小议PCR技术在中药鉴定中的应用

张晓哲

摘 要：中药是我国传统的医用药物，古人治病都离不开中药，中药在古代乃至现代，都起着不可替代的作用。中药种类较多，有人工种植的，也有野生的，同一种中药，在不同的种植产地或者生长模式下，质量和药效就存在较大的差异。中药鉴定一直以来就是一个难题，一方面源于中药市场较为混乱，弄虚作假，以次充好的情况经常发生，外行人很难辨别出中药的品质，本文从中药鉴定出发，分析PCR技术在中药鉴定中的应用。

关键词：PCR技术 中药鉴定 应用

中图分类号：Q55 文献标识码：A 文章编号：1672-3791（2018）03（b）-0213-02

1 相关概述

1.1 中药鉴定学

中药鉴定学主要是对中药的质量和品种进行鉴定和研究，制定出中药质量鉴定标准，寻找新的药源。中药鉴定的五大方法：性状鉴定法、基原鉴定法、生物鉴定法、理化鉴定法、显微鉴定法。

1.2 PCR技术

PCR技术属于生物鉴定法的一种，PCR技术又叫聚合酶链式反应技术，可以实现特定DNA片段的扩增。PCR技术的优点在于，可以实现微量DNA的增加，该项技术不仅适用于研究历史人物残骸和古生物化石，还可以用于中药的检验，只要从中药中分离出NDA，便可以利用PCR技术增大分离出来的DNA，用于对比。

2 鉴定中药真伪优劣的必要性

中药用于疾病治疗，好品质的中药可以实现治病救人的目的，品质差的中药不仅药效较低，还会对人的身体有害。中药中假药和劣药的存在，会影响药品生产、科研结果，导致临床治疗失败，不仅带来经济损失，还会误病害人。因此，对中药进行鉴定，区分其中的“真伪优劣”，也就是中药的真假以及中药质量的好坏，很有必要。当前中药真伪的辨别依旧是个难题，中药中经常出现一些混品、伪品、掺伪品的行为，究其原因主要有：

首先，人为失误。出现误种、误采、误收、误售、误用的行为。如将藏边大黄、河套大黄误种为大黄；将风寒草（聚花过路黄）误采为金钱草（过路黄）；市场上将十字花科芫菁的种子，冒充菟丝子；用丝石竹的根冒充桔梗；用参薯的块茎冒充山药等。其次，名称、外形、基原相近的中药品种容易出现混乱。以防己商品为例，种类繁多，广防己、粉防己、木防己、汉防己，名称相近，容易弄混。最后，人为故意作假，以假充真。受到经济利益的影响，中药市场出现造假的行为，例如：将银环蛇纵剖成条状，接上小蛇头盘，冒充金钱白花蛇，也有用带有环纹的幼蛇来冒充金钱白花蛇，也有使用白色油漆的方式，画出环纹，冒充金钱白花蛇；部分商家将马铃薯片进行加工，用来冒充白附片；使用其他动物的皮熬胶，冒充阿胶。

中药的质量直接关系到，用药的药量以及用药效果，质量是中药的生命。因此，中药在明确品种后，必须注意对中药的检查，辨别中药的真假优劣，对于不符合用药标准的中药，不能使用。

3 基于PCR技术的分子生物鉴定技术

3.1 PCR-RFLP技术

PCR-RFLP技术，又叫聚合酶链式反应-限制性内切酶长度多态性技术，可以对中药的品种进行鉴别，还可以对中药的掺伪程度进行监测。例如：运用PCR-RFLP技术，可以对川贝母进行检测，检测样品中存在的掺伪比例，这种半定量的检测方法，可以避免一些商户，在川贝母中掺入伪品。具体测试方法如下：首先，提取NDA，按照体积比，从川贝母粉中进行DNA的提取，同不同比例伪品的NDA进行对比。其次，利用PCR-RFLP技术，在凝胶电泳后通过软件分析条带强弱来计算掺伪量。

3.2 RAPD技术

RAPD技术可以实现对基因组的动态性分析，该项技术有着操作快捷、简单、灵敏的特点，RAPD技术用于中药鉴定，可以实现对中药生药材，例如：名贵生药材、动物类生药材进行检测，查找其中的混淆品和代用品。RAPD技术存在稳定性和重复性较差的特点，导致其应用不广泛。

3.3 位点特异性PCR技术

位点特异性PCR技术是基于SNP位点的基因分型方法，该技术用于中药鉴定，可以通过PCR反应，实现中药真伪的鉴别，有着快速、操作简单的特点，可以很好地适用于中药材的鉴别。以何首乌的检测为例，位点特异性PCR技术，可以對何首乌、接近何首乌的混淆品进行ITS2序列的变异性分析，寻找变异位点，依靠特异性引物的设计，确定PCR的反应条件，使用平板凝胶电泳的方法，用毛细管凝胶电泳检测特异性PCR扩增产物，实现对何首乌的PCE分子鉴定。

3.4 ISSR技术

ISSR技术（锚定简单序列重复技术），该项技术有着多态性高、重复性好的特点，是近年来，新发展起来的一种分子标记技术，广泛地应用于中药鉴定方面。ISSR技术，使用锚定的微卫星DNA做为引物，在PCR技术中，锚定引物可以引起特定位点退火，从而使与锚定引物互补间隔不太大的重复序列间DNA片段进行PCR扩增。在对中药鸡血藤进行鉴定时，可以采用ISSR技术，具体措施如下：选择5个ISSR的随机引物，进行鸡血藤以及混伪品扩增，可以看出扩增出的DNA指纹图谱，有着明显的差异性。由此可以看出ISSR技术可以用于鸡血藤及其混伪品的辨别。

4 PCR技术鉴定方法的不足之处

PCR技术虽然可以用于中药的鉴定，但是依旧存在不足之处，例如：部分中药可能存在次生代谢产物，这会影响到DNA的提取工作，经过炮制的中药同样会影响到DNA的提取。分子生物检测技术，由于分子存在看不到摸不着的特性，需要经过大量的实验，来进行鉴定方法的探索和优化，需要测试人员具有专业的技术能力。部分中药药材，会受到产地、种植方法、栽培变异等条件的影响，影响分子标记法稳定性和重现性，需要对大量的中药样品进行验证。中药鉴定需要不断寻找准确、便捷、高效的鉴定方法，分子标记鉴别方法，虽然有着一定的科学性，但是需要经过DNA提取、PCR扩展、电泳检测，相比其他鉴定方法，更加耗时，需要进一步完善。

5 结语

综上所述，从古至今，中药在治疗中都有着很好的应用，中药的种类繁多，存在名称相似或者外形相似的情况，加上以次充好、假冒伪劣情况的存在，做好中药鉴定很有必要。在中药鉴定方法中，生物鉴定法是一种重要的鉴定方式。基于PCR技术分子生物鉴定技术可以很好地用于中药的鉴定，鉴定中药的品质以及其中的掺伪比例。常见的分子生物鉴定技术有：PCR-RFLP技术、RAPD技术、位点特异性PCR技术和ISSR技术。相较于其他鉴定方法，PCR技术鉴定方式，耗费时间较长，依旧需要不断完善，保证鉴定的快捷、高效和准确。

参考文献

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