细菌培养法与PCR法对细菌性阴道炎辅助诊断的价值

刘 渝

（荆州市沙市区妇幼保健院，湖北 荆州 434000）

阴道菌群失调所引起的致病菌大量繁殖是导致细菌性阴道炎病发的主要原因，若不能有效控制细菌繁殖则可能导致炎症累及盆腔或子宫，严重者可导致患者不孕，因此尽早确诊并采取有效措施进行治疗是遏制细菌性阴道炎病情进展的主要措施[1]。本次研究基于以上背景，对细菌培养法与PCR法辅助诊断细菌性阴道炎的价值进行了对比，现回顾性分析如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料：选取我院2015年5月至2016年6月的140例细菌性阴道炎患者为研究对象，年龄21～41岁，平均（30.34±1.66）岁。入选患者均符合《妇产科学》[2]中所述的细菌性阴道炎诊断标准，且经妇科查体确诊为细菌性阴道炎。

1.2 方法：①标本准备。以无菌棉签于患者阴道后穹隆处蘸取分泌物后置入无菌盐水中保存送检。②细菌培养法。将标本置于专用培养基中，在37 ℃二氧化碳孵箱中持续培养45 h，形成菌落后取出其中呈滴露状、灰色且光滑的半透明菌群，按照细菌鉴定仪相关检测标准进行操作鉴定。③PCR法（聚合酶链式反应检验）。取1000 μL含无菌盐水的标本置入离心管，以12000转/分的速率持续离心10 min后去除上清液，并在沉淀当中加入碱性裂解液后震荡混匀，在干式金属恒温仪中孵育，温度设为60 ℃，持续15 min，取出以12000转/分速率离心10 min，再取上清液制作DNA模版进行PCR扩增，反应体系为：53.5 μL双蒸馏水，10.0 μL DNA模版、引物、10×10.0 μL反应缓冲液，4×dNTPs各1.25 mmol/L，0.5 μL Taq聚合酶，总体积100.0 μL。加入反应体系后置于PCR仪中，反应条件为：94 ℃持续60 s，37 ℃持续60 s，72 ℃持续120 s，共25～30个循环，结束后以琼脂糖凝胶电泳对检测结果进行观察。

1.3 观察指标：①对两种检验方法阳性检出率、敏感性、特异性进行统计对比。阳性判断标准分别为：细菌培养法：生化鉴定培养基上典型菌落为目的菌落则判定为阳性；PCR法：边缘整齐、条带＜1 mm，在预期碱基大小范围内，背景无引物二聚体和药斑，若出现其他条带或预期碱基大小范围外的情况则均视为检验无效。②对阳性菌分布情况进行观察对比。

1.4 统计学分析：以SPSS19.0对数据进行统计分析，计数资料以[n（%）]表示，卡方检验，多指标对比采取F值检验，统计值有统计学差异的判定标准参照P＜0.05。

2 结 果

PCR法阳性检出率、敏感性、特异性均明显高于细菌培养法，P＜0.05。见表1。

表1 两种检验方法阳性率、敏感性、特异性对比[n（%）；n=140]

两种检验方法阳性菌中阴道加德纳菌检出率明显高于其他菌种，P＜0.05，见表2。

表2 阳性菌菌种检出率对比[n（%）]

3 讨 论

相关研究表明，葡萄球菌、链球菌、肠球菌和阴道加德纳菌是引发阴道感染的常见致病菌，通常情况下菌群正常时不会致病，但若女性受阴道分泌物的影响导致阴道内pH值出现异常（＜3.8或＞4.4）则会导致菌群失调，从而形成致病菌[3]。本次研究结果表明，两组阳性菌当中以阴道加德纳菌检出率最高，说明阴道加德纳菌为引发细菌性阴道炎的高危因素。早期采取检测以确定菌群对提高细菌性阴道炎的治疗效果有重要意义，目前常用的辅助诊断法方法包括PCR特定基因表达情况检测、细菌培养法等，医师可以患者主诉和妇科查体为主，并采取实验室辅助检测用来确诊疾病。

本次研究结果表明：PCR法阳性检出率、敏感性、特异性均明显高于细菌培养法，P＜0.05。原因分析为：①细菌培养法曾长期作为临床诊断细菌性阴道炎的金标准，但这种方法对检验环境要求极为严格，且检验时间长，操作复杂，人工假阳性率频发，因此近年来逐渐被PCR法取代；②PCR是基于DNA半保留复制的一种基因工程技术，检测敏感性和特异性高，且对标本和检测环境要求低，当天即可获取结果，针对一些培养要求特殊的细菌可采用PCR检测，从而减少普通细菌培养阴性而产生的误诊和漏诊问题。此外，PCR还可通过阳性和阴性细菌浓度比较来确定阴道炎细菌感染的正常参考范围[4]，若浓度超出参考范围则可判断为高度疑似细菌性阴道炎感染病症，结合临床体征和症状主诉即可做出准确诊断，为迅速控制感染，促进患者早日康复提供依据。综上，PCR法对细菌性阴道炎的阳性检出率、灵敏度和特异性更高，有利于临床确诊，值得推广应用。