精子DNA碎片率对体外受精胚胎移植妊娠结局的影响研究

陶萍

【摘要】 目的：探讨精子DNA碎片率（DNA fragmentation index，DFI））对体外受精胚胎移植（IVE-ET）过程中妊娠结局的治疗影响。方法：收集140例体外受精（IVF）周期患者作为研究对象进行回顾性分析，采用精子染色质扩散实验（spermchromatin dispersion，SCD）对进行精子DNA碎片率检测，总共分为三组，A组低DFI（<10%），B组中DFI（10%～25%），和C组高DIF（>25%）。比较三组的受精率、优胚率、卵裂率及临床妊娠率，并分析三组的精液参数的差异。结果：A组、B组的受精率、临床妊娠率高于C组，差异有统计学意义（P<0.05）；A组优胚率高于B组、C组，A组、C组差异有统计学意义（P<0.05）；三组卵裂率差异无统计学意义（P>0.05）。A组、B组、C组其他精液常规指数也有差异，其中，三组中A组前向运动精子（Progressive motility，PR）百分率、精子正常形态率显著高于C组（P<0.05），A组高于B组，但差异无统计学意义（P>0.05）。结论：（1）前向运动精子数量、精子正常形态率会随精子DFI升高而降低；（2）精子DFI高于一定阈值（25%）会影响IVF受精率和优胚率。

【关键词】 精子DNA碎片率； IVE-ET； 优胚率； 受精率

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2018.11.084 文献标识码 B 文章编号 1674-6805（2018）11-0171-02

相关研究发现，随着当今社会快速发展，在多种因素的综合影响下，不孕不育患者的数量在逐年增加。在这一类患者人群中，男性患者的比例占到了50%[1]。目前男性不育的主要诊断指标还是精液常规参数，包括精子浓度、精子活动率及精子形态学检查等，但其诊断存在很大局限性，不能全面反映精子的受精能力[2]。精子DNA碎片率（DFI）是指发生DNA链断裂的精子占全部精子的百分比。精子自身没有DNA修复機制，而染色质结构的完整性是正常受精、胚胎发育与妊娠的前提条件[3-4]。精子DNA损伤程度对于生殖结局是否存在不利影响是临床关注的重点问题[5]。为了对这一问题进行更深入的了解，本文通过对中心140例男性患者的精液进行了临床探究，对于精子形态及DFI对IVE-ET妊娠结局的影响进行了回顾性的分析，为研究来自精子的因素对IVE-ET的影响提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

随机选择笔者所在医院在2017年1-7月接受体外受精-胚胎移植（IVE-ET）治疗的符合纳入标准的患者140例进行临床探究。纳入标准：夫妇染色体G显带技术检查均为正常核型，女方为单纯双侧输卵管阻塞性因素不孕，且不合并其他女性不孕因素，年龄<40岁，BMI<24 kg/m2，助孕次数≤2次，月经第2～5天测基础内分泌值正常，无卵巢手术史、放化疗史及遗传病家族史，男性检查包括男性第二性征、阴茎、阴囊、精索、输精管、附睾、睾丸等均无异常，常规IVF，新鲜精液标本。排除标准：重度少弱精子症患者。女方年龄22～40岁，平均（31.60±6.08）岁。患者的不育年限1.1～10.4年，平均（4.8±1.6）年。

1.2 仪器与试剂

日本Olympus公司光学显微镜，西班牙Microptic公司计算机辅助精子分析仪，深圳市博锐德生物科技有限公司精子DNA碎片检测试剂盒和Diff-Quik 染色液，美国Irvine公司精子分离液，瑞典Vitrolife公司GOMPS PLUS培养液。

1.3 方法

1.3.1 精液采集和处理 男方禁欲2～7 d，在取卵当日以手淫法收集精液。精液取出后立即放置于37 ℃的恒温培养箱内，待精液完全液化后，留取小部分精液进行精液常规检测和DFI检测。精液常规检测按照WHO实验室手册（第5版）标准进行，精子形态学分析采用Diff-Quik染色，采用Kruger严格形态学标准阅片。剩余大部分精液采用密度梯度离心法处理，处理后调整精液密度，用于IVF受精。

1.3.2 精子DFI检测 采用精子染色质扩散法（SCD）：按照变性、去核蛋白、脱水、染色等步骤制精子标本片，200倍光学显微镜下观察制得玻片。根据Fernández标准分级，大晕环和中晕环精子为 DNA完整精子，小晕环、无晕环和退化精子为DNA损伤精子。以DNA损伤精子数与计数总数（500个）之比为精子DFI。共有140例入组周期，根据DFI值将入组患者分为三组：A组低DFI（<10%）共88例，B组中DFI（10%～25%）共38例，和C组高DIF（>25%）共14例。

1.3.3 IVF治疗 采用本中心常规的超排卵方案进行，B超及雌二醇（E2）水平监测卵泡发育，卵泡发育成熟后，肌注人绒毛膜促性腺激素（hCG），36 h后阴道B超引导下行穿刺取卵术取卵。取卵当日行常规IVF授精，授精后16～18 h观察受精情况，40～42 h观察卵裂情况。72 h后选择1～2个优质胚胎进行移植，移植后14 d尿和血hCG阳性者4周后行B超检查，见宫内妊娠囊为临床妊娠。

1.4 统计学处理

本次试验探究中所有数据全部采用SPSS 14.0统计软件进行处理分析，计量资料以（x±s）表示，采用独立样本t检验，计数资料以率（%）表示，采用字2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 精子DFI与精液常规参数的比较

共140例取卵周期，A组88例，B组38例，C组14例。A组、B组精常规各参数比较差异无统计学意义（P>0.05）。C组精子浓度和精子活力与A组、B组比较差异无统计学意义（P>0.05），前向运动精子数和正常精子形态率显著低于A组，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.2 精子DFI与IVF结局比较

A有88例取卵周期，73例移植周期，B组有38例取卵周期，32例移植周期，C组有14例取卵周期，11例移植周期。A组、B组的受精率、卵裂率、优胚率和临床妊娠率差异无统计学意义（P>0.05）。C组的受精率和临床妊娠率显著低于A组、B组，优胚率显著低于A组，差异有统计学意义（P<0.05），见表2。

3 讨论

精子DNA完整性对于父方基因正常遗传给子代是至关重要的，是精子发挥正常功能的先决条件[6-8]。精子DNA碎片的产生不仅会严重影响到精子的受精能力，影响受精后原核的形成，还可能导致流产，后代先天畸形或者某些遗传性疾病[9]。对于精子DNA损伤影响胚胎质量的机制目前还不清楚，比较认同的观点是精子染色质的异常导致胚胎质量下降[10]。精子DFI反映了精子DNA的完整性，作为一项评价精液质量和预测生育能力的新指标，精子DFI已成为近年来生殖医学界关注的焦点[11-12]。本文重点研究了精子DFI与精液常规参数的相关性，以及精子DFI对IVF结局的影响。

本文研究结果显示，前向运动精子数和精子正常形态率会随精子DFI升高而降低，而这两项精液常规指标通常用于对IVF-ET结局的预测，但精确度和准确性有限。进一步比较不同精子DFI组的IVF相关数据，可以发现，当精子DFI<25%时，其对胚胎质量、临床妊娠率无显著影响，但当其>25%时，优胚率和临床妊娠率则有明显的下降，说明当精子DFI高于25%阈值时，IVF结局会有显著影响。将精子DFI与精液常规指标相结合，无疑可以更精确地预测IVF结局。

综上所述，本文通过对中心140例不孕不育患者进行临床探究，验证了精子DFI与精液常规指标的关系，且当其高于一定阈值时会对IVF结局造成影响。不过由于本次临床试验样本数量较小，说明性有限，应该进一步扩大样本数量进行探究。

参考文献

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（收稿日期：2017-10-31）