新发2型糖尿病合并肥胖患者血清锌α2蛋白水平与胰岛素抵抗的相关性分析

王铭婕 闫朝丽

[摘要] 目的 分析2型糖尿病（TD2M）患者血清锌α2蛋白（ZAG）水平与胰岛素抵抗（IR）的相关性，探索ZAG成为代谢综合征（MS）或肥胖血清指标的可能性。方法 选择单纯肥胖与新发TD2M合并肥胖患者为研究对象，通过双向凝胶电泳（2-DE）、质谱分析、实验室检查等方式，分析血清ZAG水平与胰岛素抵抗及脂糖代谢的相关性。结果 与对照组相比，观察组ZAG上调；观察组患者ZAG水平与胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）、糖化血红蛋白（HbA1c）、甘油三酯（TG）呈正相关（P<0.05），与高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）呈负相关（P<0.05）；在观察组中，HDL-C是血清ZAG水平的独立危险因素（P<0.05）。结论 ZAG为单纯肥胖者与新发TD2M合并肥胖者的差异表达蛋白，ZAG与新发TD2M合并肥胖者IR关系密切，是人体脂代谢的重要调节因子。

[关键词] 2型糖尿病；血清锌α2蛋白；胰岛素抵抗；相关性

[中图分类号] R587.1 [文献标识码] A [文章编号] 1672-4062（2018）03（a）-0055-02

糖尿病（DM）是临床常见的慢性疾病，以高血糖水平为主要标志，若未能及时得到治疗，可引起全身多器官损害[1]。随着人们物质条件的提高，肥胖症成为现代社会常见的慢性代谢性疾病，常伴有局部体脂沉淀过多的症状（单纯肥胖脂肪分布均匀，无代谢分泌紊乱现象）。肥胖可导致胰岛素抵抗（IR）与胰高血糖症已被证实，但与DM之间的具体机制尚不明确。研究发现[2-3]，肥胖、IR、DM患者与健康人群之间存在诸多差异蛋白，这些蛋白可能在疾病的发生发展中扮演重要角色。锌α2蛋白（ZAG）是成熟脂肪细胞分泌的一种脂肪因子，具有强烈的促脂肪分解作用，对人体脂糖代谢具有明显的影响。该次研究比较了不同人群血清ZAG水平差异，探索ZAG成为代谢综合征（MS）或肥胖血清指标的可能性，以及2型糖尿病（TD2M）合并肥胖患者血清ZAG水平与IR的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选则10例內蒙古医科大学内分泌科接收的门诊或住院的新发TD2M合并肥胖者，纳入观察组。患者均符合《中国2型糖尿病防治指南（2013年版）》中提出的相关诊断标准[4]，身体质量指数（BMI）≥25 kg/m2。排除半年内有糖尿病症状且经治疗的患者；合并肝肾功能异常、肿瘤、感染或其他严重系统性疾病及基线资料缺失者。

另外，选择该院健康体检中心选取年龄、性别、体重等基线资料相匹配的健康志愿者10例（单纯肥胖，BMI≥25 kg/m2）作为对照组。该次研究经研究对象知情并签署同意书。

1.2 蛋白质组学研究方法

1.2.1 实验器材 仪器设备：台式高速冷冻离心机（湘仪TGL-20M）、台式高速离心机（湘仪TG16-WS）、等电聚焦仪（IEF 100）、双向垂直电泳仪（Hoefer SE900）、快速扫描仪（爱普生 V10）、紫外可见分光光度计（α100）、纳升液相色谱-四级杆-（micrOTOF-Q ⅡTM）。试剂盒：白蛋白/IgG去除试剂盒、IPG胶条（13 cm，PH3-10）。

1.2.2 样本制备 所有受检者禁食10 h后，于次日清晨进行统一血样采集，取空腹肘静脉血2～3 mL，离心10 min（3 000 r/min）后取上清液分装，存放于-70℃冰箱内保存。实验前将每组10例按等体积混匀。取样本10 μL，利用除高丰度试剂盒去除多数高丰度白蛋白及IgG后，再利用三氯乙酸/丙酮进行除盐。

1.2.3 双向凝胶电泳（2-DE） 第一向电泳：将样品与尿素、硫脲、CHAPS、溴酚蓝、DTT、Bio-Lyte、超纯水混合均匀后加至水化槽，然后放入预制IPG胶条（17 cm，PH3-10），对好正负极后盖上盖子，设置等电聚焦参数。第二向电泳：使用12%的SDS-PAGE胶，开始使用较低电流，待样品走出IPG胶条，凝聚成线后后采用较高电流，当凝胶底部边缘显示酚蓝指示剂时即为完成电泳。

1.2.4 凝胶扫描与图像采集 快速扫描制备好的凝胶，将扫描好的图像用PDQuest7.1.1 2-DU胶分析软件结合肉眼观察进行分析，确定蛋白差异点，切取差异点所在凝胶，放入EP管中。

1.2.5 质谱分析 将2-DE挑选出的差异蛋白经ESI-Q-TOF-LC/MS质谱分析，鉴定蛋白点。向每个样品管中加水，进行洗胶、然后行银染脱色、酶解；将酶解液点入上样孔，设置参数，获取质谱分析结果。

1.2.6 实验室指标检测 采用双抗体夹心酶联免疫吸附法检测两组患者血清ZAG水平；采用全自动生化分析仪检测血常规、总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）水平；糖化血红蛋白（HbA1c）采用糖化血红蛋白分析仪进行检测；化学发光免疫法检测受检者空腹胰岛素（Fins）水平；胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）采用HOMA稳态模型进行计算：HOMA-IR=Fins×FPG/22.5。操作严格按照说明书进行。

1.3 观察指标

观察两组患者ZAG的2-DE结果与质谱分析结果，分析观察组患者ZAG与TC、TG、HDL-C、LDL-C、HbA1c水平及HOMA-IR指数相关性。

1.4 统计方法

此次研究均由SPSS 17.0统计学软件处理分析数据资料，计量资料用均数±标准差表示，采用t检验；血清ZAG水平与各项实验室指标的相关性分析采用偏相关分析，以血清ZAG水平为因变量，各项实验室指标为自变量进行多元线性回归分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 ZAG在不同人群中表达差异

通过2-DE 技术，明确了ZAG为对照组（单纯肥胖）与观察组（新发TD2M合并肥胖）患者的差异蛋白点。与对照组相比，观察组ZAG上调，见表1。

2.2 空腹ZAG水平与实验室指标的相关性分析

偏相关分析结果显示，观察组患者ZAG水平与HOMA-IR、HbA1c、TG正相关（rZAGvsHOMA-IRc=0.55、rZAGvsHbA1c=0.39、rZAGvsTG=0.43，P<0.05），与HDL-C负相关（rZAGvsHDL-C=-0.45）。以血清ZAG水平为因变量，各项实验室指标为自变量进行多元线性回归分析，结果显示，在观察组中，HDL-C是血清ZAG水平的独立危险因素（β=-0.38，P<0.05）。

3 讨论

ZAG是一种能在血清中分离得到的可溶性糖蛋白，是成熟脂肪细胞分泌的一种脂肪因子，从属MHC-Ⅰ家族。近年来研究表明[5-6]，ZAG在机体脂代谢中具有重要地位，有明显的分解脂肪的作用，其机制可能是通过激活β3肾上腺素受体，提高脂肪细胞内环磷酸腺苷水平所致。目前研究已证明瘦素、脂联素等脂肪因子与IR关系密切，而ZAG可通过分泌影响瘦素、脂联素等其他脂肪因子的表达，故而与IR存在一定关系[7]。目前研究关于血清ZAG水平与IR指标之间关系的研究结果并不一致，该研究就TD2M患者血清ZAG水平与IR的相关性展开研究，以期为深入了解ZAG与IR的关系作出参考。

2-DE实验结果发现，在单纯肥胖人群与T2DM合并肥胖患者群体中，ZAG表达并不相同，说明ZAG与机体体脂状况关系不大，可能与IR存在一定的相关性。质谱分析结果发现，与对照组相比，观察组ZAG上调，也验证了这一点。偏相关分析结果显示，观察组患者ZAG水平与HOMA-IR、HbA1c、TG呈正相关（P<0.05），与HDL-C呈负相关（P<0.05）；这与以往文献报道相符[8]。在TD2M组中，HDL-C是血清ZAG水平的独立危险因素（P<0.05）；进一步提示ZAG与脂肪组织存在密切关系，是人体脂代谢的重要调节因子。

综上所述，ZAG为单纯肥胖者与新发TD2M合并肥胖者的差异表达蛋白，ZAG与新发TD2M合并肥胖者IR关系密切，是人体脂代谢的重要调节因子，ZAG可能在未来肥胖、TD2M的靶向治疗中发挥重要作用。

[参考文献]

[1] 聂緒强，杨建文，史海霞，等.IR-3T3-L1脂肪胰岛素抵抗细胞的建立[J].南方医科大学学报，2015，35（1）：103-108.

[2] Matthias R， Christian W. The origin and definition of brite versus white and classical brown adipocytes[J].Adipocyte，2014，3（1）：4-9.

[3] Escoté X， Aranda GB， Mora M， et al. Zinc alpha-2 glycoprotein is overproduced in Cushing's syndrome[J].Endocrinología Diabetes Y Nutrición，2017，64（1）：26.

[4] 中华医学会糖尿病学分会.中国2型糖尿病防治指南（2013年版）[J].中华糖尿病杂志，2014，6（7）：447-498.

[5] 李白洁，范志宏.锌α2糖蛋白与2型糖尿病关系的研究进展[J].中国糖尿病杂志，2016，24（8）：757-759.

[6] Hayward RA， Reaven PD， Wiitala WL. Follow-up of Glycemic Control and Cardiovascular Outcomes in Type 2 Diabetes[J].New England Journal of Medicine，2016，63（1）：279-280.

[7] 宋丽杰，邴艳萍，姜楠，等.血清锌α2糖蛋白表达水平与2型糖尿病并发高尿酸血症的关系[J].中国医师杂志，2017， 19（10）：1534-1537.

[8] 解婧，蒋志华，成兴波.2型糖尿病患者血清锌α2糖蛋白水平的变化及其相关因素分析[J].中国糖尿病杂志，2012，20（2）：102-104.

（收稿日期：2017-12-09）