预防并降低宫颈癌病发[4-5]。因此，对宫颈癌的早期诊断尤为重要。

诊断宫颈病变的第一步是细胞学检测，但其存在许多不足之处。如涂片不均匀、黏液过多遮盖异常细胞、丢失细胞过多等影响诊断结果。膜式液基细胞学制片技术(TCT)的出现弥补了这些不足[6]，按规定手法进行操作，并且使用固定样式的扫帚式刷子，刷头全部进入采集管中，保证标本量，且涂片均匀，可提高阅片的准确率。此外，膜式液基细胞学制片还可重复，有效提高了检出率[7]。

大量研究表明[8]，HPV感染与宫颈癌的病变过程有很大关系。无HPV感染的患者的CIN发生逆转的概率是HPV持续感染患者的4倍。因此，宫颈病变的早期检测中HPV检测也是一项重要指标。且HPV-DNA检测可排除可疑低度病变，提高诊断准确率。此外，还可根据术后HPV检测的结果推测是否有复发的可能。但这两种方法仍存在各自的不足[9]，TCT检测容易受操作者主观因素影响，HPV-DNA检测受病变程度大小的影响，且特异性低。因此，本院进行联合检测，与TCT检测、HPV-NDA检测结果做对比。

对比结果表明，联合检测法与组织学诊断符合率(90.00%)明显高于TCT检测(84.00%)、HPV-NDA检测(76.19%)；且特异度和灵敏度较高，分别为88.7%、96.5%。

综上所述，联合诊断的结果与组织学诊断结果的符合率较高，且特异度和灵敏度也较高，更有临床使用价值。